HPLC法测定人参皂苷Rg3、Rh1的含量

翁　砚，王晓非，刘同帅，毕　华，董金香,翁丽丽*

(1.白求恩医科大学制药厂，长春 130012；2.长春中医药大学，长春 130117)



HPLC法测定人参皂苷Rg3、Rh1的含量

翁砚1，王晓非1，刘同帅2，毕华2，董金香2,翁丽丽2*

(1.白求恩医科大学制药厂，长春 130012；2.长春中医药大学，长春 130117)

摘要：目的建立人参发酵品中人参皂苷Rh1、Rg3的含量测定方法。方法采用高效液相色谱法测定，色谱条件：ODS色谱柱(4.6 mm×250 mm,5 μm)；检测波长203 nm；流动相(Rh1)：乙腈-水(26.5∶73.5)，流动相(Rg3)：乙腈-0.05%磷酸(37∶63)；柱温30 ℃，流速1.0 mL/min。结果人参皂苷Rh1的含量测定线性范围0.1～1.1 μm，相关系数r=0.999 8，平均加样回收率96.90%，RSD 2.67%。人参皂苷Rg3的含量测定线性范围0.4～3.0 μm,相关系数为r=0.999 7,平均加样回收率98.56%，RSD 2.51%。结论本方法检测灵敏度高，检测结果可靠。

关键词：人参皂苷Rg3；人参皂苷Rh1；高效液相色谱法

人参为五加科植物人参的干燥根及根茎，具有大补元气的作用。将人参与大型担子菌进行双向固体发酵，产生某些稀有皂苷，制得人参发酵产品。人参皂苷Rg3 及Rh1属于稀有皂苷，具明显的生理活性，因此建立人参皂苷Rg3 及Rh1的含量测定方法，对于人参药材的开发及综合利用具有重要意义[1-5]。

1材料

1.1样品人参发酵品，本实验室制备。

1.2试剂人参皂苷Rg3对照品及人参皂苷Rh1对照品(深圳市时得佳科技有限公司提供)；乙腈(色谱纯)；甲醇、氯仿(分析纯，北京化工厂)。1.3仪器液相色谱仪(上海天美LC2000)，KQ3200E型超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)。

2方法与结果

2.1人参皂苷Rg3的含量测定[6-10]

2.1.1色谱条件色谱柱Agilent-ODS柱(4.6 mm×250 mm，5 μm)，检测波长203 nm，流动相：乙腈-0.05%磷酸(37∶63)，流速1.0 mL/min，柱温30 ℃。

2.1.2标准品溶液的制备精密称取5 mg人参皂苷Rg3,置于10 mL容量瓶中，甲醇定容至刻度，即得标准品溶液。

2.1.3供试品溶液的制备称取1 g人参发酵品，精密称定，置于锥形瓶中，加入50 mL甲醇，称重，超声30 min，补足减失重量，过滤，精密吸取续滤液25 mL，蒸干；残渣加入10 mL蒸馏水使其溶解，将已处理好的D101大孔吸附树脂柱(1.5 cm×12 cm)预吸附1 h。先用蒸馏水100 mL洗脱，弃去洗脱液，再用50%甲醇50 mL洗脱，弃去洗脱液，最后用纯甲醇100 mL洗脱，收集上述洗脱液并蒸干，残渣加甲醇溶解并转移至5 mL量瓶中，稀释至刻度。

2.1.4线性关系精密吸取对照品溶液2、5、7、10、13、15 μL，按上述色谱条件进行测定，以峰面积积分值为横坐标X，以人参皂苷Rg3进样量为纵坐标Y(μg),计算其回归方程为：Y= 536 128X+20 187，r=0.999 7，线性范围0.4～3.0 μg。

2.1.5精密度试验量取10 μL标准品溶液，按上述色谱条件重复6次进样，得其峰面积，分别为1 131 620.375，1 144 992.500，1 083 006.375，1 115 813.750，1 111 352.250，1 121 389.002计算RSD值为1.87%。说明仪器精密度良好。

2.1.6重现性试验按供试品溶液制备项下，独立制备6份供试品溶液，按上述色谱条件，测得人参皂苷Rg3的含量，分别为0.65、0.63、0.6 mg/g，0.64、0.65、0.64 mg/g，平均值为0.645 mg/g，其RSD值为1.62%。说明该方法重现性良好。

2.1.7稳定性试验精密吸取人参皂苷Rg3对照品溶液、供试品溶液各1 μL，按上述色谱条件，每隔一段时间测定24 h内峰面积值，结果人参皂苷Rg3对照品的RSD为1.72%，供试品的RSD为1.91%，表明人参皂苷Rg3在24 h内稳定性良好。

2.1.8加样回收率采用加标回收法，精密称取同法测定的已知含量供试品，加入人参皂苷Rg3适量，按供试品溶液制备项下操作，以上述色谱条件进行测试，计算回收率，结果测得平均回收率为98.56%，RSD为2.51%，表明此方法可行。2.1.9样品测定取人参发酵品，按供试品溶液制备方法制得样品溶液，按上述色谱条件测定，根据峰面积，从标准曲线上求出人参皂苷Rg3含量，再根据取样量，计算得人参发酵品中人参皂苷Rg3的含量为0.6 mg/g。

