红砂叶片和长叶红砂叶片中总黄酮含量测定△

钮树芳　石松利　杨　丹（包头医学院药学院　包头　014040）

红砂叶片和长叶红砂叶片中总黄酮含量测定△

钮树芳石松利*杨丹（包头医学院药学院包头014040）

目的：提取红砂叶片和长叶红砂叶片中总黄酮并测定含量。方法：采用NaNO2-Al（NO3）3-NaOH法显色，芦丁为对照，紫外-可见分光光度法在510nm处测定。结果：红砂叶片和长叶红砂叶片中总黄酮的含量分别为19.72mg/g和17.69mg/g。回归方程为A= 12.935c+0.0003，相关系数r为0.9995，在0～60μg/mL范围内线性关系良好，回收率为95.83%～104.2%（n=9），精密度、稳定性、重现性良好。结论：该法简便，准确，可作为红砂叶片和长叶红砂叶片中总黄酮的含量测定方法。

红砂叶片 长叶红砂叶片 总黄酮 含量测定

红砂（Reaumuria Soongorica）又名琵琶柴，长叶红砂（Reaumuria trigyna）又名黄花红砂、黄花琵琶柴，是柽柳科（Tamaricaceae）红砂属（Reaumuria）的耐盐强旱生小灌木［1］，亚洲中部亚区东阿拉善-西鄂尔多斯特有种［2］，起源于第三纪，为古地中海变迁的残遗珍稀植物，学术界称为“活化石”，我国特有，被列为国家重点保护植物［3］和内蒙古自治区珍稀濒危植物［4］。它们在植物分类、植物区系及系统演化［5］、生物学和生态学［6～8］等的研究上具有重要的价值，是集药用、饲用、生态、经济、社会效益为一体的优良的木本植物，青绿时粗蛋白质和粗脂肪含量较高，枝叶和果实可入药，有祛湿止痒的功效，用于治疗湿疹-皮炎，植丛是有“沙漠人参”之称的盐生肉苁蓉的主要寄主之一。

湿疹皮炎病因复杂，病情易反复。近年来，对抗菌治疗湿疹皮炎进行了研究，免疫调节剂的使用有显著疗效［9］。但是传统用药易引起局部皮肤萎缩、色素异常等不良反应［10］。黄酮类化合物广泛存在于植物的花、叶和果实中，具有抗菌抗病毒、免疫激活等多种生物活性［11］。研究表明治疗湿疹皮炎的中草药中黄酮［12］具有抗菌、消炎、抗过敏及增强免疫力的作用。红砂和长叶红砂长期以来作为治疗湿疹皮炎的单味中草药使用，目前鲜见黄酮含量测定的报道。因此，本文采用紫外-可见分光光度法，对中药材红砂和长叶红砂中总黄酮进行提取和含量测定，为其治疗湿疹皮炎的药效成分、药理机制研究以及对药材的质量评价提供科学依据。

1　仪器、药品和试剂

1.1仪器：T6-新悦紫外可见分光光度计（SHIMADZUCorporation）；数显恒温水浴锅HH-6（常州澳华仪器有限公司）；JYI201电子天平（上海明桥精密科学仪器有限公司）；索氏提取器。

1.2药品和试剂：红砂和长叶红砂（采自内蒙古乌海市）；芦丁标准品（MUST-13040302）；石油醚，乙醇，亚硝酸钠，硝酸铝，氢氧化钠（所有试剂为分析纯）；水为去离子水。

2　方法和结果

2.1供试品溶液的制备：将红砂叶片和长叶红砂叶片置于60℃烘箱中烘干至恒重，研细，分别精密称取3g，用滤纸包好，置于索氏提取器中，用石油醚80mL，60℃～90℃水浴回流脱脂2次，每次2h，弃石油醚提取液，挥干石油醚后，用80%乙醇回流提取2次，每次2h，至溶液无色，另用少量80%乙醇多次洗涤，并入提取液中，转移至200mL容量瓶中，加80%乙醇，定容，摇匀，即得红砂和长叶红砂总黄酮供试品溶液。

2.2对照品溶液的制备：精密称取芦丁标准品20mg，用80%乙醇溶解并定容至100mL容量瓶中，配制成0.2mg/mL溶液，作为标准品备用。

2.3测定波长的确定：精密移取芦丁标准品溶液和两种总黄酮样品溶液各1mL，分别置于10mL容量瓶中，加5%亚硝酸钠溶液0.3mL，摇匀，放置6min，加10%硝酸铝溶液0.3mL，摇匀，放置6min，加4%氢氧化钠4mL，然后加蒸馏水定容至刻度，摇匀，放置15min。以相应试剂为空白，在波长200～600nm范围内扫描。图谱显示在510nm处芦丁标准品溶液有最大吸光度值，两种总黄酮样品溶液均有吸收，因此确定510nm为最大吸收波长。

2.4标准曲线的绘制：精密移取芦丁对照品0.0、0.4、1.0、1.4、1.8、2.4、3.0mL分别置于10mL容量瓶中，按照“2.3”项下方法显色，在510nm波长下测定各溶液吸光度，以溶液浓度（c）为横坐标，吸光度（A）为纵坐标绘制标准曲线，如图1。回归方程为A= 12.935c+0.0003，相关系数r为0.9995。

