绞股蓝微粉发酵物对育肥猪生长性能和粪便微生物菌群的影响

段雪磊，李得鑫，巴翠晶，康建南，李 林，包永占*，史万玉*

(1.河北农业大学动物医学院,河北保定 071000;2.湖南圣雅凯生物科技有限公司,湖南湘潭 411228)



绞股蓝微粉发酵物对育肥猪生长性能和粪便微生物菌群的影响

段雪磊1，李得鑫1，巴翠晶1，康建南2，李 林2，包永占1*，史万玉1*

(1.河北农业大学动物医学院,河北保定 071000;2.湖南圣雅凯生物科技有限公司,湖南湘潭 411228)

为了研究绞股蓝微粉发酵物对育肥猪生长性能和粪便微生物菌群的影响,选取70头70日龄“杜×长×大”保育猪，随机分为7组，每组10头，试验期28d。其中，Ⅰ组为不用药对照组，Ⅱ组～Ⅳ组分别为未发酵绞股蓝微粉5、10、15g/kg剂量组，Ⅴ组～Ⅶ组分别为绞股蓝微粉发酵物5、10、15g/kg剂量组。在试验期第 1天、第28天时测定各组育肥猪的体重；每天记录各组育肥猪的采食量，腹泻猪头数；在试验期第 27天时，采集各组育肥猪的4份粪样，测定其粪便微生物菌群。结果显示，10g/kg绞股蓝微粉发酵物能显著提高育肥猪的平均日增重、平均日采食量(P<0.05)，显著降低其料肉比(P<0.05)，降低腹泻率(P>0.05)；10g/kg绞股蓝微粉发酵物可显著提高粪便中的双歧杆菌、乳酸杆菌的数量(P<0.05)，显著降低大肠埃希菌的数量(P<0.05)。研究表明，绞股蓝微粉发酵物能显著提高育肥猪的生长性能，显著促进肠道中双歧杆菌、乳酸杆菌的增殖，显著抑制肠道内大肠埃希菌的繁殖，显著优于未发酵绞股蓝微粉。

绞股蓝；生长性能；粪便微生物菌群；育肥猪

饲料中添加抗生素引发的细菌耐药性、药物残留等问题日益引起人们的广泛关注。因此，为促进畜牧业健康发展，保证动物性食品安全卫生，开发能够安全替代抗生素的绿色饲料添加剂便成为迫切要求[1]。中草药以其绿色、高效、无毒副、无残留等优点，可作为抗生素的有效替代品，逐渐被应用到养猪业生产中。

绞股蓝[Gynostemmapentaphyllum(Thunb) Makino]为葫芦科多年生草质藤本植物，具有益气健脾、化痰止咳、清热解毒等功效[2]。本试验通过在育肥猪日粮中添加不同剂量的绞股蓝微粉发酵物，探讨绞股蓝微粉发酵物对育肥猪生长性能和粪便微生物菌群的影响，为绞股蓝微粉发酵物作为新型绿色饲料添加剂在养猪业中的应用提供参考。

1 材料与方法

1 材料

1.1.1 试验用动物 体重、胎次相近的70日龄“杜×长×大”三元杂交猪70头，由中食保定畜禽发展有限公司猪场提供。

1.1.2 试验用中药 未发酵绞股蓝微粉、绞股蓝微粉发酵物，均由湖南圣雅凯生物科技有限公司负责加工生产。

1.1.3 试剂 麦康凯琼脂、BL琼脂培养基、MRS琼脂由青岛高科园海博生物技术有限公司生产(批号：20140710、20150515、20150310)。

1.1.4 主要仪器设备 分析天平(型号为MP200A)为上海第二天平仪器厂产品；医用型洁净工作台(型号为DL-CJ-2N)为北京东联哈尔仪器制造有限公司产品；旋涡混合器(型号为GL-88B)为江苏省海门市其林贝尔仪器制造有限公司产品；隔水式电热恒温培养箱(型号为PYX-DHS-BY-Ⅱ)为上海龙跃仪器设备有限公司产品；立式压力蒸汽灭菌器(型号为LDZX-50KB)为上海申安医疗器械厂产品。

