老年三阴型乳腺癌中高迁移率蛋白和聚ADP核糖聚合酶1表达与预后相关性

戚建芬　王　琳　谢　曦

(黔南州医院胃肠外科，贵州　都匀　558000)



老年三阴型乳腺癌中高迁移率蛋白和聚ADP核糖聚合酶1表达与预后相关性

戚建芬王琳谢曦1

(黔南州医院胃肠外科，贵州都匀558000)

〔摘要〕目的观察老年三阴型乳腺癌中高迁移率蛋白(HMG)A2和聚ADP核糖聚合酶(PARP)1的表达，分析其在乳腺癌组织中表达的临床特点并探讨其与预后的相关性。方法选择三阴型老年局部晚期乳腺癌标本和正常乳腺组织各68例，免疫组化染色(SP)法检测HMGA-2和PARP1蛋白在不同组织中表达，分析其与临床分级、病理类型及淋巴结转移等临床特点相关性，并通过生存曲线法比较两组预后情况。结果乳腺癌组织中HMGA-2、PARP1的阳性表达率分别为51.47%、67.65%。HMGA-2、PARP1表达与无瘤生存时间、淋巴结转移和分化程度相关(P<0.05)。Pearson直线相关分析显示，三阴乳腺癌组织中 HMGA-2和PARP1的表达呈正相关(r=0.399，P<0.001)。生存曲线分析结果提示随着HMGA-2和PARP1阳性表达增加，患者术后生存期缩短。结论老年三阴型乳腺癌中PARP1和HMGA-2表达可作为乳腺癌的分子标志物，PARP1和HMGA-2阳性表达率越高，分化程度越高，更易发生淋巴结转移，无瘤生存时间愈短，预后差。

〔关键词〕乳腺癌；高迁移率蛋白(HMG)A2;聚ADP核糖聚合酶(PARP)1;三阴型

在美国，每年有18.5万妇女罹患乳腺癌，并且有4.4万人死于这种疾病，年纪越大，患者乳腺癌的概率越大〔1〕。 “三阴乳腺癌”特指孕激素受体(PR)及人表皮生长因子受体(HER)-2和雌激素受体(ER)均为阴性的乳腺癌患者〔2〕。这种乳腺癌在所有类型的乳腺癌中约占15%，具有特异的生物学标志物和临床病理特征。聚 ADP 核糖聚合酶(PARP)1是细胞发生基因突变后，碱基切除修复通路的核心分子，抑制PARP1表达就能阻断细胞碱基切除修复通路，这样细胞就不能得到损伤修复，从而发生凋亡〔3〕。高迁移率蛋白(HMG)A2是多种肿瘤细胞染色体断裂点编码的一个基因，目前此基因的异常表达与肿瘤的关系已经在国际上引起关注。本研究通过分析HMGA2和PARP1在正常组织和癌症组织中的表达差异，探讨其与预后的相关性。

1资料与方法

1.1一般资料2010年3月至2015年3月我院病理科存档的68例乳腺癌石蜡标本作为实验组。经过病理活检确诊，均为女性，平均年龄(65.72±4.78)岁，病理类型均为浸润性导管癌。根据2014年中国《NCCN乳腺癌临床实践指南》〔4〕，均为三阴乳腺癌，其中Ⅱ B 期28 例，Ⅲ A 期 15 例，Ⅲ B 期17例，Ⅲ C 期 8 例。均给予3个周期环磷酰胺+吡柔比星方案化疗，后行乳腺癌改良根治术。进行常规胸部X线、CT或腹部超声、CT进行检查。

1.2一般方法采用组织活检枪，14~16 G活检穿刺针，标本用4%的甲醛固定，石蜡包埋，切片。术后进行电话随访3年，从手术日期到复发日或是随访截止日期(2015年3月)称为无瘤生存期(DFS)〔5〕。其中有5例(7.35%)失访，48例存活(其中18例复发)，15例因为其他疾病或意外而死亡。PARP1及HMGA2的兔抗人单克隆抗体购自美国Santa Cruz公司，免疫组化染色法(SP法)，具体操作步骤如下〔6〕：用磷酸盐缓冲液(PBS)冲洗组织切片3次，每次5 min。3%过氧化氢甲醇溶液孵育10 min。PBS冲洗3次，每次5 min。每张切片加50 μl非免疫性动物血清，室温孵育10 min后吸去多余的水分。加一抗50 μl，4℃冰箱过夜。PBS冲洗3次，每次5 min。每张切片加50 μl链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶溶液，室温孵育10 min。PBS冲洗3次，每次5 min。二氨基联苯胺显色苏木精复染，采用中性树胶封固。

