复方双氯芬酸钠注射液的解热镇痛药效试验

李　晶，吴　清，李渤南（.烟台绿叶动物保健品有限公司，山东烟台64003；.烟台市畜牧兽医工作站，山东烟台6400）



复方双氯芬酸钠注射液的解热镇痛药效试验

李晶1，吴清1，李渤南2
（1.烟台绿叶动物保健品有限公司，山东烟台264003；2.烟台市畜牧兽医工作站，山东烟台264001）

摘要：为了考察复方双氯芬酸钠注射液的解热镇痛效果，方法一：选取基础体温正常的健康新西兰兔，除空白对照组外，其余各组均静脉注射60 EU/kg体重的细菌内毒素进行致热，致热成功后开始给药，观察药物对发热新西兰兔的解热效果；方法二：选取正常小鼠，各组于给药后30 min腹腔注射0.5%的冰醋酸溶液0.2 mL，注射后立即观察1 5min内小鼠的扭体反应次数，计算扭体反应的抑制率。结果表明：复方双氯芬酸钠注射液起效快，作用时间长，对细菌内毒素所致新西兰兔发热的解热效果和对醋酸所致小鼠的镇痛效果，均优于对乙酰氨基酚注射液。

关键词：复方双氯芬酸钠注射液；解热；镇痛

复方双氯芬酸钠注射液（Compound Dielofe⁃nae Sodium injection），是由双氯芬酸钠和对乙酰氨基酚组成的复方制剂，为强效的兽用解热镇痛药物。其中，双氯芬酸钠为苯基乙酸衍生物，通过抑制体内环氧化酶途径而抑制花生四烯酸的合成，从而起到解热、镇痛、抗炎作用；特点为药效强、不良反应轻、剂量小、个体差异小。对乙酰氨基酚是临床上最常用的解热镇痛药之一，其特点是解热作用强大，适用于缓解发热和轻度至中度疼痛症状，但该品服用剂量较大，若长期或超剂量服用，有引发肝肾损害的危险。两药具有协同作用，可以减少临床用药剂量，降低不良反应并增强疗效[1-4]。

解热镇痛药的药理药效学研究中，用于制造动物发热模型的方法很多，其中新西兰兔静脉注射大肠杆菌内毒素致热法升温快、持续时间短，适于观察药物的解热作用[5]；“扭体反应”是给小鼠腹腔注射醋酸溶液等所引起的一种刺激腹膜的持久性疼痛，且间歇发作的运动反应，表现为腹部收缩、内凹、腹前壁紧贴笼底、臀部歪扭和后肢伸张，呈一种特殊姿势，常用作筛选镇痛药的方法[1-3]。

1　材料

1.1试验仪器电子计重秤，上海三积分电子有限公司；漩涡混合仪，海门市其林贝尔仪器制造有限公司；实验室pH计，METTLER TOLEDO；ZRY-2D智能热原仪，天津市天大天发科技有限公司；注射器等。

1.2试验试剂细菌内毒素生物指示剂，规格：5 000 EU/支，批号：20120504，湛江安度斯生物有限公司；氯化钠，规格：500 g，批号：20130528，天津市天大化工实验厂；氢氧化钠，规格：500 g，批号：20131218，国药集团化学试剂有限公司；磷酸二氢钾，规格：500 g，批号：F20130608，国药集团化学试剂有限公司；冰醋酸，规格：500 mL，批号：20140831，国药集团化学试剂有限公司。

1.3试验药品受试药物：复方双氯芬酸钠注射液，规格：5 mL：双氯芬酸钠0.125 g+对乙酰氨基酚0.75 g，批号：140114，由烟台绿叶动物保健品有限公司提供。对照药物：对乙酰氨基酚注射液，规格：10 mL：1 g，批号：130114，江西金康佳生化药业有限公司；双氯芬酸钠注射液，规格：100 mL：5 g，批号：140115，由烟台绿叶动物保健品有限公司生产。

1.4实验动物健康新西兰兔，普通级，体重2.0～3.0 kg，雌雄不限，购自青岛康大生物科技有限公司，实验动物生产许可证号：SCXK（鲁）2012 0005；昆明系小鼠，洁净级，雌雄各半，体重20 g左右，购自山东绿叶制药有限公司实验动物中心，《实验动物生产许可证》许可证号：SCXK（鲁）2014 0002。

2　方法

2.1家兔解热试验试验前3 d，将新西兰兔置于实验环境中模拟实验操作（包括捉拿、固定、安放智能热原仪的测温探头等），以使其适应试验条件，每天用智能热原仪检测体温，取3 d体温平均值作为基础体温，选取基础体温在38.5℃～39.5℃的新西兰兔进行正式试验。