1.1.5 基础日粮 试验基础日粮配方按照 NRC(1998)育肥猪营养需求并结合猪场实际情况进行配制，基础日粮组成及营养水平见表1。

1.2 方法

1.2.1 试验设计 选用70头70日龄的“杜×长×大”健康杂交猪，随机分为7组，每组10头猪，雌雄性各半。其中Ⅰ组为不用药对照组，Ⅱ组～Ⅳ组分别为未发酵绞股蓝微粉5、10、15g/kg 剂量组，Ⅴ组～Ⅶ组分别为绞股蓝微粉发酵物5、10、15g/kg剂量组。

表1 基础饲粮组成及营养水平( 风干基础)Table 1 Basic dietary composition and nutritional level(dry basis)

将未发酵绞股蓝微粉和绞股蓝微粉发酵物按上述不同比例添加到育肥猪的日粮中进行饲喂。试验期为 28d。

1.2.2 饲养管理 试验前将猪舍清洗消毒，免疫消毒和驱虫程序按猪场常规方法进行。试验猪由同一饲养员管理，保持猪舍干燥卫生、环境温湿度适宜。试验猪自由采食，自由饮水。

1.2.3 测定指标

1.2.3.1 生长性能的测定 于试验期第 1天、第28天清晨 8：00，对各组猪进行空腹称重，并记录各组猪的个体重，用以计算平均日增重；记下各组猪每天的喂料量和剩料量，计算出平均日采食量和料重比；试验期间每天察看各组猪的精神状态、粪便情况，记下各组猪每天的腹泻数，用以计算腹泻率。

1.2.3.2 粪便微生物菌群的测定 试验结束的前1天，各组随机采集4头育肥猪(公母各半)的新鲜粪便，用平板计数法进行粪便微生物菌群的测定。在洁净工作台内，称取1.0g粪便放到装有9mL的灭菌生理盐水试管中，用漩涡混合器混匀后，各管用微量移液器取1mL稀释液到9mL灭菌生理盐水试管中，以10倍比例稀释，以此类推，稀释到10-7。用微量移液器吸取1mL粪样的稀释液，接种到各鉴定培养基中，用曲波棒涂匀。每个菌种选取3个稀释梯度，每个梯度设2个重复。大肠埃希菌用麦康凯琼脂培养，梯度为10-3、10-4、10-5，37℃恒温有氧培养 24h±2h；双歧杆菌用BL琼脂培养基培养，乳酸杆菌用MRS培养基培养，梯度均为10-5、10-6、10-7，均为37℃恒温厌氧培养 48h±2h。粪便微生物菌群的数量用菌落形成单位的常用对数值lg(CFU/g)表示。

1.2.4 统计分析 各组数据使用SPSS 19.0软件进行处理，以单变量方差分析进行统计学分析，数据以平均值±标准差表示。

2 结果

2.1 绞股蓝微粉发酵物对育肥猪生长性能的影响

从表2可知，10g/kg、15g/kg绞股蓝微粉发酵物组和10g/kg未发酵绞股蓝微粉组的末重、平均日增重明显高于其他试验组(P<0.05)，且10g/kg绞股蓝微粉发酵物组的末重和平均日增重值最高；10g/kg绞股蓝微粉发酵物组的平均日采食量高于其他试验组，且10g/kg绞股蓝微粉发酵物组的料重比在所有处理组中数值最低(P<0.05)。

2.2 绞股蓝微粉发酵物对育肥猪腹泻率的影响

从表3可知，未发酵绞股蓝微粉和绞股蓝微粉发酵物对育肥猪腹泻率均有下降作用。与不用药对照组相比，绞股蓝微粉发酵物组和10g/kg未发酵绞股蓝微粉组的腹泻率在试验期第14、21、28天下降明显；且10g/kg绞股蓝微粉发酵物组的腹泻率在所有试验组中下降程度最大。

2.3 绞股蓝微粉发酵物对育肥猪粪便微生物菌群的影响

由表4可知，绞股蓝微粉发酵物组、10g/kg未发酵绞股蓝微粉组的粪便大肠埃希菌数明显低于其他试验组，差异显著(P<0.05)，且10g/kg绞股蓝微粉发酵物组的大肠埃希菌数最低(P<0.05)；绞股蓝微粉发酵物组、10g/kg未发酵绞股蓝微粉组的粪便双歧杆菌数、乳酸杆菌数明显高于不用药对照组(P<0.05)，10g/kg绞股蓝微粉发酵物组的粪便双歧杆菌数、乳酸杆菌数与5g/kg、15g/kg绞股蓝微粉发酵物组和10g/kg未发酵绞股蓝微粉组相比，差异显著(P<0.05)。

