胃癌发生发展及预后与幽门螺杆菌相关性分析及幽门螺杆菌筛查的临床意义

赵　君　胡沛臻

710005 陕西省第二人民医院



胃癌发生发展及预后与幽门螺杆菌相关性分析及幽门螺杆菌筛查的临床意义

赵君胡沛臻

710005 陕西省第二人民医院

【摘要】目的探讨幽门螺杆菌感染与胃癌的发生发展及预后的关系，以及幽门螺杆菌筛查的临床意义。方法收集138例胃癌患者的组织石蜡标本，同时选择相应的癌旁组织40例作为对照组，应用实时荧光定量PCR法检测组织中幽门螺杆菌的相对感染量。结果40例癌旁组织HP相对感染量为(5.32±1.96),138例胃癌组织HP相对感染量(13.07±6.11)，两者相比差异具有统计学意义(P<0.05)。胃癌患者的1年、2年、3年生存率与HP相对感染率呈负相关，HP相对感染率越高，则胃癌患者生存率越低，差异具有统计学意义(P<0.05)。患者的年龄、浸润程度、淋巴结转移、TNM分期以及HP相对感染量与胃癌患者的预后呈正相关。HP感染阳性率男性患者为43.8%，女性患者为41.1%，差异不具统计学意义；年龄≤50岁HP阳性率为40.4%，年龄>50岁HP阳性率为59.6%，差异具统计学意义(P<0.05)。结论幽门螺杆菌感染在一定程度上影响胃癌的发生发展及预后，临床上对幽门螺杆菌筛查具有重要意义。

【关键词】胃癌；幽门螺杆菌；实时荧光定量PCR；临床筛查

(ThePracticalJournalofCancer,2016,31:743～746)

胃癌是危害我国人类最严重的恶性肿瘤疾病，其致死率已居首位[1],究其原因，与该疾病的发现较晚密切相关，因此早期发现并采取积极的治疗措施是提高患者预后的重要措施。目前，幽门螺杆菌已被世界卫生组织国际癌症研究机构列为第一致癌原[2]。而幽门螺杆菌在胃癌患者的发展、预后及筛查方面的作用已逐渐得到认可[3]。本研究通过对胃癌患者癌组织中幽门螺杆菌含量与其疾病发展和预后的相关性进行分析，探讨幽门螺杆菌在胃癌中的作用。

1材料与方法

1.1临床资料

收集我院病理科2010年6月至2013年12月期间存档的胃癌患者的组织石蜡标本138例，Hp美兰染色为阳性，同时选择癌旁组织40例，Hp美兰染色为阴性。在选取的病例中，男性94例，女性44例，平均年龄(61±11)岁。癌旁组织是取距离癌症病灶边缘5 cm以外的非癌组织。同时选择我院健康体检的患者200例，对其进行幽门螺杆菌筛查，评定筛查结果及意义。

1.2方法

石蜡组织切片5 μm 10张装1.5 mL 灭菌 Ep 管中，应用QIAGEN 试剂盒提取DNA，分光光度法测定DNA 浓度和纯度后，分装并-20 ℃保存。HP以及内参基因β-globin引物设计均由上海罗氏生物有限公司设计合成，均经过BLAST软件验证。内参基因β-globin引物序列为： 5’-CAGACACCATGGTGCACCTGAC-3’，5’-CCAATAGGCAGAGAGAGTCAGTG-3’，PCR 产物大小为210 bp，。HPYR1引物序列[4]:5’-GAGCCCTCAAAGAACTGCAC-3’和5’-AATTGGACAGCACCTTCTGG-3’，PCR产物大小173 bp。实时荧光定量PCR 反应体系(25 μL)：2×Quantifast SYBR Green PCR Master Mix 12.5 μL，10 μmol 引物各1.0 μL， 模板DNA 3 μL，RNase-free water 7.5 μL； 反应条件：95 ℃ 预变性5 min，95 ℃ 变性10 s，60 ℃ 退火延伸30 s，40 个循环；其中模板DNA 浓度不超过100 ng/体系， 实时荧光定量PCR 试剂盒购于QIAGEN 公司，仪器为QIAGEN公司的Rotor-Gene Q。