表1　试验分组及处理　（±S，n=6）

表1　试验分组及处理　（±S，n=6）

注：（1）各组新西兰兔随机分配，体重差异不显著（P>0.05），平均基础体温差异不显著（P>0.05）；（2）1：空白对照组，2：模型对照组，3：对乙酰氨基酚注射液对照组，4：复方双氯芬酸钠注射液组

组别　动物数　平均体重　平均基础　是否　给药　给药（只）　（kg）　体温（℃）　攻毒　剂量　方式1　6　2.60±0.14 38.94±0.35　否　--　肌肉注射，2　6　2.58±0.15 39.00±0.20　是　--　0.5 mL/kg 3　6　2.60±0.11 38.94±0.22　12.5 mg/kg 4　6　2.62±0.20 38.91±0.28　1.25 mg/kg+7.5 mg/kg

第4天开始正式试验，选取30只体温正常的健康新西兰兔随机分为4组（具体分组情况见表1）。除空白对照组外，其余各组均静脉注射60 EU/kg体重的细菌内毒素进行攻毒致热。注射细菌内毒素致热造模成功后开始给药。具体分组及给药方式见表1。分别记录各组新西兰兔给药前及给药后0.25、0.5、0.75、1、1.5、2、2.5、3、3.5、4 h的体温，以每组新西兰兔在各时间点的平均体温绘制体温变化曲线，统计各组间的差异。

2.2小鼠镇痛试验取健康昆明系小鼠60只，体重20 g左右，雌雄各半，随机分为6组，各组小鼠于给药后30 min，腹腔注射0.5%冰醋酸溶液0.2 mL，立即计时，观察15 min内小鼠的扭体反应次数，计算扭体反应的抑制率[3-7]。具体分组及给药方式见表2。

表2　试验分组及处理（±S，n=10）

表2　试验分组及处理（±S，n=10）

注：（1）各组小鼠随机分配，体重差异不显著（P>0.05）；（2）1：空白对照组；2：双氯芬酸钠注射液对照组；3：对乙酰氨基酚注射液对照组；4：复方双氯芬酸钠注射液低剂量组；5：复方双氯芬酸钠注射液中剂量组；6：复方双氯芬酸钠注射液高剂量组

1　10 20.40±0.31　--　一次性肌肉注射，2　10 20.38±0.36 10 mg/kg双氯芬酸钠　给药体积为3　10 20.43±0.31 50 mg/kg对乙酰氨基酚　0.1 mL/只4　10 20.37±0.30 2.5 mg双氯芬酸钠+15 mg对乙酰氨基酚/kg 5　10 20.43±0.24 5 mg双氯芬酸钠+30 mg对乙酰氨基酚/kg 6　10 20.39±0.32 10 mg双氯芬酸钠+60 mg对乙酰氨基酚/kg动物数平均组别　给药剂量（mg/kg）　给药方式（只）体重（g）

2.3数据处理：采用SP-SS17.0统计分析软件对数据进行显著性分析，以X±S表示。

3　结果与讨论

3.1家兔解热试验各组新西兰兔在给药前后的体温变化趋势见图1：在给药后0.25 h，对乙酰氨基酚注射液组新西兰兔的平均体温较模型对照组的低，且差异显著（P<0.05）；在给药后0.5 h，差异极显著（P<0.01）；表明对乙酰氨基酚注射液给药后0.5 h对新西兰兔发热起到了明显的抑制作用，且在给药后0.75 h体温降至正常体温范围。在给药后0.25 h，复方双氯芬酸钠注射液组新西兰兔的平均体温较模型对照组的低，且差异极显著（P<0.01），表明复方双氯芬酸钠注射液给药后0.25 h对新西兰兔发热起到了明显的抑制作用，且在给药后0.5 h体温降至正常体温范围。复方双氯芬酸钠注射液组新西兰兔的平均体温较对乙酰氨基酚注射液组的低，且差异极显著（P< 0.01），表明复方双氯芬酸钠注射液比对乙酰氨基酚注射液解热效果更佳。

3.2小鼠镇痛试验各组小鼠扭体反应结果见表3：各给药组小鼠扭体反应平均次数均较空白对照组的少，且差异极显著（P<0.01），表明对乙酰氨基酚注射液以及复方双氯芬酸钠注射液在冰醋酸所致小鼠疼痛反应上均具有不同程度的镇痛作用；双氯芬酸钠注射液组小鼠扭体反应平均次数比对乙酰氨基酚注射液对照组的少，且差异显著（P<0.05），表明临床有效剂量的双氯芬酸钠注射液在冰醋酸所致小鼠疼痛反应上的治疗效果优于对乙酰氨基酚注射液；中、高剂量复方双氯芬酸钠注射液组小鼠扭体反应平均次数均显著低于双氯芬酸钠和对乙酰氨基酚注射液对照组，但复方双氯芬酸钠注射液中、高剂量组间无显著差异。

