苯酚硫酸法和高锰酸钾滴定法测定香菇多糖含量的比较

雷于国　王嘉铭　胡国元　雷远征（. 湖北裕国菇业股份有限公司，湖北 随州 44300；. 武汉工程大学化工与制药学院，湖北 武汉 430074）



苯酚硫酸法和高锰酸钾滴定法测定香菇多糖含量的比较

雷于国1王嘉铭2胡国元2*雷远征1
（1. 湖北裕国菇业股份有限公司，湖北 随州 441300；2. 武汉工程大学化工与制药学院，湖北 武汉 430074）

摘要为确定一种比较准确、方便的香菇多糖测定方法，比较了苯酚硫酸法和高锰酸钾滴定法测定香菇多糖含量的差异：两种方法均稳定可行，重现性较好。但苯酚硫酸法测定香菇多糖含量高于高锰酸钾滴定法，苯酚硫酸法不仅灵敏度高，而且回收率也高于高锰酸钾滴定法；高锰酸钾滴定法操作也较繁琐。相对而言，苯酚硫酸法是测定香菇多糖较为理想的方法。

关键词香菇多糖；苯酚硫酸法；高锰酸钾滴定法；含量测定

目前，国内外对香菇多糖的研究比较深入，其测定的方法主要有比色法、滴定法、高效液相色谱法、薄层层析法等[1]。本试验采用苯酚硫酸法和高锰酸钾滴定法对同一批样品香菇多糖含

量进行了比较研究，旨在为以香菇多糖为有效成分的香菇原料和香菇产品质量标准的制定提供理论依据。

1　材料与方法

1.1材料与设备

香菇子实体1号、2号、3号均由湖北裕国菇业股份有限公司提供。

试剂：硫酸、葡萄糖、无水乙醇、重蒸酚、盐酸、硫酸铁铵、硫酸铜、酒石酸钾钠、氢氧化钠、高锰酸钾等，均为分析纯。

设备：Genesys 10s紫外可见分光光度计（美国Thermo Scientific），AL104电子分析天平（梅特勒-托利多（上海）有限公司），KQ2200E型超声清洗器（昆山市超声仪器有限公司）。

1.2方法

（1）样品的制备。取经粉碎过2.00 mm筛的香菇样品10 g加入200 mL水，沸水浴提取2.5 h，过滤收集滤液，滤渣加入200 mL水，沸水浴提取2 h，过滤收集滤液，合并2次滤液，浓缩至30 mL，加入90 mL95%乙醇，静置后离心，弃去上清液，加入75%乙醇10 mL，离心，弃去上清液，用50 mL水将沉淀洗入烧瓶中，加入25%盐酸15 mL，沸水浴2.5 h，过滤到100 mL容量瓶内，定容至刻度，备用。

（2）苯酚硫酸法。①标准曲线的绘制：参照中华人民共和国农业行业标准NYT 1676-2008《食用菌中粗多糖含量的测定》进行[2]。②香菇子实体多糖含量测定：3批香菇子实体干粉分别取10 g按1. 2（1）项下―样品的制备‖方法制备样品溶液，分别取1 mL样品溶液，按中华人民共和国农业行业标准NYT 1676-2008《食用菌中粗多糖含量的测定》中的苯酚硫酸法测定[2]。③精密度试验：在按1.2（2）中②项方法测定香菇1号样品多糖含量时，连续测定6次考察仪器精密度。④稳定性实验：在按1.2（2）中②项方法测定香菇1号样品多糖含量反应结束后0 min，5 min，10 min，20 min，40 min，60 min，120 min的吸光度[3]。⑤回收率实验：分别量取3份香菇1号样品溶液0.4 mL于试管中，依次添加100 mg/L的标准葡萄糖溶液0.36 mL，0.30 mL，0.24 mL，并加入水使体积达到1 mL，空白对照为水1 mL，测定多糖含量，计算回收率[3]。⑥重现性实验：称取同一批次香菇样品3份，按照1.2（1）项下―样品的制备‖方法和1.2（2）中②项下―样品多糖含量测定‖方法进行操作，考察操作方法的重现性[3]。