1.3观察指标

经美兰染色法检测到的HP呈蓝色，单个散在或者成片分布，形状弯曲或呈棒杆状，分布于胃黏膜表面/腺腔。幽门螺杆菌的相对感染量=2-△△Ct，△Ct= Ct目的-Ct内参，△△Ct=△Ct目的-△△Ct空白,空白对照组的相对感染量为1， 即<1为Hp 阴性，>1为Hp 阳性，实验重复3次取平均值；其中空白对照组是根据 Hp 美兰染色为阴性而选取。同时通过多种随访方式获取患者的疾病进展状况，与幽门螺杆菌含量进行比较，以分析两者的相关性。

1.4统计学分析

应用SPSS 17.0对数据进行分析，以t检验、卡方检验、Cox回归模型分析等统计学方法分析幽门螺杆菌含量与患者相关临床资料和生存率之间的相关性。

2结果

2.1HP相对感染量与胃癌临床病理参数的关系

本研究中HP相对感染量为0.03～24.59，平均为7.93±7.47，HP半定量PCR扩增条带为173 bp，内参β-globin扩增条带为210 bp。HP相对感染量在浸润深度为T3+T4、淋巴结发生转移以及TNM分期为Ⅲ+Ⅳ中明显增高，差异具统计学意义(P<0.05)，具体见表1。

表1　HP相对感染量与胃癌临床病理参数的关系

2.2HP相对感染率

本研究中40例癌旁组织HP相对感染量为(5.32±1.96),138例胃癌组织HP相对感染量(13.07±6.11)，两者相比差异具有统计学意义(P<0.05)。

2.3HP相对感染量与胃癌患者生存率的关系

胃癌患者的1年、2年、3年生存率与HP相对感染率呈负相关，HP相对感染率越高，则胃癌患者生存率越低，差异具有统计学意义(P<0.05)，具体见表2。

表2　HP相对感染量与胃癌患者生存率的关系/%

注：P值为三组HP相对感染量相互比较结果。

2.4HP感染与胃癌病理特征关系的Cox回归分析

本研究中Cox回归分析发现，患者的年龄、浸润程度、淋巴结转移、TNM分期以及HP相对感染量与胃癌患者的预后呈正相关，Cox多因素回归分析发现患者的年龄、TNM分期以及HP相对感染量使得胃癌患者的死亡危险性增加，提示年龄、TNM分期以及HP相对感染量为胃癌发生发展及预后的不利因素，见表3。

表3　HP感染与胃癌病理特征关系的Cox回归分析

2.5HP筛查效果分析

本研究对200例健康体检者筛查HP发现，HP感染阳性率男性患者为43.8%，女性患者为41.1%，差异不具统计学意义；年龄≤50岁HP阳性率为40.4%，年龄>50岁HP阳性率为59.6%，差异具统计学意义(P<0.05)。

3讨论

胃癌已对人们的健康造成了严重的影响，幽门螺杆菌已被很多学者认为是胃癌发生的启动子之一，上个世纪WHO宣布HP是人类胃癌的Ⅰ类致癌源[5]，但其致癌机制尚不明确，可能是途径是幽门螺杆菌感染诱发慢性胃炎，引起胃粘膜的损伤，促进胃粘膜细胞的增殖，从而引发各种癌基因如ARIDIA的突变，导致癌症的发生[6]。

临床上已有大量研究资料表明HP与胃癌的发生关系密切[7-8]，HP感染的患者胃腺癌的发生率远远高于未感染者，且根除HP后，胃癌的发生率则降低。本研究中40例癌旁组织HP相对感染量为5.32±1.96,138例胃癌组织HP相对感染量13.07±6.11，这与文献报道相一致。HP可以促进细胞增殖，HP也可以造成淋巴细胞浸润，从而导致胃癌的发生[9-10]，且HP具有的多种细胞毒素如细胞空泡毒素可致胃黏膜发生炎症反应，从而导致胃癌的发生发展[11]。通过本研究发现，胃癌患者的生存率与患者的浸润程度、淋巴结转移、临床分期以及HP相对感染量相关。患者的浸润深度达到(T3+T4)、淋巴结发生转移以及TNM分期为Ⅲ+Ⅳ明显增加了患者的死亡风险，这提示我们上述因素均为胃癌发生发展的不利因素。本研究中HP相对感染量为1～15胃癌组患者的生存率相较于HP相对感染量为15～25胃癌组患者的生存率增加约1倍，回归系数约为1.061，这提示我们HP感染为胃癌的独立危险因素。这与吴军等[12]研究认为的HP感染与胃癌组织浸润深度以及淋巴结转移与否有关的结果相一致。胃癌的发生发展及预后一直是临床上关心的重点，关于HP感染与胃癌预后的研究报道并未得出统一的结论，但普遍为临床上接受的观点为HP阳性的胃癌患者较之HP阴性的胃癌患者预后要好得多[13],但甘露等[14]则认为HP感染并非是胃癌患者预后良好与否的独立危险因素。关于HP感染对胃癌预后影响的研究依然是以后临床研究的焦点。

