鸡骨草叶总生物碱的含量测定及其体外抗氧化活性研究

刘燕等

[摘要] 目的 通过对鸡骨草叶总生物碱的体外抗氧化活性研究，为充分利用鸡骨草资源提供理论依据。 方法 料液比为（g∶mL）1∶9，超声辅助功率60 W，提取时间30 min，提取2次，提取温度70℃，提取剂为70%乙醇。通过紫外-可见分光光度法测定鸡骨草叶中总生物碱的含量及其提取物清除自由基活性的能力。 结果 鸡骨草叶提取物中总生物碱含量为1.89 mg/g；其提取物具有一定还原Fe3+的能力；对DPPH自由基活性具有较好的清除能力，样品体积为400 μL时，其清除率是90%；样品体积为100 μL时，清除率为85.53%。 结论 鸡骨草叶总生物碱有较好的抗氧化活性，其总生物碱具有一定的抗氧化活性，且抗氧化活性随着体积的增大而增强。

[关键词] 鸡骨草叶；总生物碱；含量测定；抗氧化活性

[中图分类号] R284.2 [文献标识码] A [文章编号] 1673-7210（2016）10（a）-0025-04

Determination and antioxidant activities of total alkaloids from the leaves of Abrus Cantoniensis Hance

LIU Yan1 LIU Yan1 MA Yuying1 CHENG Shijia1 LI Yuan1 LIANG Qingqing1 HUANG Suoyi2.3 YU Qiaorong3，4

1.College of Clinical Medicine， Youjiang Medical University for Nationalities， the Guangxi Zhuang Autonomous Region， Baise 533000， China； 2.College of Pharmacy， Youjiang Medical University for Nationalities， the Guangxi Zhuang Autonomous Region， Baise 533000， China； 3.Guangxi Colleges and Universities Key Laboratory of the Characteristics of Ethnic Medicine of the Youjiang Valley， the Guangxi Zhuang Autonomous Region， Baise 533000， China； 4.College of Pharmacy， Guangxi University of traditional Chinese Medicine， the Guangxi Zhuang Autonomous Region， Baise 530299， China

[Abstract] Objective To study on the antioxidant ability of total alkaloids from the leaves of Abrus Cantoniensis Hance， to provide a theoretical basis for full use of the Abrus Cantoniensis Hance resources. Methods Solid-liquid ratio （g∶mL） 1∶9， ultrasound-assisted power 60 W， extraction time 30 min and extraction 2 times， extraction temperature 70℃， extraction solvent 70% ethanol， determining the total alkaloids content of the leaves of Abrus Cantoniensis Hance and ability to clear free radicalsthg by UV visible spectrophotometric. Results Abrus Cantoniensis Hance extract contained higher total alkaloids （1.89 mg/g）， extract had stronger ability to scavenge free radicals. The clear rate was 90% when the sample volumn was 400 μL， and 85.53% when 100 μL. Conclusion The total alkaloids of Abrus Cantoniensis Hance has a good antioxidant activity， and antioxidant activity becomes enhanced with increasing volume.

[Key words] Abrus cantoniensis Hance Leaves； Total alkaloids； Determination； Antioxidant activity

鸡骨草（Hance）是一种流行的中国蔬菜食用的饮料、汤或民间医药。它是豆科相思子属植物广州相思子（Abrus Cantoniensis Hance）的干燥全草，是一种常用中药材，其性凉，味甘淡[1]，具有清热解毒，疏肝止痛之疗效，鸡骨草还可在春夏季节用来煲汤作为食疗，是临床常用中药，广泛用于治疗黄疸，胁肋不舒，胃脘胀痛，急、慢性肝炎及肝硬化腹水等疾病[2-3]。具有对肝脏的保护作用，抗菌和抗病毒作用，抗炎、免疫调节作用，降脂作用，对羟基自由基的清除作用等[4]。原产地于广西、广东等南部省区，以广西的种植面积最大，是两广的地道药材，其植株含相思子碱、糖类化合物、皂苷、黄酮苷、胆碱、甾醇类、氨基酸等化学成分[2-5]。也是含天然生物碱丰富的植物之一。