（3）高锰酸钾滴定法。①香菇多糖含量的测定：3批香菇子实体干粉分别取10 g按1.2（1）项下―样品的制备‖方法制备样品溶液，分别取样品溶液10 mL加入烧杯中，然后加入25 mL费林试剂甲液和乙液，加入40 mL蒸馏水。加热溶液，使4 min内沸腾，然后保持沸腾2 min，趁热过滤，用60 ℃100 mL蒸馏水洗涤三角瓶和沉淀，弃去滤液，取50 mL硫酸铁铵溶液使滤纸上的沉淀溶解，然后用50 mL60 ℃热水洗涤，取滤液，加入20 mL2 mol/L硫酸，用高锰酸钾滴定至微红色并保持30 s不褪色，记录高锰酸钾的消耗量，计算香菇多糖含量[4～6]。②回收率实验：分别量取3份香菇1号样品提取溶液4 mL于烧杯中，加入100 mg/L的标准葡萄糖溶液3.6 mL，3.0 mL，2.4 mL，加水使体积达到10 mL，按照1.2（3）中①项方法用高锰酸钾进行滴定，计算香菇多糖含量[1,3]。③重现性实验：称取同一批次香菇样品3份，按照1.2（1）项下―样品的制备‖方法和1.2（3）中①项下―样品多糖含量测定‖方法进行操作，考察操作方法的重现性[3]。

2　结果与分析

2.1苯酚硫酸法的实验结果与分析

（1）标准曲线的绘制及回归方程的建立。根据NYT 1676-2008《食用菌中粗多糖含量的测定》方法，制作的葡萄糖标准曲线如图1所示。通过对数据的线性回归，获得吸光度与葡萄糖质量浓度的回归方程：Y＝1.0097X－0.0085，相关系数R2＝0.9996，表明方程的拟合度较好。

图1　苯酚硫酸法的标准曲线

（2）精密度的测定结果。精密度实验结果（n=6），6次测定吸光度A分别为1.062，1.063，1.060，1.060，1.061，1.062，所测6次RSD为0.12%。

（3）稳定性实验的测定结果。稳定性实验结果，随着放置时间的延长，吸光度逐渐减小，0 min，5 min，10 min，20 min，40 min，60 min，120 min的吸光度A分别为1.061，1.059，1.059，1.058，1.058，1.057，1.053。建议在40 min内完成实验。

（4）香菇多糖含量的测定结果。香菇1号、2号、3号中多糖含量3次检测均在3.5%以上（表1），符合无限极（中国）有限公司的验收标准。

表1　苯酚硫酸法测定香菇多糖含量及重现性的结果

（5）回收率实验的测定结果。通过加样回收率的测定，可以考验试验方法的准确度。以葡萄糖标准样品为对照，以苯酚硫酸法进行香菇多糖的含量分析结果，加样平均回收率为101.07%，RSD为0.55（表2），所以本方法的可信度较高。

（6）重现性实验的测定结果。为考察上述测定方法是否可靠，用苯酚硫酸法进行香菇多糖的含量分析，结果如表1所示，3批次样品的RSD分别为0.20%，0.20%，0.12%，实验重复性好，所得实验结果可靠。

2.2高锰酸钾滴定法实验结果与分析

表2　苯酚硫酸法和高锰酸钾滴定法的回收率实验结果

注：（1）苯酚硫酸法样品含量为42.36 μg，高锰酸钾滴定法为14 mg；（2）平均回收率，苯酚硫酸法为101.07%，高锰酸钾滴定法为93.0%；（3）RSD，苯酚硫酸法为0.55%，高锰酸钾滴定法为3.2%。

（1）香菇多糖含量的测定结果。由表3可知，香菇1号和香菇2号3次检测中1次符合无限极（中国）有限公司的验收标准，香菇3号3次检测中3次均符合无限极（中国）有限公司的验收标准。

表3　高锰酸钾滴定法测定香菇多糖含量及重现性实验结果

（2）回收率实验测定结果。通过加样回收率的计算，可以考察试验方法的准确度。以葡萄糖标准品为对照，以高锰酸钾滴定法进行香菇多糖含量的分析结果，回收率为93%（表2），RSD 为3.2%，可见本方法较为准确。

（3）重现性实验的测定结果。为考察上述测定方法是否可靠，设计重现性实验，用高锰酸钾滴定法进行香菇多糖的含量分析，结果如表3所示，3批次样品的RSD分别为0.12%，0.15%，0.44%，实验重复性好，所得实验结果可靠。

