手法对CCI模型大鼠局部镇痛作用及其机制的实验研究

陈艳伟++李沛++张仲博++赵利敬++史鹏博++巴正

【摘 要】目的：探讨手法对神经病理性疼痛模型大鼠局部镇痛作用效果及其作用机制，为手法镇痛提供理论依据。方法：将32只SPF级雌性SD大鼠随机分为假手术组、模型组、针刺组、手法组，每组

8只。除假手术组外，其他各组建立坐骨神经慢性缩窄性损伤（CCI）大鼠模型。建模成功后，针刺组给予针刺治疗，手法组给予手法治疗。观察手法对大鼠疼痛阈值的影响及手法治疗后施术局部β-内啡肽的含量。结果：大鼠造模后，表现出跛行、抬足、舔足等痛觉过敏表现，与假手术组比较，差异有统计学意义

（P < 0.05）。手法能明显提高神经病理性疼痛大鼠的疼痛阈值（P < 0.05）；给予手术大鼠手法治疗后，针刺组和手法组大鼠病灶局部β-内啡肽含量明显升高，与假手术组及模型组比较，差异有统计学意义（P < 0.05）。

手法组和针刺组比较，差异无统计学意义（P > 0.05）。结论：手法对CCI模型大鼠局部镇痛效果显著，其作用机制可能是通过升高施术局部β-内啡肽的含量而达到镇痛效果。

【关键词】 手法；CCI模型；神经病理性疼痛；镇痛；β-内啡肽；大鼠

Experimental Study on the Effect and Mechanism of Manipulation on CCI Model in Rats

CHEN Yan-wei，LI Pei，ZHANG Zhong-bo，ZHAO Li-jing，SHI Peng-bo，BA Zheng

【ABSTRACT】Objective：To explore the effect of manipulation on local analgesic effect in neuropathic pain rats and its mechanism，provide a theoretical basis for the technique of analgesia.Methods：Thirty-two healthy SD female rats were randomly divided into sham operation group，model group，acupuncture group and manipulation group，with 8 rats in each group.In addition to the sham operation group，the other groups were established sciatic nerve chronic constriction injury（CCI）rat model.After successful modeling，the acupuncture group was given acupuncture treatment，the manipulation group was given manipulation treatment.The content of the local application of beta endorphin manipulation effect on pain threshold in rats and after manipulation treatment.Results：After modeling，the rats showed a limp，lift the foot，foot licking hyperalgesia，compared with sham operation group，the difference was statistically significant（P < 0.05）.Manipulation can significantly improve the pain threshold of neuropathic pain rats（P < 0.05）.After the surgical rats were given treatment of manipulation，β-endophine content of acupuncture group rats and manipulation group significantly increased，there were significant differences compared to the sham operation group as well as the model group（P < 0.05）.There were no significant differences between acupuncture group rats and manipulation group（P > 0.05）.Conclusion：The effect of manipulation on local analgesia in CCI model rats was significant，its mechanism may be through increased application of local beta endorphin content and analgesic effect.

【Keywords】 manipulation；CCI model；neuropathic pain；analgesic；β-endorphine；rats

疼痛是危及人类健康和影响生活质量的重大医学难题。治疗慢性疼痛的主要困难就是明确其病因、正确选择镇痛方法。手法在缓解经筋系统疼痛方面疗效肯定，具有简便验廉、副作用少的优势。临床工作中，笔者以中医经筋理论为指导，对患者施以手法治疗可以缓解大部分慢性经筋疼痛。但是长期以来，关于手法缓解疼痛的作用机制研究相对较少。已有研究表明，在患者局部施以针刺和手法治疗，能够增加血液中β-内啡肽（β-EP）等具有镇痛作用的神经递质，减少P物质（SP）等具有致痛物质的产生[1-2]。β-EP作为一种内源性类吗啡样物质，在抑制疼痛方面起到了重要作用。本实验拟在疼痛部位局部施以适当手法以观察其镇痛效果及其对作用局部β-EP含量的影响，探讨手法局部镇痛的机制，为中医骨伤科手法治疗经筋疾病提供科学依据和理论指导。

1 实验材料

1.1 实验动物 SPF级雌性SD大鼠32只，体质量（200±20）g，由河南省实验动物中心提供，动物合格证号：SCXK（豫）2010-0002。IVC独立通气鼠笼，12/12 h昼夜交替节律下进行饲养，室温（22±1）℃，湿度（50±10）%。进行适应性喂养，并进行痛阈值筛选：测定值位于8～30 s之间的大鼠纳入实验。

