醇提五倍子对鳙鱼消化酶活性及肠道形态的影响

耿昕颖，刘　蕾，王家祯，王　巍，单晓枫，马红霞，高云航（.吉林农业大学动物科学技术学院，吉林长春308；.吉林向海国家级自然保护区管理局，吉林白城375）



醇提五倍子对鳙鱼消化酶活性及肠道形态的影响

耿昕颖1，刘蕾2，王家祯1，王巍1，单晓枫1，马红霞1，高云航1
（1.吉林农业大学动物科学技术学院，吉林长春130118；2.吉林向海国家级自然保护区管理局，吉林白城137215）

摘要：为了研究五倍子对鳙鱼消化酶活性及肠道形态的影响，本试验以鳙鱼为研究对象，分别饲喂含有0.00%、0.50%、1.00%、2.00%醇提五倍子的饵料，于第15、30、45天采集肠道内容物，检测消化酶活力，并于45 d采集前肠及后肠，制作石蜡切片，观察肠道形态变化。结果发现：（1）第15天试验组胰蛋白酶、脂肪酶活力随着五倍子添加浓度增加而降低，饲养至第45天，0.50%组消化酶活力均高于对照组（P>0.05），2.00%组消化酶始终低于其他各组；第15天试验组淀粉酶活力高于对照组，1.00%组显著高于对照组（P<0.05），第30、45天试验组酶活力有所下降但仍高于对照组；（2）各试验组间前肠绒毛高度与各组前肠V/C值差异不显著（P>0.05），以1.00%组最高；0.50%组、对照组后肠绒毛高度与2.00%组差异显著（P<0.05）；各组后肠V/C差异不显著（P>0.05），以0.50%组最高。由此看出，日粮中添加不同浓度醇提五倍子，初期抑制了消化酶分泌及肠道发育，随饲养时间延长，低浓度五倍子可促进消化酶分泌和肠道发育，而高浓度五倍子抑制消化酶分泌和肠道发育，最适添加比例为0.50%。

关键词：醇提；五倍子；鳙鱼；消化酶活性；肠道形态

在规模化养殖中，抗生素类药物被广泛应用，对鱼类疾病的防控发挥了一定的作用，但鱼类肠道机能同样遭到破坏[1]。天然中草药提取物因其毒性小，并能提高生产性能和免疫能力等优点而被推广使用。五倍子具有高效的抗菌作用，在防治鱼白皮病、赤皮病及细菌性肠炎等方面取得良好效果[3]。姚嘉赟等通过体外抑菌试验筛选对嗜水气单胞菌具有较强抑制效果的中药，结果表明，五倍子可作为抗嗜水气单胞菌的备选药物[4]。张海宾等测定了嗜水气单胞菌菌株对12种中草药的敏感性，结果表明，五倍子的抑制作用明显[5]。近年来五倍子对水产动物消化机能影响的研究相对较少，本试验在鳙鱼日粮中添加不同浓度醇提五倍子，研究其对鳙鱼消化酶及肠道形态结构的影响，旨在为五倍子在鱼料加工、疾病防治的应用提供理论依据。

1　材料与方法

1.1饲养鱼与饲养条件试验鳙鱼，购自长春市大南渔场。将体重均为25.67±1.01 g的600条鳙鱼随机均分4组，3组为试验组（0.50%、1.00%、2.00%组），1组为对照组，每组设3个重复，各组常规饲养，定时投喂，每次投饵量为鱼体重量的2%～3%。

1.2试验饲料及药品本试验五倍子角倍，购自长春市百草大药房；基础饲料，购自长春市通威饲料公司；胰蛋白酶测试盒、脂肪酶测试盒、淀粉酶测试盒，均购自南京建成生物工程公司。

1.3药饵的制备一次选取4.00 g肚倍，利用索氏抽提器中以80%乙醇溶液15倍量提取3次，25 min/次，制成中药浸膏。使用前将醇提五倍子按照添加浓度经生理盐水稀释，均匀喷洒于基础饵料后中，60℃烘干备用。

1.4样品的采集分别于第15、30、45天无菌采集各组前肠、后肠及肠道内容物，-20℃保存，用于酶活力测定。肠道于Bouin氏液中固定，用于制作石蜡切片。

1.5消化酶活力测定Trypsin采用精氨酸乙酯法、Lipase采用甘油三酯水解法、Amylas采用碘-淀粉比色法。

1.6五倍子对鳙鱼绒毛高度及V/C的影响常规方法制作石蜡切片，测定前肠、后肠的绒毛高度以及隐窝深度，计算绒毛高度/隐窝深度。

1.7统计分析试验数据用SPSS数据处理软件进行单因素方差分析，并对均数作LSD多重比较。结果均以平均值±标准差表示。

2　结果与分析

2.1五倍子对鳙鱼Trypsin的影响由图1可以看出，第15天试验组Trypsin活力均低于对照组，随着饲养时间延长，试验组均有所上升，1.00%组、0.50%组均超过对照组，但差异不显著（P>0.05）。

图1　五倍子对Trypsin活力的影响

2.2五倍子对鳙鱼Lipase的影响由图2可以看出，第15天试验组Lipase活力均低于对照组，且2.00%组显著低于对照组（P<0.05）；第30、45天0.50%组、1.00%组均有所提高，第45天0.50%组、对照组均显著高于2.00%组（P<0.05）。

图2　五倍子对Lipase活力的影响（U/mg）

2.3五倍子对鳙鱼Amylas的影响由图3可以看出，随着五倍子添加量增加Amylas活力随之升高，第15、30天试验组与对照组差异不显著（P> 0.05）；第45天1.00%、2.00%与对照组、0.50%组相比差异显著（P<0.05）。

