TGF- α在LASIK手术患者泪液中的表达及其临床意义

赵瑞博，郭永红，张凌子

(西安爱尔古城眼科医院 屈光手术科，陕西 西安　710061)



TGF-α在LASIK手术患者泪液中的表达及其临床意义

赵瑞博，郭永红，张凌子

(西安爱尔古城眼科医院 屈光手术科，陕西 西安710061)

[摘要]目的：探讨转化生长因子α(TGF- α)在准分子激光原位角膜磨镶术(LASIK)患者泪液中的表达及其临床意义。方法:将40例(80眼)在我院行LASIK手术治疗患者作为研究对象，采用双抗体夹心酶联免疫吸附分析法(ELSIA)检测患者手术前后不同时间点泪液中TGF- α的表达情况，分析泪液中TGF- α浓度与角膜创伤愈合的关系。结果:LASIK术后1 d泪液TGF- α浓度最高，然后呈逐渐下降的趋势，至术后3个月降至最低，且与术前水平相比较，差异无统计学意义(P>0.05)，而术后1、7 d及1个月的泪液TGF- α浓度与术前比较差异均有统计学意义(P<0.05)，且术后各个时间点比较差异有统计学意义(P<0.05)。LASIK术后，基质层角膜细胞减少值、基质层碎片计数以术后1 d最高，随后不断下降，术后不同时间点比较,差异有统计学意义(分别F=5.832、F=6.369，均P<0.05)；且基质层角膜细胞减少值、基质层碎片计数与泪液中TGF- α浓度呈正相关(分别r=0.68、0.61，P<0.05)。术后不同时间点的角膜内皮细胞计数比较，差异无统计学意义(P>0.05)，且与TGF- α浓度无相关性(P>0.05)。结论:LASIK术后泪液中TGF- α浓度呈先升高后降低至术前水平的趋势，术后泪液中高度表达的TGF- α对角膜细胞的增殖、分裂、趋化、移行等过程具有很好的促进作用，有利于角膜创伤的愈合。

[关键词]准分子激光； 原位角膜磨镶术； 转化生长因子α； 泪液； 角膜创伤愈合

准分子激光原位角膜磨镶术(laserinsituker atomileusis，LASIK)是一种有效的角膜创伤修复手术，具有矫治范围广、可预测性好等优势[1]。LASIK术后的角膜创伤修复是一种复杂的过程，受泪液中多种细胞因子的影响[2- 3]。泪液中存在多种含量较低的细胞因子，这些细胞因子参与眼表正常功能的维持及损伤修复的过程[4]，其中TGF-α是泪液中一种重要的多肽活性物质，能促进多种细胞的增殖与分化过程，促进组织修复、组织血管发生、伤口愈合等。此外，对角化细胞的生长和迁移也具有一定的刺激作用，还可参与机体的免疫反应过程[5]。作者对行LASIK手术患者手术前后泪液中TGF-α浓度的变化情况进行观察，并分析其在角膜创伤愈合反应中的作用。

1资料与方法

1.1一般资料

选择2013年1月至2014年1月在我院行LASIK手术治疗的40例(80眼)患者作为研究对象。纳入标准：所有患者均无眼疾、手术史、外伤史及角膜接触镜配戴史；围手术期间所有患者均未使用过促上皮生长等影响角膜愈合的药物；患者的眼屈光度稳定时间均较长(2年以上)；屈光度范围：球镜-2.0 D～-10.0 D范围内，柱镜<-3.0 D；术前患者的眼压<21 mmHg；所有患者术前均经视力、眼底、眼压、屈光度状态、裂隙灯等检查，未发现眼底、角膜厚度及地形图存在异常；患者术前均知情同意并签署知情同意书。排除标准：圆锥角膜、干眼、病毒性角膜炎活动期、慢性泪囊炎、视网膜病变及视神经病变、青光眼等影响术后角膜愈合疾病及其他眼科疾病；排除系统性红斑狼疮、类风湿关节炎等自身免疫性疾病患者，排除合并糖尿病患者；排除不配合研究患者。研究对象中18例(36眼)为男性，22例(44眼)为女性，年龄19～35(25.6±3.3)岁，术前等效球镜度数为[(-4.46)±(-1.41)] DS。