2.2人参皂苷Rh1的含量测定[11-16]2.2.1色谱条件色谱柱Agilent-ODS柱(4.6 mm×250 mm，5 μm)，检测波长203 nm，流动相：乙腈-水(26.5∶73.5)，流速1.0 mL/min，柱温30 ℃。

2.2.2标准品溶液的制备精密称取5 mg人参皂苷Rh1，置于10 mL容量瓶中，甲醇定容至刻度，摇匀，精密吸取4 mL该溶液，置于10 mL容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。

2.2.3供试品溶液的制备精密称定4 g人参发酵品，置锥形瓶中，称重，精密加入50 mL水饱和正丁醇，超声提取30 min，补足减失重量，过滤，精密吸取续滤液25 mL，加正丁醇饱和氨试液，提取3次，25 mL/次，取正丁醇液蒸干，残渣加甲醇-氯仿(1∶1)溶解，挥干溶剂，上硅胶柱，用50 mL氯仿-甲醇(8.5∶1.5)溶液洗脱，收集洗脱液蒸干，残渣加甲醇溶解，于5 mL容量瓶中定容，过滤，即得。

2.2.4线性关系精密吸取对照品溶液2、5、7、10、13、15 μL，按上述色谱条件测试，以峰面积的积分值为横坐标X，以人参皂苷Rh1的进样量为纵坐标Y(μg),计算其回归方程为：Y= 72 280X-31 633,r= 0.999 8，线性范围0.1～1.1 μg。

2.2.5精密度试验取10 μL标准品溶液，按上述色谱条件重复6次进样，得其峰面积，分别为498 964.656、494 852.500、483 920.125、503 192.500、498 521.000、491 630.000，计算其RSD值为1.25%。表明仪器精密度良好。

2.2.6重现性试验按供试品溶液制备，独立制备人参发酵品供试品溶液6份，按上述色谱条件，测得人参皂苷Rh1含量，分别为0.054、0.05、0.055、0.053、0.053、0.055 mg/g，其RSD值为1.80%。表明方法重现性良好。

2.2.7稳定性试验精密吸取人参皂苷Rh1对照品溶液10 μL、供试品溶液20 μL，按上述色谱条件，测定24 h内峰面积值，结果对照品和供试品的RSD值为1.43%、0.76%，表明人参皂苷Rh1在24 h内稳定性良好。

2.2.8加样回收率采用加标回收法，精密称取同法测定已知含量的人参发酵品，加入适量人参皂苷Rh1，按供试品溶液制备项下操作，以上述色谱条件测试，计算回收率，结果平均回收率为96.90%，表明本方法可行。

2.2.9样品测定取人参发酵品，按供试品溶液制备项下制得样品溶液，以上述色谱条件测定，计算得人参发酵品中人参皂苷Rh1的含量为0.05 mg/g。

3小结

在测定人参皂苷Rg3时，以甲醇与水为流动相，出现基线不平现象，故改用乙腈与水为流动相；在选择配比时，分别采用了乙腈-水48∶52、40∶60、39∶61、35∶65、37∶63，其中以乙腈-水37∶63分离效果最好，但是目标峰出现拖尾现象，故改用乙腈-0.05%磷酸(37∶63)作为流动相。

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Determination of content of Rg3 and Rh1 by HPLC method

WENG Yan1,WANG Xiaofei1,LIU Tongshuai2,BI Hua2,DONG Jinxiang2,WENG Lili2*

(1.The Pharmaceutical Factory,Norman Bethune Medical University,Changchun 130012,China;2.Changchun University of Chinese Medicine,Changchun 130117,China)

Abstract：ObjectiveTo establish a method for the determination of the content of Rh1 and Rg3 in the ginseng fermentation product.MethodsHPLC,The chromatographic conditions： ODS chromatographic column (4.6 mm×250 mm,5 μm);detection wavelength 203 nm;mobile phase(Rh1):acetonitrile -water (26.5∶73.5),mobile phase (Rg3):acetonitrile -0.05% phosphoric acid (37∶63);Column temperature:30 ℃;flow rate was 1.0 mL/min.ResultsThe content of ginsenoside Rh1 was determined by linear range 0.1-1.1 μg,the correlation coefficient r=0.999 8,the average recovery was 96.90%,RSD2.67%.The content of ginsenoside Rg3 was determined by linear range 0.4-3 μg,the correlation coefficient was r=0.9997,the average recovery rate was 98.56%,RSD2.51%.ConclusionSensitivity of this method was high,and the detection results were reliable.

Keywords：ginsenoside Rg3;ginsenoside Rh1;HPLC

(收稿日期:2015-12-01)

文章编号：2095-6258(2016)02-0256-03

中图分类号：R284.1

文献标志码：A

*通信作者：翁丽丽，电话-13039218920，电子信箱-735110462@qq.com

作者简介：翁砚(1979-)，女，工程师，主要从事药物分析研究。

基金项目：吉林省中医药科技项目(2014-ZD26)。

DOI:10.13463/j.cnki.cczyy.2016.02.012