1.3结果判断阳性结果的细胞核呈棕褐色颗粒，根据阳性细胞的比例及染色强度之和将免疫组化结果分为4级〔7〕，阴性(-)0分，弱阳性(+)1~2分，阳性(++)3~4分，强阳性(+++)5~6分。着色强度深计为3分，着色适中2分，着色淡1分，无着色0分。阳性细胞百分率：在高倍镜(×400)下随机抽取10个视野，计数每个视野内100个细胞，计算其平均阳性百分率。阳性细胞数<5%计0分，5%~24%计1分，25%~49%计2分，≥50%计3分。

1.4统计学方法应用SPSS19.0统计软件进行t检验，χ2检验。

2结果

2.1HMGA2、PARP1在三阴型乳腺癌组织中阳性表达与临床病理特征关系乳腺癌组织中HMGA-2的阳性表达率为51.47%(35/68)，PARP1的阳性表达率为67.65%(46/68)，无瘤生存日期≤5年的乳腺癌组织中HMGA2、PARP1的表达高于无瘤生存日期>5年(P<0.05)。有淋巴结转移的乳腺癌组织中HMGA2、PARP1表达较无淋巴结转移者明显升高(P<0.05)。分化程度高的乳腺癌组织中HMGA2、PARP1表达较低分化的乳腺癌组织明显升高(P<0.05)。宫颈癌组织中HMGA-2、PARP1表达与病理类型、临床分期无关(P>O.05)，见表1和表2。

2.2HMGA2和PARP1表达的相关性三阴乳腺癌组织中 HMGA2和PARP1的表达呈正相关(r=0.399，P<0.001)，见表3。

2.3HMGA2和PARP1表达与患者术后5年无瘤生存时间的关系HMGA2表达(-)组5年无瘤生存率为78.9%，HMGA2表达(+)组5年无瘤生存率为43.7%，说明随着HMGA2阳性表达的增加，患者术后生存期随着下降，Log-rank 检验结果显示差异有统计学意义(P<0.05)。PARP1表达(-)组5年无瘤生存率为71.2%，PARP1表达(+)组5年无瘤生存率为49.8%，说明随着PARP1阳性表达的增加，患者术后生存期随着下降(P<0.05)。

表1　HMGA2阳性表达与三阴型乳腺癌临床病理的关系

表2　PARP1阳性表达与三阴型乳腺癌临床病理的关系

表3　HMGA-2和PARP1表达的相关性(n)

3讨论

乳腺癌的临床分期可分为ⅡB期、ⅢA期、ⅢB期、ⅢC期。三阴型乳腺癌生物学特性和基底细胞样型乳腺癌相似，但在基因表达和免疫表型等方面存在差异〔8〕。由于三阴型乳腺癌缺乏内分泌及未找到抗HER2治疗的靶点，目前尚无针对性的标准治疗方案，此外老年患者身体合并其他疾病多，对化疗耐性差，且常出现术后并发症〔9〕。

在许多肿瘤细胞染色体断裂点上均发现HMGA2基因的表达。夏青等〔10〕研究发现HMGA2基因可能通过上皮-间质转化来参与肿瘤对正常细胞的侵袭过程。此外，HMGA2还可以上调转化生长因子中13信号通路介导肿瘤生成。因此HMGA2在多种恶性肿瘤组织或是转移灶中的过表达已经成为恶性肿瘤预后的指标〔11〕。研究发现，早期肿瘤细胞发生的标志是DNA损伤应答途径，DNA 的损伤应答在于修复早期有癌病倾向的细胞和清理早期肿瘤细胞。当此DNA修复途径受到破坏时，机体将无法清除这些癌病的细胞，而PARP1介导的DNA修复途径在机体的监督过程具有不可替代的作用。PARP1是催化真核细胞中聚腺苷二磷酸核糖化的核膜，修饰翻译后的蛋白质，BRCA基因突变后将阻碍了同源重组修复通路〔12〕，导致DNA 修复异常，使用 PARP1抑制剂能阻碍细胞损伤后修复，使细胞出现凋亡，而不是癌变。