1.2方法

1.2.1泪液标本收集同一例患者手术前，术后1 d、7 d、1个月、3个月的泪液标本收集均由一人操作完成。制作直径为3 mm的圆形滤纸片，高压消毒灭菌后将其放入术眼下穹窿外1/3处的结膜囊内，嘱咐患者轻闭双眼3 min，3 min后将滤纸取出并放入已经高压消毒的EP管内，再放入冰箱(-20 ℃)保存待测。

1.2.2泪液标本中TGF-α浓度检测泪液中TGF-α浓度采用ELSIA法检测，试剂盒为美国R&D Systems公司生产，操作严格按照试剂盒的说明书进行。

1.3观察指标

观察LASIK术前，术后1、7d及1、3个月泪液中TGF-α的浓度。在共聚焦激光显微镜下选择清晰的显微图像，由两名实验人员对基质角膜细胞、角膜基质层碎片、角膜内皮细胞进行手工计数，再根据NAVIS图像分析软件定量分析所有患者的基质层角膜细胞、角膜基质层碎片计数、角膜内皮细胞计数情况，取平均值，计算基质层角膜细胞减少值，并对术后不同时间点的统计数据进行比较。

1.4统计学处理

2结果

2.1LASIK术前、术后不同时间点泪液中TGF-α的表达见表1。

术后泪液中TGF-α浓度呈先升高后降低的趋势，以术后1 d最高，术后1、7 d及1个月泪液TGF-α浓度与术前比较，差异均有统计学意义(P<0.05)；且术后不同时间点比较差异也有统计学意义(P<0.05)。

时 间TGF-α表达量/pg·ml-1术前177.62±58.53术后1d602.57±132.66术后7d445.48±85.93术后1个月252.36±69.71术后3个月185.32±44.23F值5.916P值0.015

2.2LASIK术后不同时间点基质层角膜细胞减少值、角膜基质层碎片计数、角膜内皮细胞计数比较见表2。

个/mm2

LASIK术后1 d角膜细胞减少值及基质层碎片计数最高，随后不断下降，术后不同时间点比较，差异有统计学意义(分别F=5.832、F=6.369，均P<0.05)。LASIK术后不同时间点的角膜内皮细胞计数比较，差异无统计学意义(F=0.872，P>0.05)。经Spearman相关性分析可知，基质层角膜细胞减少值、角膜基质层碎片计数与泪液中TGF-α浓度存在正相关性(分别r=0.68、0.61，P<0.05)，而角膜内皮细胞计数与TGF-α浓度无相关性(P>0.05)。

3讨论

LASIK术后角膜创伤愈合机制较为复杂，许多学者对LASIK术后角膜创伤修复过程的机制进行了研究，发现修复过程与多种细胞及细胞因子各自的作用及相互间的作用密切相关[6- 7]。大量细胞因子、酶类、转录因子等构成一个整体网络系统，参与角膜创伤修复过程的精确调控[8]。LASIK术后严格控制或减轻伤口愈合反应有利于获得更满意的治疗效果[9]。

大量研究证实，在角膜的发育及角膜完整性的维持过程中，泪液中TGF-α表达具有十分关键性作用[10- 11]。TGF-α是一种由多种细胞产生的调控细胞生长的多肽类活性物质，同时也是一种强有力的促进细胞有丝分裂的正性生长因子，其生物学作用十分广泛，分泌后结合表皮生长因子受体(epidermalgrowthfactorreceptor，EGF- R)而发挥作用，能在多种细胞增殖与分化、组织修复、伤口愈合、角化细胞生长和迁移、免疫反应等过程中发挥很好的促进作用[12]。泪液中的TGF-α大多由角膜上皮细胞合成和分泌，少部分为外源性。TGF-α可促进角膜多种细胞的生物学过程，如细胞的增殖、分化和移行等，邻近上皮细胞的增殖和移行可完成对角膜伤口的修复。此外，TGF-α还可通过正向调节TGF-β1的间接作用机制来促进角膜成纤维细胞的增殖、分化及细胞外基质分泌，从而进一步促进角膜创伤修复[13]。

