月夜菌菌丝生长特性的初步研究
2017-04-04陆珠李玉*张波王旭
陆 珠 李 玉* 张 波 王 旭
（1 吉林农业大学，教育部食药用菌工程研究中心，吉林长春130118；2 延边农业科学院，吉林延边133000）
月夜菌（Lampteromyces japonicus）为担子菌门（Basidiomycota）伞菌纲（Agariomycetes）伞菌目（Agaricales）小皮伞科（Marasmiaceae）脐菇属（Lampteromyces）。新鲜子实体在黑暗条件下发荧光得名，因此特性又名发光菌[1]、月光菌[2]。因其毒性极强又被称为毒侧耳[3]，食后1 h 即可发病，主要症状为吐泻、腹痛、下痢频繁，眩晕、沉闷、呼吸缓慢，脉弱，心音微弱，嗜睡，重者呼吸困难等，如不及时抢救，会导致死亡[4]。月夜菌夏秋季生长于阔叶树干或倒木上，主要分布于亚洲[5]。日本学者在月夜菌的子实体中提取出月夜菌素（illudin S），它是一类倍半萜类抗生素[6]，有研究表明月夜菌素具有抗菌和抗肿瘤效果，可医治小白鼠的腹水癌[7～11]。月夜菌中提取的菌醇对霉菌具有明显的抑制作用[12，13]，月夜菌菌丝体及其丙酮粗提物对线虫有毒杀作用，是一类有应用前景的食线虫真菌资源[14]。目前对月夜菌的药理药性研究较多，但尚未有人对夜月菌的生物学特性进行研究，导致月夜菌的人工栽培方面也进展缓慢，后续研究进展缓慢。笔者对月夜菌的生物学特性进行研究，以期为后续月夜菌人工栽培提供研究基础。
1 材料与方法
1.1 供试材料供试月夜菌于2014年9月9日采于吉林省白山市抚松县露水河，通过组织分离，PDA培养基纯化获得，菌种现存放于吉林农业大学菌物研究所。
1.2 试验方法
1.2.1 不同碳源对月夜菌菌丝生长的影响 分别设置葡萄糖、蔗糖、可溶性淀粉、糊精、乳糖各20 g为碳源处理，每个处理重复3次，用打孔器打出直径为7 mm 的菌种块，接于内径为90 mm 的培养皿中央。利用十字交叉法测定菌落直径，每隔24 h 观察一次，并对菌丝生长速度、菌丝长势等菌落特征进行详细描述和记录，直至菌丝长满整个培养皿。采用WPS 表格对获得数据进行整理，用SPSS Statistics V17.0软件进行数据分析。
1.2.2 不同氮源对月夜菌菌丝生长的影响 分别设置硝酸铵、酵母浸粉、蛋白胨、尿素、氯化铵各2 g为氮源处理。每个处理重复3 次。接种、记录、测定、分析方法同1.2.1。
1.2.3 不同温度对月夜菌菌丝生长的影响 分别设置10℃、15℃、20℃、25℃、30℃六个处理。每个处理重复3次。接种、记录、测定、分析方法同1.2.1。
1.2.4 不同pH 对月夜菌菌丝生长的影响 分别设置pH 5、6、7、8、9。每个处理重复3次。接种、记录、测定、分析方法同1.2.1。
1.2.5 正交试验 以碳源、氮源、pH和温度为因素，根据四因素五水平的正交试验设计原理，设计四因素五水平的正交试验，具体方案见表1。（除温度试验外其他同1.2.1）通过极差分析获得最佳组合。
2 结果与分析
2.1 不同碳源对月夜菌菌丝生长的影响由图1可以看出月夜菌在葡萄糖、蔗糖、可溶性淀粉、糊精和乳糖6 种碳源上均能生长，在乳糖培养基上菌丝长势明显减弱。由表2可以看出菌丝生长速度除果糖较慢以外，其他处理菌丝生长速度虽有差别但相差并不大。综合菌丝长势和菌丝生长速度认为葡萄糖、蔗糖和糊精是月夜菌可利用的较好碳源。
2.2 不同氮源对月夜菌菌丝生长的影响由图2和表3 可以看出酵母浸粉是比较优良的氮源，氯化铵虽然菌丝生长速度较快但菌丝长势偏弱。蛋白胨、尿素、硝酸铵菌丝生长速度较慢，菌丝长势偏弱均不适宜作为夜月菌培养基的氮源。
表1 L25（54）正交试验设计方案
表2 不同碳源对月夜菌菌丝生长的影响
表3 不同氮源对月夜菌菌丝生长的影响
2.3 不同温度对月夜菌菌丝生长的影响由图3和表4可以看出月夜菌在10～30℃均能生长，但不宜在10～20℃温度培养。最适温度为30℃，此温度培养菌丝生长速度最快，菌丝长势最强。由此可见，温度对月夜菌菌丝生长影响较大。
图1 不同碳源培养基上月夜菌菌丝生长情况
图2 不同氮源培养基上月夜菌菌丝生长情况
图3 不同培养温度月夜菌菌丝生长情况
表4 不同培养温度对月夜菌菌丝生长的影响
表5 不同pH对月夜菌菌丝生长的影响
2.4 不同pH 对月夜菌菌丝生长的影响由图4 和表5 可以看出月夜菌在pH5.0～9.0 均能生长，pH 对夜月菌菌丝的生长影响较小，但月夜菌喜欢碱性环境，随着pH 上升菌丝长势和菌丝生长速度都有加强、加快，在pH 9.0 时菌丝生长速度最快，菌丝长势最强。
2.5 正交试验单因素试验不能考虑到交互作用的影响作用，需要进行正交试验，才能得出最终结果。试验以碳源、氮源、温度、pH组建四因素五水平的正交试验，各试验菌丝生长情况见图5。由图5可见第9 和第16 组菌丝均没有生长，试验结果直观分析见表6。由表6 可以看出，温度的极差最大为1.61，温度是影响月夜菌菌丝生长速度的最主要因素，月夜菌菌丝生长的最佳组合为温度25℃、pH5、糊精、蛋白胨。
表6 菌丝生长的正交试验结果的直观分析
图4 不同pH月夜菌菌丝生长情况
图5 不同组合菌丝生长情况
由表7 可以看出，温度的F 值最大，然后依次为pH、碳源、氮源。四因素的显著性差异大小为:温度＞pH＞碳源＞氮源，这与直观分析结果一致。
表7 菌丝生长的正交试验结果的方差分析
3 小 结
通过对月夜菌菌丝生长所需的碳源、氮源、温度和pH 的单因素试验和正交试验，得出月夜菌最佳生长条件是温度25℃、pH5、碳源为糊精、氮源为蛋白胨。
月夜菌作为一种毒菌和药用菌，研究者对其药理药性方面研究较多，药理作用方面对抗肿瘤和抑菌活性、杀虫作用研究较多[15]。但在其生物学特性、栽培配方、栽培方式等方面研究较少。对月夜菌生物学特性进行研究为更深入的研究及开发利用月夜菌提供基础研究数据。
