VEGF和突变型p53在胃癌组织表达及意义①

穆桂芳　穆雪峰　毕海静　曲　玲　谭悦菊　孙光喜　董祟海　白厚桥　高才华　周利克　陈文军

(青岛医学院附属威海医院威海市立二院消化内科，威海264200)



VEGF和突变型p53在胃癌组织表达及意义①

穆桂芳穆雪峰②毕海静曲玲谭悦菊孙光喜董祟海白厚桥高才华周利克陈文军

(青岛医学院附属威海医院威海市立二院消化内科，威海264200)

[摘要]目的：通过检测胃癌及癌前病变患者活检组织中血管内皮生长因子(VEGF)和突变型p53基因(mtp53)的表达，探讨VEGF和突变型p53基因在胃癌发生发展中的临床意义。方法：通过胃镜组织活检收集 19例正常胃组织、22例肠上皮化生、47例胃肠黏膜不典型增生、54例胃癌样本，通过免疫组织化学染色检测组织中VEGF和mtp53的表达水平。结果：VEGF、mtp53的表达水平在正常胃组织，肠上皮化生，不典型增生以及胃癌中呈逐渐增高的规律。胃癌组织中VEGF和mtp53表达较正常胃组织、肠上皮化生组织显著增高(P<0.05)，而与不典型增生组织差异无统计学意义(P>0.05)。结论：VEGF与突变型p53的异常表达可能与胃组织病变的恶化程度有关。

胃癌是人类消化系统最常见的恶性肿瘤之一，严重威胁着人类的健康。但由于胃癌早期症状并不特异，发现时多是中晚期而延误治疗。因此，如何对胃癌进行早期诊断成为该领域研究的热点。目前研究表明，突变型 p53(mtp53)在胃癌组织中表达上调，并可通过促进血管生成因子(如血管内皮生长因子VEGF)的表达，介导胃部肿瘤细胞的进一步生长、转移等[1]。但一直缺乏关于mtp53和VEGF在胃癌癌前病变中表达水平的相关研究。本研究通过检测和对比胃癌及癌前病变患者中血管内皮生长因子(VEGF)、突变型p53基因的表达水平，分析VEGF、突变型p53基因在胃癌生发发展中的临床意义，旨在为胃癌的早期诊断与治疗提供新思路。

1材料与方法

1.1材料

1.1.1研究对象和样本收集选择2010年 6月至 2014 年 6月在威海市立二院行胃镜检查的患者142例为研究对象，其中包括19例正常胃组织、22例肠上皮化生、47例胃肠黏膜不典型增生、54例胃癌。收集所有研究对象的胃组织样本，石蜡包埋备用。

1.1.2试剂兔抗人VEGF 多克隆抗体、鼠抗人 mtp53 单克隆抗体(美国Abcam公司)。免疫组化检测试剂盒(北京中杉金桥生物技术有限公司)。

1.2方法

1.2.1免疫组织化学染色检测VEGF和mtp53表达本研究采用免疫组化 PV-9000 二步法。具体实验步骤为：石蜡切片常规水化，以3%去离子水水浴10 min阻断内源性过氧化物酶反应。蒸馏水冲洗3遍，每次3 min，PBS浸泡5 min后，将切片浸入 0.01 mol/L枸橼酸缓冲液中，微波炉中火加热5 min，然后小火加热10 min，冷却后PBS洗5 min×3次。滴加一抗，4 ℃过夜。PBS 洗 5 min×3 次，滴加试剂 1，37℃孵育15 min，取出后PBS洗5 min×3次。滴加试剂 2，37℃孵育15 min，取出后PBS洗5 min× 3 次。新鲜配制的DAB 显色，镜下控制反应时间，自来水终止反应。苏木素轻度复染，盐酸乙醇分化，自来水泛蓝冲洗5 min。脱水、透明，中性树胶封片后，显微镜观察。PBS代替一抗作为阴性对照组。

1.2.2结果判定由两名未参与实验的高年资病理科医生独立观察切片，协助判断免疫组化结果。VEGF 定位于肿瘤细胞质或细胞膜，阳性物质呈棕黄色；mtp53定位于肿瘤细胞核，阳性物质呈棕黄色。p53、VEGF阳性细胞数>10%为阳性，<10%为阴性；同时，VEGF阳性细胞数分级:10%~25%为+，26%~50%为++，>50%为+++。