本研究对LASIK术前、术后不同时间点泪液中TGF-α的表达量进行检测，结果显示，TGF-α浓度在术后1 d达到最高，术后各时间点泪液中TGF-α浓度比较差异有统计学意义(P<0.05)。提示泪液中TGF-α在术后早期高度表达，这与LASIK术对角膜的损伤有关。角膜上皮细胞对TGF-α最敏感，角膜出现损伤后，泪液中细胞因子TNF-α水平可产生很大的变化，在早期泪液中表达量可急剧增加，促进角膜细胞的增殖和移行，从而完成角膜伤口的修复过程。目前，国内外较多学者的研究中已发现了这一点，均认为LASIK术后泪液TGF-α表达量可发生较大的波动[14- 15]。但本研究还进一步发现，LASIK术后随着时间的进展，泪液TGF-α表达量逐渐下降，尤其是3个月后，泪液中TGF-α的浓度接近于术前水平，术后1、7 d、1个月与术前比较差异有统计学意义(P<0.05)，表明随着角膜创伤的修复，TGF-α表达水平逐渐恢复稳定状态。这是由于手术应激导致机体角膜细胞释放细胞因子参与创伤修复调控，创伤一旦修复，调控机制恢复正常状态，故泪液TGF-α表达量恢复正常表达水平。本研究发现，LASIK术后基质层角膜细胞减少值、基质层碎片计数与泪液中TGF-α表达量的动态变化规律相似，且经Spearman分析存在正相关性，说明LASIK术后角膜创伤的愈合与TGF-α参与的角膜多种细胞生物学过程密切相关，通过促进细胞增殖、分化和移行等而实现对创伤修复的调控。对此，尚无较多的文献报道，还有待于进一步研究。

[参考文献]

[1] 盛小红.准分子激光原位角膜磨镶术前后泪液中转化生长因子α(TGF-α)的表达[D].大连：大连医科大学，2010．

[2] 丁月.LASIK手术前后泪液中肝细胞生长因子含量的变化[D].大连：大连医科大学，2012．

[3] 陈静，陈艺，韩苏宁，等.Epi- LASIK术中上皮瓣去留对术后角膜上皮下雾状混浊及泪液中TGF-β1的影响[J].南方医科大学学报，2013，33(5):631- 634．

[4] 牛广增.准分子激光原位角膜磨镶术后泪液中神经生长因子表达与角膜知觉恢复的研究[D].石家庄：河北医科大学，2011．

[5] 牛广增，苏蕊，范玉香，等.准分子激光原位角膜磨镶术后泪液中神经生长因子表达与角膜知觉恢复的研究[J].眼科新进展，2012，32(11):1050- 1053．

[6] DU Z，ZHAO W，HUANG Z，et al.Inhibition effect of tetrandrine on haze formation after Epi- LASIK surgery in rabbits[J].Curr Eye Res，2011，36(8):699- 705．

[7] TORII H，NEGISHI K，WATANABE K，et al.Myopic regression after phakic intraocular lens implantation and LASIK[J].Optometry Vision Sci，2014，91(2):231- 239．

[8] QUEIROS A，VILLA- COLLAR C，JORGE J，et al.Peripheral refraction in myopic eyes after LASIK surgery[J].Optometry Vision Sci，2012，89(7):977- 983．

[9] KIM S J，CHUNG T W，CHOI H J，et al.Ganglioside GM3 participates in the TGF- beta 1- induced epithelial- mesenchymal transition of human lens epithelial cells[J].Biochem J，2013，449(Pt.1):241- 251．

[10] KIM Y W，PARK J，LEE H J，et al.TGF-βsensitivity is determined by N- linked glycosylation of the type Ⅱ TGF-βreceptor[J].Biochem J，2012，445(3):403- 411．

[11] 周远沛.碱性成纤维细胞生长因子对LASIK术后角膜神经修复和角膜知觉恢复的影响[D].郑州：郑州大学，

2014．

[12] 廉井财，顾丽琼，石海云，等.准分子激光原位角膜磨镶术前后泪液中TNF-α、IL- 2和NGF的表达[J].上海交通大学学报：医学版，2008，28(6):669- 671．

[13] 郭秀瑾.不同方式的准分子激光表面切削术后角膜创伤愈合反应的实验研究[D].石家庄：河北医科大学，2010．

doi：10.3969/j.issn.1671- 6264.2016.02.022

[中图分类号]R779.65

[文献标识码]B

[文章编号]1671- 6264(2016)02- 0239- 03

[作者简介]赵瑞博(1976-)，男，陕西西安人，主治医师，在读硕士研究生。E- mail: 2544249223@qq.com

[收稿日期]2015- 09- 22[修回日期] 2015- 12- 24

[引文格式] 赵瑞博，郭永红，张凌子.TGF-α在LASIK手术患者泪液中表达及临床意义[J].东南大学学报:医学版，2016，35(2)：239- 241.

·论著·