1.2 试 剂 水合氯醛（大连美仑生物技术有限公司，生产批号B20150801）；β-EP试剂盒（上海朝瑞生物科技有限公司）；注射用青霉素钠（华北制药股份有限公司）。

1.3 主要仪器 酶标仪（Thermo Multisan）；组织匀浆机（QIAGEN）；高速离心机（Thermo）；非吸收性外科缝线（扬州市华祥医疗器械厂）。

2 方 法

2.1 分组与造模方法 将32只SD雌性大鼠随机分为假手术组、模型组、针刺组、手法组，每组8只。

假手术组：用2%戊巴比妥钠，0.3 mL·（100 g）-1麻醉，俯卧位固定好大鼠后，手术区备皮，消毒。于大鼠右侧背部切开皮肤，暴露坐骨神经主干，不对坐骨神经进行结扎，然后逐层消毒、缝合。

模型组：参照CCI模型造模方法[3]，麻醉，俯卧位固定好大鼠后，手术区备皮、消毒，取大鼠右侧膝部、髂棘的连线，其中点下方0.5 cm处，做一平行线，沿着此线切开大鼠腿部皮肤（约1～1.5 cm），钝性分离肌肉，暴露坐骨神经主干，用5-0铬制羊肠线松扎坐骨神经干4道，每2道之间间隔1 mm，结扎强度以环绕的羊肠线能在坐骨神经主干上自由的滑动，不影响神经外膜血运为原则，然后逐层消毒、缝合，并给予青霉素腹腔注射，避免术后感染。大鼠在术前1 d禁食、禁水，羊肠线（5-0）用温盐水浸泡24 h，手术后大鼠局部缝合伤口血迹清洗干净，并单笼饲养，防止自行咬破伤口，或互相撕咬造成动物伤口撕裂而死亡。

针刺组：造模同模型组，于第6天进行针刺治疗，安静环境中将大鼠固定，动物于清醒状态下选取其环跳穴，针刺深度为0.5 cm，隔5 min行针一次，共20 min。

手法组：造模同模型组，于第6天在大鼠手术同侧环跳穴处施以按法，术者使用食指作用于环跳穴处，作用20 min。

2.2 观察指标及方法 各组分别于造模前1 d、治疗前、治疗后测量大鼠热痛阈值，测量完毕后处死取材。处理标本后，使用β-EP试剂盒对标本进行测量。

2.3 统计学方法 采用SPSS 19.0软件进行统计分析。计量资料以表示，符合正态分布且方差齐，采用单因素方差分析；治疗前后比较，采用配对样本t检验；不符合正态性检验及方差齐性检验，则采用秩和检验。以P < 0.05为差异有统计学意义。

3 结 果

3.1 大鼠一般情况 假手术组大鼠皮毛光润，精神状态好，喜动，反应灵敏，饮食正常；模型组、针刺组、手法组造模后，大鼠精神萎靡，少活动，饮食较差，右足（术侧）出现跛行、抬足、舔足等痛过敏表现。造模前各组大鼠体质量比较，差异无统计学意义（P > 0.05）；模型组、针刺组、手法组大鼠体质量与假手术组比较，差异有统计学意义（P < 0.05）；模型组、针刺组、手法组大鼠与造模前比较，差异有统计学意义（P < 0.05）。见表1。

3.2 大鼠各时期疼痛阈值变化 造模前，各组大鼠之间疼痛阈值比较，差异无统计学意义（P > 0.05）。治疗前，各组大鼠之间疼痛阈值比较，差异有统计学意义（P < 0.05）；假手术组与模型组、针刺组、手法组比较，疼痛阈值明显降低（P < 0.05）；模型组、针刺组、手法组两两比较，差异无统计学意义

（P > 0.05）。治疗后，假手术组与针刺组、手法组比较，差异有统计学意义（P < 0.05）；手法组、针刺组与治疗前比较，差异有统计学意义（P < 0.05）；手法组和针刺组比较，差异无统计学意义（P > 0.05）。见表2。

3.3 各组大鼠治疗后肌肉组织β-EP浓度比较 治疗后，手法组和针刺组大鼠β-EP含量明显升高，手法组与假手术组、模型组比较，差异有统计学意义（P < 0.05），与针刺组比较，差异无统计学意