2.4五倍子对鳙鱼绒毛高度及V/C的影响由表2、中插彩版图4、5可以看出，各组间前肠绒毛高度以及前肠V/C的值各组之间差异不显著（P> 0.05），1.00%组最高，后肠绒毛高度试验组0.50%、对照组与2.00%组比较差异显著（P<0.05）；后肠V/C各组之间差异不显著（P>0.05），以0.50%组最高、2.00%组最低。

图3　五倍子对鳙鱼血清Amylas的影响（U/mL）

表2　五倍子对绒毛高度及V/C的影响

3　讨论

鱼类消化酶活力决定了个体对营养物质的消化与吸收，影响着个体的发育和生长[6]。胰腺分泌的消化酶可进入小肠近端，促使营养物质分解成小分子或单体被肠上皮细胞吸收[7]。消化酶类属蛋白质，蛋白质分子的苯环、杂环等有些疏水基团可与单宁酸分子的苯环疏水基发生疏水结合形成络合物，从而抑制消化酶分泌[8]。本试验研究发现，第15天各组胰蛋白酶、脂肪酶活力随着添加五倍子浓度的增加而逐渐降低，可能是由于五倍子中含有单宁等有效成分对消化酶活力产生了一定抑制作用。随饲养时间延长，0.50%组与1.00%组上升趋势明显；至第45天，0.50%组消化酶活力均高于对照组（P>0.05），2.00%组消化酶始终低于其他各组，随饲养时间延长无显著变化且低于其他试验组；第15天试验组淀粉酶活力高于对照组，1.00%组显著高于对照组（P<0.05），第30天、45天试验组酶活力有所下降，且1.00%、2.00%与对照组、0.50%组相比差异显著（P<0.05），可能为单宁酸对酶抑制作用会随饲养时间延长而有所降低，饲养一段时间后，动物肠道适应一定浓度的单宁酸，恢复消化酶的分泌。同时由于五倍子的主要有效成分鞣质在酸性条件下完全水解形成葡萄糖和没食子酸，进一步促进了消化酶分泌[9]。

鳙鱼属于无胃鱼，肠道是消化与吸收营养物质的主要场所，因此肠道的完整性对其生长发育起着关键作用。小肠绒毛V/C值是评定动物消化吸收能力的重要指标。V/C值越大，说明消化吸收能力越强，反之越差[10]。本试验结果表明，各组之间前肠绒毛高度差异不显著（P>0.05），1.00%组最高；前肠V/C的值各组之间差异不显著（P> 0.05），1.00%组最高，2.00%组最低；后肠绒毛高度试验组0.50%、对照组与2.00%组比较差异显著（P<0.05）；后肠V/C各组之间差异不显著（P> 0.05）。说明高浓度五倍子在一定程度上抑制肠道发育，低浓度促进肠道发育，且1.00%为最佳。但关于五倍子对肠道发育及酶活力的影响机制尚需进一步深入研究。

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Influenceof digestiveenzymeactivity and morphology of the intestinal to aristichtysnobilisusing gallnut extracted by alcohol

GENG Xin-ying1，LIU Lei2，WANG Jia-zhen1，WANG Wei1，SHAN Xiao-feng1，MA Hong-xia1，GAO Yun-hang1
（1.College of Animal Science and Technology，Jilin Agricultural University，Changchun 130118，China；2.Jilin Xianghai national nature reserve，Baicheng 137215，China）

Abstract：In order to study the effect of gallnut on digestive enzyme activity and intestinal morphology of Aristichtys nobilis，0.00%，0.50%，1.00% and 2.00% alcohol extractions of gallnut were added into the basic diet respectively.Intestinal contents were collected to detect the digestive enzyme activity at 15，30，and 45 d.At 45 d，foregut and hindgut were collected to make paraffin sections to observe morphological changes.The results showed that the trypsin and lipase activities reduced with the increasing con⁃centration of gallnut at 15 d in test group，and the digestive enzyme activity of 0.50% group was higher than the control group when feeding to 45 d（P>0.05）.Digestive enzyme activity of 2.00% group was always lower than other groups.At 15 d，amylase activity in test groups was higher than the control group.1.00% group was significantly higher than the control group（P<0.05）.At 30 d and 45 d in test group，enzyme activity decreased but was still higher than the control group.Difference in foregut villus height between the experimental groups was non-significant，and 1.00% was the highest；Height of hindgut intestinal villus in 0.50% group and the control group was significantly different from that of the 2.00 group（P<0.05）.V/C difference was not significant in each groups （P>0.05），and 0.50% group was the highest.For the diets supplemented with different concentrations of alcohol extracted gallnut，secretion of digestive enzyme and intestinal development were impaired at the beginning .However，with the extension of feeding time，secretion of digestive enzyme and intestinal development were enhanced by low concentration gallnut，and the optimum add⁃ing proportion was 0.50%.

Key words：alcohol extraction；gallnut；aristichtys nobilis；digestive enzyme activity；intestinal morphology

中图分类号：S859.3

文献标志码：A

文章编号：0529-6005（2016）05-0114-03

收稿日期：2015-01-29

基金项目：国家自然科学基金项目（31201927）；吉林省重点科技攻关项目（20150204065NY）

作者简介：耿昕颖（1993-），女，硕士，研究方向为动物疫病防治；E-mail：1160455285@qq.com

通讯作者：高云航，E-mail：gaoyunhang@163.com

Corresponding author：GAO Yun-hang