1.3统计学方法所有数据录入Excel表格，采用SPSS17.0行χ2检验。以P<0.05为有统计学意义。

2结果

2.1研究对象对各组受试者的性别、年龄进行统计分析，结果显示各组人群的性别和年龄差异均无统计学意义(P<0.05)，表明各组人群匹配，具有可比性。

2.2VEGF、p53 在胃癌组织中的表达对各组受试者的p53和VEGF的表达情况进行统计分析，结果显示VEGF、mtp53的表达水平在正常胃组织，肠上皮化生，不典型增生以及胃癌中呈逐渐增高的规律。胃癌组织中VEGF和mtp53表达较正常胃组织、肠上皮化生组织显著增高(P<0.05)，如图1、2，而与不典型增生组织差异无统计学意义(P>0.05)，见表1。

表1不同胃组织中VEGF、p53表达情况比较[n(%)]

Tab.1Expression of p53 and VEGF indifferent gastric tissues[n(%)]

GroupVEGFpositiveexpressionratep53positiveexpressionrateNormalgastrictissue(n=19)0.2%1.3%Intestinalmetaplasia(n=22)17.3%1)3)16.5%1)Dysplasiaofgastricmucosa(n=47)22.1%1)38.7%1)Gastriccancertissue(n=54)50.6%1)2)3)62.3%1)2)3)

Note：1)P<0.05，compared with normal gastric tissue group;2)P<0.05，compared with intestinal metaplasia group;3)P<0.05 compared with gastric mucosa dysplasia group.

图1　VEGF在胃癌组织中的表达(×40)Fig.1　Expression of VEGF in gastric cancer and dys-plasia(×40)

图2　p53在胃癌组织中的表达(×40)Fig.2　Expression of p53 in gastric cancer and dysplasia(×40)

3讨论

迄今为止，人类肿瘤相关性最高的基因为p53基因，p53基因与肿瘤细胞生长、凋亡等都有着密切的关系[2]。人类恶性肿瘤中，至少有50%患者与p53基因突变有关，p53基因适度表达是细胞正常生长发育的基础[3]。VEGF是一类可致血管生长特异分裂的诱导因，参与肿瘤血管形成的重要因素之一，可通过调节血管和淋巴管生成，增加血管通透性，导致肿瘤生长、侵袭、转移，同时，肿瘤快速生长又会导致机体生成更多VEGF[4]。p53基因是胃癌中最常出现突变的抑癌基因，其点突变和过表达可存在于胃癌各临床分期之中。国外已有研究发现，p53基因作用于胃癌进展阶段，在肠化生和异型增生阶段也有较高的检出率[5]。肿瘤病理形成中，本研究显示，在54例胃癌中，p53蛋白阳性表达率为62.3%，与国内文献报道结果相近[6，7]。

本研究结果发现，从正常胃黏膜，肠上皮化生，胃黏膜不典型增生至胃癌，突变型p53和VEGF表达呈逐渐上升的趋势，其中不典型增生组与胃癌组差异无统计学意义,而正常组和肠上皮化生组与胃癌组差异显著，表明突变型p53基因和VEGF阳性表达在胃癌及癌前病变中广泛存在，在胃黏膜不典

型增生中表达已接近胃癌。同时，表1中的数据还显示：VEGF阳性表达率和突变型P53的阳性表达率在肠上皮化生阶段明显增加，突变型P53在肠上皮化生组的阳性细胞比正常对照增加近15%，而胃黏膜不典型组比肠上皮化生组增加近22%，胃癌组比胃黏膜不典型增生组增加近24%，这些数据提示mtP53基因在不典型增生组中明显增加，而VEGF阳性细胞的表达的增加值的改变最高值则出现在胃癌组织，提示VEGF在胃癌组织中的表达高峰期可能在一定程度上滞后于突变型P53基因的表达，而这一结论还需要大量的实验数据论证。

检测突变型p53表达和VEGF有助于对胃黏膜癌前病变进展的监测。在胃癌及癌前病变中进行p53表达和VEGF的联合检测，能为胃癌的早期筛查、诊断提供一定的帮助[8-11]。

参考文献：

[1]Gao L,Cheng W,Zhu XG,etal.VEGF somatostatin in gastric cancer SGC-7901 cells,the influence of the NF-kappa B expression[J].J Suzhou Univ(Medical Edition),2010，(3):483-486.