义（P > 0.05）。见表3。

4 讨 论

1988年，Bennett和Xie首次成功研制出大鼠CCI模型。由于CCI模型的制备方法较为简易，造模成功率高，观测模型大鼠痛阈值较为方便，自CCI模型制作出后就成为经典的慢性疼痛模型。CCI模型造模手术操作简单明了，用时短，创伤小，技术要求低，对大鼠整体影响小，术后可出现较为明显的痛阈值降低的症状：术肢自发痛、物理性刺激痛觉过敏和痛觉超敏。实验中CCI模型大鼠体质量较假手术大鼠轻，反应迟钝，精神萎靡，少活动，饮食较差，右足（术侧）出现跛行、抬足、舔足等痛过敏表现。这些痛阈值降低的现象表明实验造模成功，大鼠的慢性疼痛模型较为典型。

临床工作中，在处理经筋类疼痛时，施术者往往以患者痛处为腧穴，在其周围痛处仔细寻找压痛点，并对该点及周围区域进行点、压、按、擦、推、扳、拍等手法操作，以达到通气散瘀消瘀、活血散结、消肿止痛、疏经通络的作用。临床实践证明，取痛处为腧穴能够使手法治疗更直接、方便，效果更加显著，操作更为简单。《灵枢·九针论》中记载手法配合药物能够加强功效，对肢体麻木、筋脉不通类疾病有很好的疗效，同时也能用于肢体功能锻炼。活血化瘀类药物能够助力手法活血行气、疏通经络，提高疗效。手法和药物的配合可用于治疗四肢麻木、关节不利等经筋病证。在临床康复锻炼中可以运用手法和药物配合提高康复功能锻炼的效率。在治疗经筋疾病和患肢康复锻炼时常将手法治疗配合中药塌渍、熏蒸，往往能够取得较好的临床疗效。

已有研究表明，在患者局部施以针刺疗法和手法能够增加血液中β-EP等具有镇痛作用的神经递质，减少SP等具有致痛物质的产生[1-2]。中医经筋疾病的治疗原则是“以痛为腧”[4]。针灸镇痛得到了大量临床实践验证，在治疗经筋病亦遵循“以痛为腧”的原则，实验证明，针灸可以抑制炎性疼痛和神经病理性疼痛[5]。β-EP作为一种内源性类吗啡样物质，在抑制疼痛方面起到了重要作用。已有研究证明，针刺能够刺激血浆β-EP的含量增加，从而达到镇痛的效果，其含量与镇痛效果呈正相

关[6]。指针遵循针灸的原理作为一种独特的针灸方法是区别于普通针刺的非侵入性治疗，疼痛患者更容易接受，临床上更容易开展。传统的阿片类药物是治疗重度疼痛最有效的镇痛药物，它主要是通过抑制中枢神经元对伤害性刺激的反应而起作用。研究表明，阿片类药物的镇痛作用大部分是通过与外周阿片受体相结合而起到镇痛作用[7]。内源性阿片肽是推拿镇痛的重要物质基础[8]。β-EP是内源性阿片系统中镇痛作用较强的一种内啡

肽[9]。据报道，β-EP含量在慢性疼痛患者血中水平较低，在疼痛患者相应的压痛点进行针刺和按压后获得镇痛效应时，患者血和脑脊液中的β-EP含量升高，其镇痛效应与升高幅度呈正相关，提示按摩产生镇痛作用可能与内啡肽升高有关[10]。冀斌等[11]运用四指推法能够有效治疗腰椎间盘突出症，缓解腰背部疼痛以及双下肢疼痛。通过治疗前后疼痛阈值对比及量化分析患者治疗前后血浆β-EP含量变化，发现经四指推法治疗后的患者血浆β-EP含量较治疗前明显升高，说明四指推法的镇痛作用可能是通过调节外周血浆中β-EP的含量而实现的。

以往的研究只能证明手法可以促使机体血浆内β-EP的含量升高，而没有直接的证据表明疼痛部位组织β-EP的含量与镇痛效果的关系。本实验是为了检测施术部位局部肌肉组织所含β-EP的含量，探讨手法镇痛更为直接的作用机制。实验结果证明大鼠痛阈值与局部肌肉组织β-EP的含量呈正相关。可以得出结论：手法对CCI疼痛模型是具备治疗作用的。手法能够促使大鼠施术部位肌肉组织β-EP的含量升高，提高大鼠痛阈值。手法镇痛机制可能是通过升高局部β-EP的含量而达到镇痛效果。

5 参考文献

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收稿日期：2016-07-13；修回日期：2016-09-27