表2 不同试验组育肥猪的生长性能Table 2 Growth performance of fattening pigs in different experimental groups

表3 不同试验组育肥猪的腹泻率Table 3 Diarrhea rate of fattening pigs in different experimental groups %

表4 不同试验组育肥猪的粪便微生物菌群Table 4 Fecal microbial flora of fattening pigs in different experimental groups CFU/g

3 讨论

3.1 绞股蓝微粉发酵物对育肥猪生长性能的影响

中草药含有多种生物活性成分，能够改善饲料营养，刺激动物食欲，促进动物健康生长，提高动物体重[3]。益生菌主要包含芽胞杆菌[4]、乳酸杆菌[5]、酵母菌[6]等菌种，能够平衡动物消化道菌群，提高动物抗病力、代谢能力、消化吸收能力，起到防病与促生长的作用[7]。益生菌与中草药之间存在协同作用，益生菌能够促进中草药的吸收和利用，而中草药在口服后，需经过消化道微生物的作用后，才能被肠道选择性吸收[8]。本试验发现，与其他试验组相比，10g/kg绞股蓝微粉发酵物能显著提高育肥猪平均日增重、平均日采食量，降低料重比。因此，10g/kg绞股蓝微粉发酵物能显著提高育肥猪的生长性能。

3.2 绞股蓝微粉发酵物对育肥猪腹泻率的影响

研究发现，益生菌能有序地定植于黏膜、皮肤等表面或细胞之间而形成生物屏障，起到占位保护、争夺营养、互利共生或拮抗作用，阻止病原菌的入侵、黏附、定居和增殖，从而对有害菌的繁殖产生抑制作用[9]。绞股蓝含有皂苷、多糖、黄酮等活性成分，具有一定的抗菌活性[10-11]。绞股蓝微粉发酵物能有效降低育肥猪的腹泻率，可能因益生菌的自身抗病原、抗感染活性与绞股蓝的抗菌活性相结合，能有效抑制致病菌的生长，增强猪自身机体的免疫功能，从而降低了育肥猪的腹泻率。本试验发现，与其他试验组相比，10g/kg绞股蓝微粉发酵物在降低育肥猪腹泻率上作用效果最好，而各组间育肥猪腹泻率差异不显著，可能与各组样品数少、用药时间短等因素有关。

3.3 绞股蓝微粉发酵物对育肥猪粪便微生物菌群的影响

当动物机体受到各种不良因素的影响，优势菌群会遭到破坏，肠道微生态平衡失调，病原微生物大量繁殖，造成机体发病[12]。有研究报道，益生菌与中草药配合使用既能促进益生菌的增殖，又能提高中草药吸收利用率[13-14]。在本试验中，与其他试验组相比，10g/kg绞股蓝微粉发酵物能显著提高育肥猪粪便中双歧杆菌和乳酸杆菌的数量，显著减低粪便中大肠埃希菌的数量，有效改善育肥猪肠道微生物菌群，提高肠道消化吸收能力，促进猪的健康生长。

[1] 肖宏德，肖运才，何熙贞，等．用益生菌制剂代替断奶仔猪日粮中抗生素的研究[J]．动物医学进展，2014,35(3)：53-58．

[2] 康 佳．超微发酵对绞股蓝促免作用的影响[D]．河北保定：河北农业大学，2014．

[3] 姚雪敏．中药饲料添加剂在生猪生产中的研究与应用[J]．畜牧兽医杂志，2013，32(2)：51-52．

[4] Zhang Q，Yu H，Tong T，et al． Dietary supplementation ofBacillussubtilisand fructooligosaccharide enhance the growth，non-specific immunity of juvenile ovate pompano，Trachinotusovatusand its disease resistance againstVibriovulnificus[J]．Fish Shellfish Immunol，2014，38(1)：7-14．

[5] Giri S S，Sukunaran V，Sen S S，et al．Effects of dietary supplementation of potential probioticBacillussubtilisVSG1singulary or in combination withLactobacillusplantarumVSG3or/andPseudomonasVSG2on the growth，immunity and disease resistance of Labeo rohita[J]．Aqua Nutr，2014，20(2)：163-171．

