紫外分光光度法测定槲皮素含量方法的建立

陈志刚，山光强，谭玉琴，李啟皓，雷红宇，苏建明

(湖南农业大学动物医学院，湖南长沙 410128)



紫外分光光度法测定槲皮素含量方法的建立

陈志刚，山光强，谭玉琴，李啟皓，雷红宇，苏建明*

(湖南农业大学动物医学院，湖南长沙 410128)

为构建一种简便、高效的槲皮素原料药含量的测定方法，采用紫外分光光度法对槲皮素原料药进行含量测定，并进行方法学考察。结果表明，紫外分光光度法在374nm处测定的槲皮素原料药平均含量为97.97%，标准曲线方程为y=0.0074x-0.0067，R2=0.9997，在20.8μg～140μg范围内有良好的线性关系，平均加样回收率为100.88%，RSD为0.96%(n=6)，其精密度较好，符合方法学要求。说明该法适用于槲皮素原料药含量测定，是一种经济、简便与高效的质量分析方法。

槲皮素；原料药；含量；紫外分光光度法

槲皮素是一种黄酮类化合物，也被称为栎精、槲皮黄素，主要存在于槐米、桑寄生及仙鹤草等植物，具有抗癌、抗氧化、抗炎、抗菌与心血管系统保护作用等功能[1]。国内研究的槲皮素制剂主要有亚微乳制剂[2]、固体脂质纳米粒[3]等。但目前对槲皮素原料药的定量分析研究鲜见。药物含量测定方法亦主要有高效液相色谱法、紫外分光光度法和薄层色谱法等。其中，尽管高效液相色谱法检测限低、灵敏度高，但该方法检测设备成本高、耗时、操作步骤繁杂[4]。而紫外分光光度法具有操作简单、成本低等特点。所以，本研究以此为切入点，采用紫外分光光度法对槲皮素原料药进行含量测定，并确定其测定方法的可行性，为槲皮素原料药在制剂过程中的质量分析与槲皮素原料药在药理研究中的定量分析提供一种简便、有效的分析方法。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 试剂 槲皮素原料药、槲皮素标准品(HPLC≥98%，批号：Y26D5Y1)购于上海源叶生物科技有限公司；无水乙醇、分析纯；试验所用水为超纯水。

1.1.2 仪器 202型电热恒温干燥箱为北京中兴伟业仪器有限公司产品；AUW320电子分析天平为SHIMADZU公司产品；UV6000PC紫外可见分光光度计为上海元析仪器有限公司产品。

1.2 方法

1.2.1 槲皮素标准品溶液制备 精密称量槲皮素标准品0.0208g，以700mL/L乙醇溶液溶解，定容于100mL容量瓶，得浓度为208μg/mL槲皮素标准品溶液，冰箱4℃保存，备用。

1.2.2 槲皮素原料药供试品溶液的制备 称取0.0200g槲皮素原料药，加入700mL/L的乙醇溶液，搅拌均匀，定容至100mL，得槲皮素原料药供试品溶液，保存备用。

1.2.3 最大吸收波长的确定 分别吸取槲皮素原料药供试品溶液0.5mL与槲皮素标准品溶液1.0mL，以700mL/L乙醇溶液加至10mL，以700mL/L乙醇溶液为空白调零溶液，在300nm～600nm范围内扫描。根据槲皮素原料药供试品溶液与槲皮素标准品溶液的最大吸收波峰，确定测定槲皮素原料药的最大吸收波长。

1.2.4 标准曲线的绘制 依次吸取0、0.1、0.2、0.3、0.4mL和0.5mL槲皮素标准品溶液于10mL容量瓶中，700mL/L乙醇溶液加至10mL，700mL/L乙醇溶液为调零溶液，在确定的最大吸收波长下，测定吸光度。以槲皮素标准品溶液中的槲皮素质量x(μg)为横坐标，吸光度y为纵坐标，绘制标准曲线，拟合线性回归方程。

1.2.5 槲皮素含量测定 量取0.2mL供试品溶液至10mL容量瓶中，以700mL/L乙醇溶液补足至10mL，700mL/L乙醇溶液作为空白调零溶液，在确定的波长下，测定吸光度，共平行3次。将测定的吸光度代入线性回归方程，计算槲皮素原料药的含量。

1.2.6 精密度试验 精密量取一定量槲皮素标准品溶液6份，按测定方法1.2.5项下方法分别测定吸光度，计算平均吸光度与RSD。

1.2.7 加样回收率试验 取测得含量的槲皮素原料药供试品溶液6份各0.1mL于10mL容量瓶中，其中3份加入0.1mL槲皮素标准品溶液，另外3份加入0.2mL槲皮素标准品溶液，混匀，按测定方法1.2.5测定吸光度，计算加样回收率、平均加样回收率与RSD。

2 结果

2.1 最大吸收波长的确定

紫外分光光度法的全波长扫描结果见图1，槲皮素标准品溶液在374nm处有最大吸收峰，槲皮素原料药供试品溶液亦在374nm处有最大吸收峰。而且，宗淑梅等[5]在测定槲皮素含量时扫描得到最大吸收波长同样为374nm。可见紫外分光光度法适合槲皮素原料药的含量测定，且最佳测定波长为374nm。