3　讨　论

苯酚硫酸法的显色化合物和香菇多糖的溶液均为橙黄色，易导致实测值偏高，建议先进行脱色处理再测定；苯酚易氧化，测定过程中要注意避光，操作要迅速。高锰酸钾滴定法所测结果偏低，相对标准偏差大，操作较繁琐。

实验结果表明，2种方法的重现性均较理想。苯酚硫酸法的灵敏度比高锰酸钾滴定法高，但特异性不够强，容易出现假阳性。而高锰酸钾滴定法的测定结果偏低，且灵敏度不够高。苯酚硫酸法的回收率高于高锰酸钾滴定法。

本研究认为苯酚硫酸法是测定香菇多糖较为理想的方法，较适用于基层单位使用，与文献[1]报道的结论一致。

致谢感谢湖北裕国菇业股份有限公司的资助和武汉工程大学的支持！

参考文献

[1] 于村, 丁钢, 强俞, 等. 莎香菇多糖测定的方法学研究[J]. 中国公共卫生, 2000, 16(3): 245-246.

[2] NT/Y 1676-2008. 食用菌中粗多糖含量的测定[S]. 中华人民共和国农业行业标准, 2008.

[3] 郭晓蕾, 朱思潮, 翟旭峰, 等. 硫酸蒽酮法与硫酸苯酚法测定灵芝多糖含量比较[J]. 中华中医药学刊, 2010, 28(9): 2000-2002.

[4] GB/T 5009.7-2009. 食品中还原糖的测定[S]. 中华人民共和国国家标准, 2009.

[5] 香菇多糖含量检验指引[S]. 无限极(中国)有限公司中草药原料香菇验收标准, 2015.

[6] GB/T 15672-2009. 食用菌中总糖含量的测定[S]. 中华人民共和国国家标准, 2009.

云南南华县多措并举大力发展野生食用菌产业

野生菌产品是云南南华县产业发展的一大特色。近年来，该县先后建成野生食用菌交易市场3个，培育野生食用菌收购经营户100余个，成为中国西南地区重要野生食用菌交易集散地之一，从2003年起成功举办12届“中国〃南华野生菌美食文化节”大力宣传南华野生食用菌，并于2014年6月起创建中国〃南华野生菌信息港，吸引国内外客商前来品尝生态美食、投资野生食用菌等产业，使野生食用菌通过网络走向世界。产品出口日本、韩国、欧洲等国家和地区，2015年，全县野生食用菌集散交易量6738吨，交易额4.08亿元。

为了让“山货变商品，商品变精品，精品变高端”，南华县努力打造野生食用菌品牌。2015年12月31日，“南华松茸”通过了国家地理标志产品保护形式审查。目前，该县共有野生食用菌商标15件，其中彝香、雲蕈、宏怡3件为云南省著名商标。

（摘编自2016.2.22《中国食用菌商务网》http://www.vegnet.com.cn/News/1050011.html）

Comparison of the content of lentinan with the phenol sulfuric acid and the potassium permanganate titration method

Lei Yuguo1Wang Jiaming2Hu Guoyuan2*Lei Yuanzheng1

(Hubei Yuguo Gu Ye Co., Ltd., suizhou 441300, China; 2. School of Chemical Engineering & Pharmacy, Wuhan Institute of Technology , Wuhan 430074, China)

AbstractIn order to determine a more accurate and convenient method for the content determination of lentinan, the differences between the phenol sulfuric acid and the potassium permanganate titration method for the determination of content of lentinan were compared. The result showed that the determination value of the phenol sulfuric acid method was higher than the potassium permanganate titration method, and that the phenol sulfuric acid method was not only higher in sensitivity，but also was satisfied of restore rate, and that the operation of the potassium permanganate titration method was complicated. The two methods are stable and feasible, with good reproducibility. The phenol sulfuric acid method was more reliable and accurate by comparison，it can be considered as the optimum assay method for the content determination of lentinan.

Key wordsLentinan; the phenol sulfuric acid method; the potassium permanganate titration method; content determination

*通讯作者：胡国元（1965—），男，教授，博士，从事食药用菌发酵及其代谢产物研究，E-mail：hgy701@163.com

作者简介：雷于国（1966—），男，高级经济师，从事企业管理

中图分类号：S646

文献标识码：A

文章编号：2095-0934（2016）02-094-04