褐藻糖胶对RPMI 8226细胞血管生成的影响*

刘　芬，　肖　青△，　汤为学，　吕敬龙

(重庆医科大学附属第一医院 1血液科， 2中心实验室，重庆 400016;3重庆市三峡中心医院血液科 重庆 404000)



褐藻糖胶对RPMI 8226细胞血管生成的影响*

刘芬1，肖青1△，汤为学2，吕敬龙3

(重庆医科大学附属第一医院1血液科，2中心实验室，重庆 400016;3重庆市三峡中心医院血液科 重庆 404000)

[摘要]目的： 探讨褐藻糖胶对多发性骨髓瘤RPMI 8226细胞血管生成的影响及可能的作用机制。方法: 体外培养多发性骨髓瘤RPMI 8226细胞及人血管内皮细胞EA.hy 926细胞，采用MTT法检测褐藻糖胶对RPMI 8226细胞活力的影响；流式细胞术检测细胞周期及凋亡率；ELISA法检测褐藻糖胶处理RPMI 8226细胞后的培养液上清中VEGF的含量；小管形成实验观察褐藻糖胶处理RPMI 8226细胞后的培养液上清对EA.hy 926细胞诱导小管形成能力的影响；Western blot检测HIF-1α、VEGF、p-AKT和p-ERK1/2的蛋白水平。结果: 褐藻糖胶对RPMI 8226细胞活力的抑制作用呈浓度及时间依赖性；褐藻糖胶作用RPMI 8226细胞72 h后，细胞周期被阻滞于G1期，细胞凋亡率呈浓度依赖性明显增高，各组均高于对照组(P<0.05)；ELISA法结果显示褐藻糖胶处理72 h后的细胞培养液上清中VEGF的含量明显减少，与对照组相比，处理组上清中VEGF的含量下降(P<0.05)；内皮细胞形成小管数目与面积随着褐藻糖胶的浓度升高而减小，100 mg/L 组差异显著(P<0.05)；Western blot结果显示HIF-1α、VEGF、p-AKT和p-ERK1/2的蛋白水平与褐藻糖胶浓度呈负相关(P<0.05)。结论: 褐藻糖胶减少骨髓瘤细胞自分泌VEGF，减弱血管内皮细胞形成小管的能力，降低HIF-1α和VEGF的蛋白水平，这可能与抑制AKT和ERK1/2的磷酸化有关。

[关键词]褐藻糖胶； 多发性骨髓瘤； HIF-1α; VEGF; AKT; ERK1/2

多发性骨髓瘤(multiple myeloma，MM)是浆细胞恶性增殖克隆性疾病，在血液肿瘤中发病率第二。尽管针对治疗多发性骨髓瘤的新药研究取得了较大的进展，但是迄今为止多发性骨髓瘤仍然是一种难以治愈，并且易于复发的疾病，这使得寻求新的治疗方法仍然是一大重要课题[1]。抗血管生成是近年肿瘤治疗的研究热点，在多发性骨髓瘤的研究中发现，缺氧诱导因子1α(hypoxia-inducible factor 1 alpha，HIF-1α)可以促进多发性骨髓瘤细胞表达血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor，VEGF)，继而有效促进多发性骨髓瘤血管生成，造成多发性骨髓瘤的难治、复发[2]。褐藻糖胶(fucoidan)是提取于褐藻中的水溶性多糖，主要结构为L-岩藻糖和硫酸基，作为一种低毒药物，褐藻糖胶对肿瘤细胞的生物学活性是目前研究的热点。现已证明褐藻糖胶能够有效抑制实体肿瘤细胞的增殖、血管生成、促进凋亡达到抗肿瘤作用[3]，同时，我们前期实验证实褐藻糖胶能够诱导白血病细胞株HL-60的凋亡[4]，但是其对多发性骨髓瘤细胞的血管生成是否有影响仍不清楚，因此我们试图通过收集褐藻糖胶作用于多发性骨髓瘤细胞株RPMI 8226细胞后的细胞培养液上清，检测VEGF的分泌量及诱导血管内皮细胞形成小管的能力，并检测经过处理的骨髓瘤细胞表达HIF-1α与VEGF蛋白的改变，探讨其可能的相关机制。

材料和方法

1细胞与主要试剂

多发性骨髓瘤RPMI 8226 细胞由上海长征医院侯健教授惠赠；EA.hy 926细胞由重庆医科大学附属第一医院老年科李法琦教授惠赠。褐藻糖胶购于Sigma，纯度为99.9%，PBS溶解成20 g/L储存液，使用前用RPMI-1640培养液配成不同浓度工作液；RPMI-1640培养液、MTT和胰蛋白酶购于Sigma；胎牛血清购于Gibco；细胞周期检测试剂盒和Annexin V-FITC/PI凋亡试剂盒购于凯基生物；人VEGF ELISA试剂盒、辣根过氧化物酶标记羊抗小鼠和羊抗兔 II 抗购于博士德公司；Matrigel基质胶购于Corning；蛋白提取试剂盒、BCA试剂盒和Western blot常规试剂均购于碧云天公司；PVDF膜购于Millipore；HIF-1α、VEGF兔抗人抗体购于Abcam；AKT、p-AKT、ERK1/2及p-ERK1/2兔抗人抗体购于CST。

2细胞培养与上清的收集

RPMI 8226细胞培养于含10%胎牛血清、1%青-链霉素的RPMI-1640培养液，置于37 ℃、5% CO2、饱和湿度培养箱中，约1～2 d后离心传代，取对数生长期细胞进行实验。EA.hy 926细胞培养条件同RPMI 8226细胞，约生长2 d后完全融合成单层细胞，以0.25%胰蛋白酶消化传代，取对数生长期细胞进行实验。