图1 槲皮素标准品和供试品曲线
Fig.1 The standard and sample curves of quercetin

2.2 标准曲线的绘制

紫外分光光度法在374nm波长下测定的标准曲线见于图2。线性回归方程为y=0.0074x-0.0067，R2=0.9997。试验结果表明，槲皮素在20.8μg ～140μg范围内呈现良好的线性关系。

图2 槲皮素标准曲线
Fig.2 The standard curve of quercetin

2.3 槲皮素含量测定结果

称取质量为0.0206g槲皮素原料药，溶解，定容于100mL，采用紫外分光光度法在374nm的波长下测得槲皮素原料药供试品溶液含量如表1所示。

表1 槲皮素原料药含量测定Table 1 Determination of quercetin contents in raw drugs

2.4 精密度试验结果

精密度试验结果见表2，吸光度平均值为0.300，RSD为0.54%，符合精密度试验要求，说明该方法具有良好的精密度，结果准确。

表2 精密度试验结果Table 2 The results of precision experiments

2.5 加样回收率

加样回收率试验结果见表3。平均回收率为100.88%，RSD为0.96%，符合加样回收率要求，说明该方法测定的结果数据准确度较好。

表3 加样回收率试验结果Table 3 The results of recovery test

3 讨论

紫外分光光度法是一种依托可见-紫外分光光度计对某些物质进行定性和定量分析的方法。紫外分光光度法在原料药的含量测定、原料药在制剂成型过程中的含量测定以及制剂后的含量测定等药物质量控制环节中使用较多。徐长举等[4]研究表明，紫外分光光度法测定恩诺沙星原料药含量，符合稳定性、重复性等方法学考察要求。杨静等[6]研究发现，紫外分光光度法测定ZLR-8原料药，具有简单、快速、准确的特点。白波等[7]采用紫外分光光度法建立了甲基丁香酚原料药含量测定的方法。由于槲皮素原料药作为主药成分，含量高，杂质所占比重小，对含量测定的紫外分光光度法产生的干扰作用较小。另外，槲皮素具有吸收紫外光的特性。而且，相较于高效液相色谱法等含量测定方法，紫外分光光度法操作简便、节省时间、仪器价格较低。本试验结果表明，紫外分光光度法在374nm下测定槲皮素原料药含量时，标准曲线为y=0.0074x-0.0067，R2=0.9997，测得其平均含量为97.97%，精密度及加样回收率均良好，符合方法学考察要求。所以，选择紫外分光光度法测定槲皮素原料药具有一定的可行性，可为槲皮素原料药的制剂以及药理作用研究等提供定量的分析手段，便于槲皮素的深入研究与利用。

[1] 孙 涓，余世春．槲皮素的研究进展[J]．现代中药研究与实践，2011，25(3)：85-88．

[2] 刘 芸，赵 鹏，张丽华，等．槲皮素亚微乳的制备及特性表征研究[J]．中成药，2014，36(5)：1077-1080．

[3] 李厚丽，翟光喜，祝伟伟，等．槲皮素固体脂质纳米粒的制备及小鼠口服吸收研究[J]．中国药学杂志，2008，43(6)：435-438．

[4] 徐长举，杨雪峰，柳东阳，等．紫外分光光度法测定恩诺沙星原料药含量的试验[J]．黑龙江畜牧兽医，2014(5)：191-193．

[5] 宗淑梅，王海英，沈丽霞．槐米中槲皮素的提取与含量测定[J]．时珍国医国药，2013，24(2)：308-309．

[6] 杨 静，罗 俊，刘文英，等．紫外分光光度法测定氧氮供体型非甾体抗炎药ZLR-8原料药的含量[J]．西北药学杂志，2014，29(6)：581-583．

[7] 白 波，江秀慧，付明哲，等．紫外分光光度法测定甲基丁香酚含量方法的建立[J]．动物医学进展，2011，32(11)：73-75．

Determination of Quercetin Content in Raw Drug by Ultraviolet Spectrophotometry

CHEN Zhi-gang,SHAN Guang-qiang,TAN Yu-qin,LI Qi-hao,LEI Hong-yu,SU Jian-ming

(CollegeofVeterinaryMedicine，HunanAgriculturalUniversity,Changsha,Hunan,410128，China)

In order to build a simple and efficient method to assay the quercetin content in raw,the ultraviolet spectrophotometry was used and its methodology is studied.The results showed that the average content of quercetin is 97.97%,and the standard curve and regression equation that is y=0.0074x-0.0067(r=0.9997) were established by the ultraviolet spectrophotometry.There is a good linear relationship between 20.8μg to 140μg.And the average recovery of the method is 100.88%,and RSD is 0.96%(n=6).The results of methodological study showed that the method meets the needs of the determination,which is a good analytical method the assay of quercetin content in raw drug.

quercetin；raw drug；content；ultraviolet spectrophotometry

2015-06-01

湖南省研究生科研创新项目(CX2015B257)；湖南农业大学大学生科技创新基金项目

陈志刚(1992-)，男，湖南攸县人，硕士研究生，主要从事天然植物功能成分研究。*通讯作者

O625.32

B

1007-5038(2016)01-0122-03