总生物碱是存在于自然界（大部分存在于植物[6]，但在一些动物上也有发现）中的一类含氮的碱性有机化合物，有似碱的性质，因此以前又称为赝碱。大多数为环状结构，氮素多包含在环内，具有明显的生物活性，是中草药中重要的有效成分之一。具有光学活性。目前研究表明[7-9]，由于氧化损伤的机制在疾病的发生发展中起着重要的作用，所以中药的抗氧化作用是其达到治疗效果的重要因素。很多疾病包括肿瘤、心脑血管疾病、老年痴呆等都不同程度地与自由基活性损伤有关。而生物碱类化合物具有很强的抗菌活性[10]、抑制活性氧、清除自由基等[11]作用，同时毒副作用相对小于化学合成药，因此一直是人们竭力于开发新药的重要研究领域。 目前国内外对鸡骨草黄酮类和多糖类成分测定和含量测定的研究较多，而有关生物碱类的成分及含量测定的研究国内外报道较少见。但是，近年来，对鸡骨草叶总生物碱的研究引起了人们极大的兴趣。

1 仪器与材料

1.1 试验材料

鸡骨草（Abrus Cantoniensis Hance）叶购于广西百色市右江区农贸市场，经右江民族医学院民族医教研室覃道光副教授鉴定为豆科相思子属植物鸡骨草的叶。

1.2 主要实验器材

KQ5200DB型数控超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）、752N紫外可见分光光度计（上海精密科学仪器有限公司）、电子分析天平FA1204（上海天美天平仪器有限公司）、电热恒温鼓风干燥箱DHG-9070A型（上海精宏实验设备有限公司）、台式连续投料粉碎机DF-15（温岭市林大机械有限公司）、电热式恒温水浴锅HHS-214（江苏金坛宏凯仪器厂）、SHB-III循环水式多用真空泵（郑州长城科工贸有限公司）、PHSJ-4A型实验室pH计（上海仪电科学仪器股份有限公司）。

1.3 试剂

盐酸小檗碱标准品（中国食品药品检定研究院，批号：110713-201212）、ABTS对照品（上海金穗生物科技有限公司，批号：C18H24N606S4）；DPPH对照品（日本东京化成工业株式会社，批号：217-591-8）。其他试剂均为国产分析纯。

2 方法

2.1 生物碱的提取

称取鸡骨草叶粉末500 g，提取条件是：超声辅助功率60 W，提取时间30 min/次，提取2次，料液比（g∶mL）1∶9，提取温度70℃，提取剂70%乙醇，合并滤液，经石油醚去除色素，用氯仿萃取2次，取下层液体水浴蒸发浓缩至褐色浸膏[12]。

2.2 标准曲线的制备

2.2.1 标准溶液的配制 称取5.0 mg干燥的盐酸小檗碱标准品，用蒸馏水溶解置50 mL容量瓶中，稀释至容量瓶的刻度线，摇匀备用。用移液管从中精密吸取5.0 mL该溶液于25 mL的容量瓶中，加入0.1 mol/L的盐酸溶液并稀释至容量瓶的刻度线，制0.02 mg/mL的液体作为盐酸小檗碱对照品母液[13]。

2.2.2 标准曲线的绘制 分别吸取0.02 mg/mL的盐酸小檗碱对照母液1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0 mL置于10 mL容量瓶中，加入0.1 mol/L的盐酸溶液定容，摇匀备用，作为实验组，在波长为345 nm下测定其吸光值（A）[14]。选择等体积的0.1 mol/L的盐酸溶液，作为空白对照组，在相同的条件下测定其吸光值（A），以横坐标为浓度C，纵坐标为吸光值（A），得出标准曲线：A=0.23+1.2675C（r2=0.9997）。

2.2.3 样品含量的测定 称取提取物5.0 g置于烧杯中，用蒸馏水溶解，置于250 mL的容量瓶中，加蒸馏水定容，制成0.02 g/mL的液体混合均匀备用；精密吸取5.0 mL提取物溶液至10 mL容量瓶中，加入0.1 mol/L盐酸溶液定容，混合均匀备用；采用二倍稀释法得到5 mg/mL的溶液[15]，再次用紫外-可见分光光度法于345 nm波长下测定其吸光值（A），通过标准曲线方程计算总生物碱含量为1.89 mg/g[16]。