2.5稳定性试验：精密移取长叶红砂提取液1mL，按照“2.3”项下方法显色，于0min、15min、30min、45min、60min、70min、80min、90min、120min测定吸光度，以0～120min吸光度值计算RSD为4.59%，以40～120min吸光度值计算RSD为0.22%，结果表明，显色后的供试液在40～120min内稳定性良好。

2.6精密度试验：精密移取1mL对照品溶液，按“2.3”项下方法显色后，在510nm处测定吸光度值，平行测定6次，以吸光度值计算RSD值为0.48%，结果表明精密度良好。

2.7重复性试验：精密称取长叶红砂样品粉末3g，6份，按“2.1”项下方法制备供试品溶液，按“2.3”项下方法显色后，在510nm处测定吸光度值，以吸光度值计算RSD值为0.67%，结果表明重复性良好。

2.8加样回收试验：精密移取9份长叶红砂总黄酮提取液各1mL于10mL容量瓶中，分为3组，分别加入0.8、1.0、1.2mL对照品溶液，按照“2.3”项下方法显色并在510nm处测量吸光度值，回收率为95.83%～104.2%。结果见表1。

2.9样品含量测定：精密称取3份红砂和长叶红砂样品粉末各3g，按“2.1”项下方法制备供试品溶液。分别精密移取1mL，并按“2.3”项下方法显色后，采用紫外可见分光光度法测定吸光度值（A），由回归方程求出样品溶液中总黄酮浓度，然后计算总黄酮含量，结果见表2。

表1　加样回收率试验结果

表2　红砂叶片和长叶红砂叶片总黄酮含量（±s）

表2　红砂叶片和长叶红砂叶片总黄酮含量（±s）

样品　总黄酮含量（mg/g）红砂叶片　19.72±0.14长叶红砂叶片　17.69±0.16

3　讨论

实验结果表明红砂叶片和长叶红砂叶片中含有丰富的黄酮类化合物，含量分别为19.72mg/g和17.69mg/g。该方法操作简单、快速、灵敏，显色稳定，回收率高，重复性好，为红砂和长叶红砂中总黄酮含量测定提供了一种可靠方法，为研究红砂和长叶红砂药效与总黄酮之间的关系提供有效的数据，同时为红砂和长叶红砂药材的质量评价以及资源的合理开发利用提供了参考。

［1］中国科学院内蒙古宁夏综合考察队.内蒙古植被［M］.北京：科学出版社，1985：172，647.

［2］赵一之.鄂尔多斯高原的维管植物［M］.呼和浩特：内蒙古大学出版社，2006.

［3］傅立国.中国植物红皮书-稀有濒危植物（第1册）［M］.北京：科学出版社，1992.

［4］杨持，王迎春，刘强，等.四核木保护生物学［M］.北京：科学出版社，2002：147.

［5］赵一之.长叶红砂植物区系地理分布研究［J］.内蒙古大学学报（自然科学版），1996，7（3）：369-370.

［6］周健华，王迎春，石松利.长叶红砂主要水分参数随季节和生境的变化［J］.应用生态学报，2009，20（11）：2624-2631.

［7］周红兵，王迎春，石松利，等.NaCl胁迫对盐生植物长叶红砂幼苗内源激素的影响 ［J］.内蒙古大学学报（自然科学版），2010，41（5）：531-535.

［8］薛焱，王迎春，王同智.盐胁迫对濒危植物长叶红砂抗氧化系统的影响［J］.中国沙漠，2012，32（6）：1669-1673.

［9］王金勇.中药联合复方甘草酸苷治疗湿疹疗效观察［J］.现代中西医结合杂志，2009，18（21）：2537-2538.

［10］訾慧.中药降香研究进展［J］.辽宁中医学院学报，2003，5（2）：90-91.

［11］肖省娥，林励.不同来源的降香药材中总黄酮含量测定［J］.基层中药杂志，2000，14（6）：12-13.

［12］袁小英，毕淑英，马红雨，等.外用苦豆子油擦剂对非特应性慢性湿疹皮炎金黄色葡萄球菌及马拉色菌的影响［J］.河北医药，2013，35（11）：1707.

Determination Content of the Total Flavonoids in the Leaves of Reamuria Soongorica and Reaumuria trigyna

Niu Shufang Shi Songli*Yang Dan（Department of Pharmacy，Baotou Medical College，Baotou，014040，China）

Objective:To extract and determine the content of total flavonoids in the leaves of Reaumuria Soongorica and Reaumuria trigyna.Methods:Total flavonoids of the samples were determined at 510nm by UV spectrophotometry with rutin as standard control. Results:The contents of total flavonoids in the leaves of Reaumuria Soongorica and Reaumuria trigyna were 19.72mg/g and 17.69mg/g. The regressive equation was A=12.935c+0.0003（r=0.9995），which had a good linear relationship in the range of 0～60μg/mL.The recovery were 95.83%～104.2%（n=9）.Conclusion:the method is simple，rapid，accurate and which could be used as a means to measure total content of flavonoids in the Reaumurid Soongorica and Reaumuria trigyna.

Reamuria Soongorica Reaumuria trigyna Total Flavonoids Determination of Content

R927.2

A

1672-8351（2016）02-0003-02

国家自然科学基金（81102760）资助。