用聚乙二醇-600（PEG-600）制作小鼠整体标本

2016-11-15张筱雨罗继龙白志坤

中国兽医杂志 2016年4期

关键词：福尔马林塑化聚乙二醇

张筱雨，陈　宇，高　莹，徐　博，罗继龙，白志坤

（东北农业大学动医学学院，黑龙江哈尔滨 150030）

用聚乙二醇-600（PEG-600）制作小鼠整体标本

张筱雨，陈宇，高莹，徐博，罗继龙，白志坤

（东北农业大学动医学学院，黑龙江哈尔滨 150030）

为了探索替代福尔马林制作标本的基本方法，采用聚乙二醇（PEG）浸渍法制作经久耐用、适于兽医教学的解剖标本。其基本方法是先将标本在福尔马林固定后，经过流水冲洗，在梯度聚乙二醇-600中浸渍。通过使用这种方法制作出了小鼠整体标本（PEG浸渍的标本），可以存储在塑料袋或箱子中，具有抵抗真菌和细菌的功效，而且不会对皮肤产生刺激性，已在兽医解剖教学中成功地使用。

聚乙二醇（PEG）；标本；教学；兽医解剖

自甲醛的发明以来，解剖标本的永久的存储几乎没有什么困难，只要将标本储存在大型储罐内，盖子拧紧，避免甲醛的蒸发就可。但由于甲醛的毒性和致癌作用，在使用标本前标本必须用流水冲洗24 h，这促使研究人员不断地尝试其他的无副作用的替代物质［1-2］。目前，商业化生产耐用的解剖教学标本的方法主要为生物塑化［3］。但由于其设备和所需药品较为昂贵，许多解剖学教学机构一直在寻找比生物塑化更便宜、耐用，可行、用于生产的解剖标本制作方法。其中的一种替代方法就是聚乙二醇（PEG）保存法，其与生物塑化标本相比因具有更容易制作又便宜。自20世纪七十年代以来，已被越来越广泛用于制作组织切片。

现介绍我们使用聚乙二醇（PEG）制成的小鼠整体解剖标本的一点经验。

1　材料与方法

实验动物昆明系小鼠由哈尔滨医科大学实验动物中心提供，经乙醚深度麻醉致死，并向腹腔内注射少量福尔马林溶液后，浸泡于5%福尔马林溶液中数天或数周。反复研究表明，福尔马林渗入组织的速度大约是每天1 cm，以此来估计固定的持续时间约为1周。取出小鼠用流水冲洗24 h后，根据教学需求仔细解剖，并使其暴露一侧腹腔器官，并对器官清空和清洗。然后将小鼠放于3%过氧化氢溶液中漂白24 h。漂白后的标本要再次用流水冲洗24 h之后，放于25%～100%梯度PEG-600（聚乙二醇-600），光复精细化工研究所，天津）中浸渍。为了达到更好的浸渍效果，可用不锈钢吊篮将小鼠浸没在PEG溶液中。在每种浓度中浸渍时间可以控制在7 d左右，直到100%PEG时可以延长时间。当没有更多的水流动时，说明完成脱水。浸渍时，PEG溶液可更换数次。在完全饱和后，取出容器中的标本，并小心地用吸水纸擦去过量的PEG溶液，将其放置在滤纸上，在避光房间干燥数天。

2　结果

图1　小鼠整体PEG浸渍标本

通过使用聚乙二醇-600浸渍法，高品质的小鼠整体标本被制作出来，如图1所示。小鼠标本毛皮保持着原有的光滑色泽，内脏清晰。干燥后，标本变软。如此浸渍的样本外观类似于它们的天然状态，栩栩如生，适合在教学过程中使用。经过长时间放置并未发现腐败和虫蛀的现象，因而无需额外的保养。这种方法的另一大优点是处理时间较短，标本最快可以在2个月内完成。生物塑化标本的制作时间，则较长。PEG标本保存在一个开放的环境中，一段时间后他们就会吸湿，所以它们不可能完全干燥。建议制作好的标本放在塑料袋中储存最合适，在标本用于教学后，应尽快重新包装。

3　讨论

动物尸体在动物医学及人医教学中有着不可替代的作用，但教学人员和学生一直受到防腐剂甲醛的侵害，因此找到好的可替代的方法是人们长期的期望［4-5］。PEG浸渍标本和生物塑化标本是保存标本的两种不同方法，两者有区别又有共同之处。这两种技术之间的差别是由不同材料确定的。PEG是用醇（聚乙二醇），而生物塑化则用硅胶；PEG浸渍过程中，醇不会发生聚合反应，因此标本是软的，而硅胶会发生聚合反应，在塑化中会变硬；使用哪种方法很大程度上决定于标本制作的目的。在一般情况下，当需要比较灵活或制备可以扩大的中空器官时，可以使用PEG，例如PEG浸渍关节标本，使其灵活，可移动。同时，出于教学目的以及更好表现邻近结构，可以用水彩或油画颜料上色。PEG浸渍的中空脏器可以被打开，这样你就可以看一下里面的成分，尤其对于展示狗、猫、猪或马的腹腔的黏膜的不同外观特别有用。此外，由于PEG-浸渍样品可切片，可以用于组织学研究观察［6］。如果在浸渍前，做各种不同的预处理，可以使样品满足各种使用目的。例如，血管和淋巴管可填充有颜色的树脂，使血管和神经的分布可以清晰可见。不同的体腔可以注入不同颜色，以更好的展示其分布方向。如果PEG浸渍标本被妥善处理的话，是可能长期使用的，因为它们能抵抗真菌和细菌的能力。PEG浸渍标本在外观和形状上与生物塑化标本相同，但PEG技术比生物塑化标本便宜得多，并且需要较少的技术设备。一瓶为500 mL PEG-600成本仅为32元，而且PEG液体可循环使用。要想回收PEG的话，只需要将混合物加热到90℃，排出水蒸汽即可。