2.3 总生物碱体外抗氧化活性的测定

2.3.1 测定总生物碱还原Fe3+活性的能力 取5支试管中，分别加入0.1、0.2、0.3、0.4、0.5 mL的0.02 g/mL样品，体积少于0.5 mL则用蒸馏水补至体积相等。加入1%铁氰化钾及pH=6.6磷酸缓冲液各2.5 mL于50℃水浴箱中恒温20 min后，立即加入10%三氯乙酸2.5 mL，置于4000 r/min的转数下离心10 min，取上清溶液2.5 mL，加入2.5 mL的蒸馏水及0.5 mL的0.1%三氯化铁，10 min后，采用紫外-可见分光光度法于波长700 nm处测吸光度值（A）[17]。

2.3.2 总生物碱对DPPH自由基清除活性的测定 取5支试管，分别加入0.1、0.2、0.3、0.4、0.5 mL的样品，加蒸馏水补至体积相等。在避光条件下分别加入4 mL浓度为24 mg/L的DPPH乙醇（95%）溶液摇匀，作为实验组，常温下避光30 min，采用紫外-可见分光光度法在517 nm处测吸光度（Ai），以等量不加样品提取液的DPPH乙醇（95%）液为对照组，采用同样的方法测定对照组吸光度（A0）。清除率=（1-Ai/A0）×100%[18]。

2.3.3 总生物碱对ABTS自由基清除活性的测定 分别将7 mmol/L的ABTS溶液50 mL与2.45 mmol/L的过硫酸钾溶液50 mL在常温下混合，将混合后溶液作为ABTS储备液，并在室温下避光16 h，用甲醇将置于暗处16 h后的溶液稀释至734 nm波长下的吸光度为0.7。分别吸取样品20、40、60、80、100 μL，置于支试管中，再用80%乙醇溶液补至体积相等，分别加入2 mL的ABTS储备液，常温下反应6 min后，在相同的波长下测定其吸光度值（Ai）。测定2 mL的ABTS储备液与100 μL 80%乙醇溶液混合后的吸光度值（A0）；以2 mL甲醇代替ABTS储备液，采用紫外-可见分光光度法测定其吸光度值（Aj）。清除率=[（A0-Ai+Aj）/A0]×100%[19]。

2.4 结果与分析

2.4.1 鸡骨草叶总生物碱还原Fe3+的能力 吸光度值（A）越大代表被测样品还原Fe3+的能力的越强，鸡骨草叶总生物碱具有一定还原Fe3+的能力，样品量越大其吸光度值就越大，即还原Fe3+的能力就越强[20]。

2.4.2 总生物碱对DPPH自由基活性的清除 1，1-二苯-2-苦基肼（DPPH·）是一种很稳定的自由基[10]，鸡骨草叶总生物碱对DPPH自由基活性具有较好的清除能力；样品体积为400 μL时， 其清除率是90%。样品体积越大清除率就越大，两者呈量效关系，样品体积在300～400 μL范围内，总生物碱对DPPH自由基活性具有较强的清除作用。见图2。

2.4.3 总生物碱对ABTS自由基活性的清除 鸡骨草叶总生物碱对ABTS自由基活性具有显著的清除作用，样品体积在100 μL时，清除率为85.53%。在20～100 μL范围内，鸡骨草叶总生物碱对ABTS自由基活性的清除作用随着样品体积的增加而增强。见图3。

3 讨论

本实验在综合了前人对鸡骨草成分提取的研究[4]以及一般总生物碱的提取、含量测定的研究基础上，运用较为简单的超声辅助乙醇溶剂提取法提取鸡骨草叶总生物碱，并对其含量进行了测定[21]。

根据生物碱具有抗氧化能力的性质得出，鸡骨草叶总生物碱具有一定还原Fe3+的能力和对DPPH自由基活性、 ABTS自由基活性具有一定的清除能力，不同体积样品的抗氧化能力活性差异显著。鸡骨草叶总生物碱各抗氧化活性指标均随样品体积的增加而增强，与样品体积存在剂量依赖关系。广西鸡骨草资源丰富，开发潜力巨大，其药用价值和食用价值备受关注。鸡骨草叶总生物碱具有良好的抗氧化能力，具有低毒、副作用小的特点，应用前景广阔。

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（收稿日期：2016-06-20 本文编辑：赵鲁枫）