图1　各组新西兰兔给药前后体温变化曲线

4　讨论

对乙酰氨基酚（Paracetamol）是临床上最常用的解热镇痛药之一，其特点是解热作用与阿司匹林相似，而镇痛作用较弱，抗炎作用微，但该品服用剂量较大，若长期或超剂量服用，有引发肝肾损害的危险。双氯芬酸（Diclofenac）是瑞士CibaGeigy公司开发的消炎镇痛药，国内于1985年上市，由于其服用剂量小、疗效好、不良反应小、长期服用无蓄积性等；但该药存在胃肠道不适等不良反应，也偶可使肝功能异常、白细胞减少。长期以来，探讨上述两种药物的协同作用，通过复方减少其临床用药剂量、降低不良反应并增强疗效，一直是药理学家多年来努力研究的课题。

1978年Mcneilab公司通过动物试验发现，合并使用双氯芬酸钠和对乙酰氨基酚后镇痛效果增加，由此初步发现它们在药理上的协同作用。1993年日本学者测定了双氯芬酸钠和对乙酰氨基酚各自的ED50值，从量效关系上进一步明确了这种协同作用。1996年英格兰Derriford医院进行了一项双盲、随机、平行研究，结果发现与单独使用对乙酰氨基酚相比，两药并用时吗啡用量即使减少1/3甚至近40%仍有足够的镇痛作用[1]。经本试验验证后发现，复方双氯芬酸钠注射液的解热镇痛效果优于双氯芬酸钠注射液和对乙酰氨基酚注射液，表明双氯芬酸钠和对乙酰氨基酚合用时能通过复方制剂来减少用药剂量并增强镇痛效果，两者具有协同作用。

表3　小鼠扭体反应结果　（±S，n=10）

表3　小鼠扭体反应结果　（±S，n=10）

注：（1）各给药组与空白对照组比较，肩注a：P<0.01；（2）各给药组与双氯芬酸钠注射液对照组比较，肩注b：P<0.05，c：P<0.01；（3）复方双氯芬酸钠注射液各剂量组与对乙酰氨基酚注射液对照组比较，肩注d：P<0.01

复方双氯芬酸钠注射液组别　空白对照组双氯芬酸钠注射液对照组对乙酰氨基酚注射液对照组低剂量组中剂量组高剂量组扭体反应次数　46.9±12.5　24.1±7.5a　32.7±8.8ab　26.5±7.1a17.1±6.7abd13.0±5.0acd扭体反应抑制率/ %　--　48.6　30.3　43.5　63.5　72.3

5　结论

双氯芬酸钠和对乙酰氨基酚合用时能通过复方制剂来减少用药剂量并增强疗效，两者具有协同作用；复方双氯芬酸钠注射液的解热镇痛效果显著，中剂量（5 mg双氯芬酸钠+30 mg对乙酰氨基酚）为合理有效剂量，可作为临床使用剂量的参考依据。

参考文献：

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Theantipyretic analgesic action of the Compound diclofenac sodium injection

LI Jing1，WU Qing1，LI Bo-nan2
（1.Yantai luye animal health products，Yantai 264003，China；2.Yantai Aninal Husbandry and Veterinary workstation，Yantai 264001，China）

Abstract：Objective：To investigate the compound diclofenac sodium injection of antipyretic analgesic effect.Method one：Se⁃lect the healthy New Zealand rabbits，and in addition to the blank control group，the rest of the groups were injected intravenously with 60 eu/kg of bacterial endotoxin.Then observe the antipyretic effect of drug on the hot New Zealand rabbit .Method 2：Select normal mice.For 30 min after celiac injection of 0.2 mL of 0.5% glacial acetic acid solution then we observed the effects within 15 min after injection in mice body torsion reaction times immediately，and calculated the inhibition rate of body torsion reaction.The results showed that the compound diclofenac sodium injection worked fast and maintained a long time.The antipyretic analgesic ef⁃fect is better than the acetaminophen injection.

Key words：compound diclofenac sodium injection；Antipyretic；analgesic

中图分类号：R 944.11

文献标志码：A

文章编号：0529-6005（2016）05-0099-03

收稿日期：2016-02-26

基金项目：烟台市科技发展计划（2014NC15）

作者简介：李晶（1986-），女，硕士，从事新兽药研发工作，E-mail：13625357865@163.com

通讯作者：吴清，E-mail：wuqing@luyeah.com

Corresponding author：WU Qing