[2]Liu J，Zhang C，Hu WW，etal.Tumor suppressor p53 and its mutants in cancer metabolism[J].Cancer Letters,2015，(356)：197-203.

[3]Samudio IJ,Duvvuri S,Dwyer Clise-K,etal.Activation p53signaling by MI-63 induces apoptosis in acute myeloid leukemia cells[J].Leuk diagnosed with lymphoma,2010,51(5):911-919.

[4]荣晓云，王言奎.宫颈癌及癌前病变组织Fox-M1与VEGF表达及相关性[J].齐鲁医学杂志，2011,26(4):471-473.

[5]Kathleen Saavedra，José Valbuena，Wilda Olivares1，etal.Loss of expression of reprimo,a p53-induced cell cycle arrest gene,correlates with invasive stage of tumor progression and p73 expression in gastric cancer[J] Plos One，2015，Doi.10.1371/journal.pone.0125834.

[6]俞继卫， 姜波健， 倪晓春，等.联合评估survivin 与p53在胃癌组织中表达的临床意义及对预后的影响[J].国际外科学杂志,2007,34(2):156-160 .

[7]王晓龙，张成武，刘宁，等.P53基因Arg72Pro单核苷酸多态性与青海地区人群胃癌易感性的相关性分析[J].中国免疫学杂志，2014，30(2)：178-181.

[8]Bilgi CI,Tez M.Serum VEGF levels in gastric cancer patients:correlation with clinicopathological parameters[J].Turk J Med Sci,2015，45(1):112-117.

[9]Chavez-Perez VA,Strasberg-Rieber M,Rieber M.Metabolic utilization of xogenous pyruvate by mutant p53(R175H)human melanoma cells promotes survival under glucose depletion[J].Cancer Biol Therapy，2011，12(7)： 647-656.

[10]Wei Zhe-Wei,Xia Guang-Kai,Wu Ying,etal.a CXCL1 promotes tumor growth through VEGF pathway activation and is associated with inferior survival in gastric cancer[J] Cancer Letters，2015，(359):335-343.

[11]Aguilera KY,Rivera LB,Hur H,etal.Collagen signaling enhances tumor progression after anti-VEGF therapy in a murine model of pancreatic ductal adenocarcinoma[J].Cancer Res,2014，(74):1032-1044.

[收稿2015-01-25修回2015-06-01]

(编辑许四平)

[关键词]VEGF；突变型p53；胃癌；癌前病变

VEGF and mutant p53 expression in gastric carcinoma and significance

MUGui-Fang,MUXue-Feng,BIHai-Jing,QULing，TANYue-Ju，SUNGuang-Xi,DONGSui-Hai,BAIHou-Qiao,GAOCai-Hua,ZHOULi-Ke,CHENWen-Jun.WeihaiMunicipalHospitalofWeihaiHospitalAffiliatedtoQingdaoMedicalCollege,Weihai264200,China

[Abstract]Objective:To detect precancerous lesions of gastric cancer and biopsy tissue vascular endothelial growth factor(VEGF)and mutant p53 gene(mtp53)expression,to explore the development of clinical significance of VEGF and mutant p53 gene in gastric cancer.Methods: 19 cases by endoscopic biopsies of normal gastric tissues,22 cases of intestinal metaplasia,47 cases of gastrointestinal mucosal dysplasia,54 cases of gastric cancer samples by immunohistochemical staining to detect the expression levels of VEGF and mtp53′s.Results: The expression levels of VEGF,mtp53 in normal gastric mucosa,intestinal metaplasia,dysplasia,and gradually increased gastric cancer was the law.mtp53 of VEGF expression in gastric carcinoma and compared with normal gastric tissue,intestinal metaplasia was significantly higher(P<0.05),but with atypical hyperplasia was no significant difference(P> 0.05).Conclusion: The abnormal expression of VEGF and mutant p53 may be related to the degree of deterioration of the stomach tissue lesions related.

[Key words]VEGF;Mutant p53;Gastric cancer;Precancerous lesions

作者简介：穆桂芳(1967年-)，女，主治医师，主要从事消化系统肿瘤相关研究。

中图分类号R573.9
①本文为胃癌组织中VEGF及突变型p53基因表达及临床意义研究(No.2012GNS042-1)项目。
②深圳市南山区人民医院(深圳第六人民医院)消化科，深圳518067。

文献标志码A

文章编号1000-484X(2016)01-0090-03

doi:10.3969/j.issn.1000-484X.2016.01.019