HP感染是慢性胃肠病的主要病因，在健康人群中普遍存在，但患病率较低，而且常规体检中也未将其列为必选项目，但国内外研究报道HP与胃癌的相关性值得引起我们注意，对健康人群进行HP筛查不失为一个发现高危人群的手段。通过本研究发现，HP感染阳性率在性别上不存在差异，男性患者为43.8%，女性患者为41.1%，但年龄≤50岁HP阳性率为40.4%，年龄>50岁HP阳性率为59.6%，差异具统计学意义，这与贾继芳[15]的研究结果基本一致。年龄同样为胃癌的高危危险因素，所以对健康人群进行HP筛查可以有效提高对胃癌的早期诊断，从而使得患者获得有效的治疗，获得良好的预后，提高患者的生存质量。

综上所述，幽门螺杆菌感染在胃癌的发生发展以及预后中独立危险因素，对幽门螺杆菌筛查可以有效的干预及预防胃癌的发生。

参考文献

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[14]甘露,张霞,潘军,等.幽门螺杆菌感染状态与胃癌预后的关系〔J〕.第二军医大学学报,2011,32(12):1300-1305.

[15]贾继芳.346例健康体检者幽门螺杆菌检测结果及分析〔J〕.中国卫生保健,2014,28(1):122-123.

(编辑：吴小红)

Correlation Analysis of Helicobacter Pylori Infection and Occurrence and Prognosis of Gastric Cancer and the Clinical Significance of Helicobacter Pylori Screening

ZHAOJun,HUPeizhen.

TheSecondPeople'sHospitalofShaanxi,Xi’an,710005

【Abstract】ObjectiveTo investigate the relationship between helicobacter pylori infection and the occurrence and prognosis of gastric cancer,and the clinical significance of helicobacter pylori screening.MethodsRelative infection of helicobacter pylori was examined by real-time fluorescent quantitative PCR in 138 cases of gastric cancer tissues(test group) and 40 cases of adjacent non-cancerous tissues(control group) of paraffin embedded specimens.ResultsThe relative infection rate of helicobacter pylori in 40 cases of adjacent tissues was (5.32±1.96),and the relative infection rate of helicobacter pylori in 138 gastric cancer tissues was (13.07±6.11),and the difference was statistically significant (P<0.05).The 1-,2-,3-year survival rates of gastric cancer were negatively correlated with the relative infection rate of helicobacter pylori,the higher the helicobacter pylori relative infection rate,the lower the survival rate of gastric cancer patients,the difference was statistically significant (P<0.05).Age,degree of invasion,lymph node metastasis,TNM staging and helicobacter pylori relative infection were positively correlated with the prognosis of gastric cancer patients.Helicobacter pylori infection positive rate in male patients was 43.8%,and in female patients was 41.1%,the difference was not statistically significant;the helicobacter pylori positive rate of patients ≤50 was 40.4%,the helicobacter pylori positive rate of patients >50 was 59.6%,the difference was statistical significance (P<0.05).ConclusionHelicobacter pylori infection can affect the development and prognosis of gastric cancer to certain extent,and helicobacter pylori screening has important clinical significance.

【Key words】Gastric cancer;Helicobacter pylori;Real-time fluorescent quantitative PCR;Clinical screening

DOI：10.3969/j.issn.1001-5930.2016.05.014

中图分类号：R735.2

文献标识码：A

文章编号：1001-5930(2016)05-0743-04

(收稿日期2015-08-07修回日期 2016-02-14)