[6] Prasad L，Nayak B B，Srivastava P P，et al．Use of Brewer’s yeastSaccharomycescerevisiaeas growth promoter in giant freshwater prawn(MacrobrachiumrosenbergiiDe man) post larvae[J]．Turkish J Fish Aqua Sci，2013，13：447-452．

[7] 孙朋朋，宋春阳．益生菌的生物学功能及其在仔猪生产中的应用[J]．饲料博览，2014(11)：33-37．

[8] 吕 鑫．黄芪多糖和益生菌对海兰褐蛋鸡生产性能和免疫功能的影响[J]．饲料博览，2014(12)：24-28．

[9] 王 爱，谭树华．益生菌在养猪生产上的应用研究现状[J]．科学种养，2013(10)：46-47．

[10] 孟素香，曹 健，张慧茹，等．绞股蓝内生真菌对金黄色葡萄球菌的抗菌机制[J]．中国抗生素杂志，2015，40(4)：268-273．

[11] 张慧茹，孟素香，曹 健，等．绞股蓝内生真菌抗大肠埃希氏菌抗菌机制的研究[J]．微生物学通报，2015，42(1)：157-162．

[12] 郭东清，刘艳成，陈立鹤，等．合生元作为饲料添加剂在仔猪生产中的应用[J]．动物医学进展，2014，35(1)：116-121．

[13] 董开忠，高永盛，秦宁恩加，等.参苓白术散对抗生素引起肠道菌群失调小鼠的影响[J]．中国实验方剂学杂志，2015，21(1)：154-157.

[14] 任 杰，曹日亮，王红妍，等．中药添加剂对断奶仔猪肠道菌群的影响 [J]．中国猪业,2013(7)：51-54．

Effects of Fermented Gynostemma Superfine Powder on Growth Performance and Microbial Flora in Feces of Fattening Pigs

DUAN Xue-lei1,LI De-xin1,BA Cui-jing1,KANG Jian-nan2,LI Lin2,BAO Yong-zhan1,SHI Wan-yu1

(1.CollegeofVeterinaryMedicine,AgriculturalUniversityofHebei,Baoding,Hebei,071000,China;2.HunanShengyakaiBiologicalTechnicalCo.,Ltd,Xiangtan,Hunan,411228,China)

To investigate the effects of fermented ultrafine powder ofGynostemmaon grow performance and microbial flora in feces of fattening pigs,a total of 70crossbred ( Duroc×Landrace×Yorkshire) nursery pigs at 70days were selected and randomly divided into 7groups,10pigs each,for 6-week-trial.The piglets in each group had statistically no significantly different body weight.Group Ⅰ was the control group,receiving no herbs.Groups Ⅱ-Ⅳ were fed with 5，10，15g/kg unfermentedGynostemmasuperfine powder in diet.Pigs in group Ⅴ-Ⅶ were given with 5，10，15g/kg fermented ultrafine powder ofGynostemmain diet,respectively.The body weights of pigs were determined in trial 1d,28d; feed intake and diarrhea counts of fattening pigs were recorded daily.4fecal samples of fattening pigs were gathered,and its microbial flora in feces were measured in trail 27d.The results indicated that 10g/kg fermented ultrafine powder ofGynostemmacould increase significantly the average daily feed intake(ADFI),average daily gain(ADG) of fattening pigs(P<0.05),and decrease significantly pig's feed/gain(F/G),reduce pig's diarrhea rate，reduce the diarrhea rate(P>0.05); 10g/kg fermented ultrafine powder ofGynostemmacould increase significantly the number ofBifidobacteriumandLactobacillusin feces of fattening pigs(P<0.05),and decrease significantly the number ofEscherichiacoil(P<0.05).The results suggested that the fermented ultrafine powder ofGynostemmacould significantly increase the growth performance of fattening pigs,and significantly promote the proliferation of intestinalBifidobacterium,Lactobacillus,significantly inhibit the reproduction ofEscherichiacoilin the gut,and have significantly better results than the unfermentedGynostemmasuperfine powder.

Gynostemma; growth performance; microbial flora in feces; fattening pig

2015-07-17

国家公益性行业(农业)科研专项“中兽医关键技术研究与示范(201403051)”子课题“猪重大瘟病辨证论治关键技术研究与示范(201403051-08)”

段雪磊(1988-)，男，河北沙河人，硕士研究生，主要从事中药药理学研究。 *通讯作者

S853.75

A

1007-5038(2016)01-0063-05