本研究结果表明PARP1和HMGA2表达与患者无瘤生存日期、肿瘤的分化程度和淋巴结转移等有关。研究发现PARP1和HMGA2表达呈正相关。提示PARP1和HMGA2可作为乳腺癌增殖的分子标志物，对于预测乳腺癌的亚型和预后有重要的临床意义。老年患者乳腺癌多属于晚期，由于新生血管较少，无法供应恶性肿瘤所需要的充足营养，因此乳腺癌的生长速度较慢。浸润性导管癌是乳腺癌最常见的病理类型，根据分化程度划分，Ⅲ级分化属于低分化，具有高度恶化，Ⅰ级分化属于高分化，恶化程度较低。肿瘤组织分级愈高，恶化程度也增加，淋巴转移越多，就越容易发生局部或远处的转移，患者的预后越差，因此无瘤生存时间越短。

老年三阴型乳腺肿瘤中PARP1和HMGA2表达可作为乳腺癌的分子标志物，PARP1和HMGA2阳性表达率越高，分化程度越高，更易发生淋巴结转移，无瘤生存时间愈短，预后差，因此这两指标对评估老年肿瘤患者的预后具有一定的应用价值。

4参考文献

1刘大海，杜建时，韩冬梅，等.干扰素在老年乳腺癌术后患侧上肢淋巴水肿综合治疗中的作用〔J〕.中国老年学杂志，2012；32(3)：610-1.

2Morrow M，Harris JR，Schnitt SJ.Surgical margins in lumpectomy for breast cancer-bigger is not better〔J〕.New Engl J Med，2012；367(1)：79-84.

3韩晓蓉，王颀，吴坤河，等.三阴性乳腺癌中程序性细胞死亡基因 4 表达及其与预后的关系〔J〕.第三军医大学学报，2014；36(5)：495-8.

4刘毅，刘兵，江泽飞.从 HER-2 检测研究进展谈转化医学在乳腺癌诊治中的重要作用〔J〕.中国实用外科杂志，2012；32(1)：40-3.

5李伟汉.乳腺癌患者癌组织中组织蛋白酶 D 和基质金属蛋白酶-2 的表达及其判断预后的价值〔J〕.中国老年学杂志，2012；32(4)：719-20.

6Centers for disease control and prevention.Vital signs：racial disparities in breast cancer severity-United States，2005-2009〔J〕.MMWR，2012；61(45)：922-35.

7LoRusso PM.Mammalian target of rapamycin as a rational therapeutic target for breast cancer treatment〔J〕.Oncology，2012；84(1)：43-56.

8Hofvind S，Ursin G，Tretli S，etal.Breast cancer mortality in participants of the norwegian breast cancer screening program〔J〕.Cancer，2013；119(17)：3106-12.

9刘君君，陈小松，高卫奇，等.合并症对乳腺癌化疗方案选择的影响〔J〕.江苏医药，2013；39(24)：2983-5.

10夏青，史艳侠，姜文奇.RO3306 与 AZD2281 对 BRCA1WT 乳腺癌协同抑制作用的体外研究〔J〕.中国医科大学学报，2014；43(11)：433-9.

11LoRusso PM.Mammalian target of rapamycin as a rational therapeutic target for breast cancer treatment〔J〕.Oncology，2012；84(1)：43-56.

12张微，张尘玉，杨志强，等.三阴乳腺癌组织中乳腺小黏蛋白和局部黏着斑激酶的表达及意义〔J〕.中国全科医学，2014；17(6)：632-6.

〔2014-11-23修回〕

(编辑苑云杰)

〔中图分类号〕R451

〔文献标识码〕A

〔文章编号〕1005-9202(2016)05-1120-03；

doi：10.3969/j.issn.1005-9202.2016.05.045

1黔南州人民医院肝胆外科

第一作者：戚建芬(1967-)，女，副主任医师，主要从事普外科研究。