取对数生长期的RPMI 8226细胞，以含有2%胎牛血清的培养液重悬细胞，调整细胞密度为5×108/L，分别以不同浓度(0、25、50、100和200 mg/L)褐藻糖胶作用RPMI 8226细胞72 h，4 ℃条件下以12 000 r/min离心10 min，收集上清，-20 ℃保存备用。

3主要方法

3.1MTT法检测细胞活力取对数生长期RPMI 8226细胞，制成单细胞悬液，以4×107/L接种于96孔培养板中，每孔200 μL，分别加入等体积不同浓度的褐藻糖胶(使其药物终浓度分别为25、50、100、200和400 mg/L)，每组设5个重复孔，分别培养24 h、48 h及72 h后，每孔加入20 μL(5 g/L)MTT，置于37 ℃、5% CO2、饱和湿度培养箱中继续培养4 h，离心后小心吸尽上清，每孔加入150 μL二甲基亚砜(DMSO)吹打混匀，避光条件下振荡10 min待完全溶解后，用酶标仪检测570 nm处吸光度(A)。计算褐藻糖胶对细胞活力的抑制率(%) = (A对照组-A给药组)/A对照组×100%，实验重复3次。

3.2流式细胞术检测细胞周期和凋亡取对数生长期RPMI 8226细胞，制成细胞悬液，调整细胞密度为5×108/L，接种6孔板中，每孔体积4 mL。空白对照组细胞常规培养，实验组加入等体积不同浓度褐藻糖胶(终浓度为25、50、100、200 mg/L)，置于37 ℃、5% CO2、饱和湿度培养箱中培养72 h后，收集各组细胞，500 r/min离心5 min，弃培养液，用PBS洗涤3次。70%冰乙醇固定5 h，流式细胞仪检测细胞周期，Cell Quest分析细胞周期。同样方法收集细胞后，将细胞重悬于500 μL binding buffer，再依次加入5 μL Annexin V/FITC和5 μL PI溶液，吹打均匀后，冰上、避光条件下反应10 min，1 h内上流式细胞仪进行检测，实验重复3次。

3.3ELISA检测自分泌VEGF的水平取对数生长期RPMI 8226细胞，制成细胞悬液，调整细胞密度为5×108/L，接种6孔板中，每孔体积2 mL,处理方法同步聚1.4。72 h后使用低温离心机以2 000 r/min离心10 min，去除细胞碎片，收集培养液上清，按照ELISA试剂盒说明书检测上清中VEGF的含量，每组设3个复孔。

3.4内皮细胞小管形成实验取96孔板，每孔中加入Matrigel基质胶50 μL，37 ℃孵育箱中60 min使胶凝固，分别以25、50、100 mg/L褐藻糖胶作用的RPMI 8226细胞培养液上清与含10%胎牛血清1640培养液等体积混合成条件培养基重悬EA.hy 926细胞，种入已铺胶的96孔板中，每孔2×104个细胞，未处理组上清作为对照组，每组设3个复孔。37 ℃孵育箱中培养20 h后在显微镜下观察, 随机选择5个视野拍照(×40)，应用Image Pro Plus软件计数形成的小管数目并比较小管的面积。

3.5Western blot检测HIF-1α、VEGF、p-AKT和p-ERK1/2蛋白的水平细胞处理方式同3.2，收集细胞，500 r/min离心5 min，PBS洗涤3次；按照总蛋白提取试剂盒说明书低温条件下裂解细胞，高速离心后吸取上清液，BCA法测定蛋白浓度定量，按比例加入SDS-PAGE蛋白上样缓冲液，沸水浴5 min后，-20 ℃保存。每组取50 μg蛋白质样本进行聚丙烯酰胺凝胶(SDS-PAGE)电泳，转膜至PVDF膜上，5% 脱脂奶粉室温封闭2 h，TBST稀释 I 抗[HIF-1α (1∶1 000)、VEGF(1∶800)、AKT(1∶1 000)、ERK1/2(1∶1 000)、p-AKT(1∶1 000)和p-ERK1/2(1∶1 000)]后4 ℃孵育过夜，TBST洗膜10 min 3次，孵相对应 II 抗(1∶2 000)，室温下孵育2 h，TBST洗膜10 min 3次，PVDF膜ECL发光检测，对所得到的条带用Fusion进行分析。实验重复3次。

4统计学处理

本实验结果采用SPSS 19.0软件统计分析。统计数据以均数±标准差(mean±SD)表示，多组间比较采用单因素方差分析(one-way ANOVA)，各组均数间两两比较时采用Turkey法，以P<0.05为差异有统计学意义。

结果

1褐藻糖胶对RPMI 8226细胞活力的影响

分别使用0、25、50、100、200和400 mg/L褐藻糖胶处理RPMI 8226细胞24 h、48 h和72 h后，根据酶标仪所测的吸光度值分析，随着药物浓度或者作用时间的增长，RPMI 8226细胞活力受到的抑制作用逐渐增强，以72 h对细胞的作用强度最大，并且当浓度达到约200 mg/L后，褐藻糖胶对细胞活力的抑制作用逐渐进入平台期，见图1。

Figure 1.The effect of fucoidan on growth of RPMI 8226 cells. Mean±SD.n=3.*P<0.05,**P<0.01vs24 h.

图1褐藻糖胶对RPMI 8226细胞的增殖抑制情况

2褐藻糖胶对RPMI 8226细胞周期及凋亡的影响

根据MTT实验的结果，使用不同浓度的褐藻糖胶作用于RPMI 8226细胞72 h后，采用流式细胞术检测细胞周期及凋亡情况。结果显示与对照组相比，随着褐藻糖胶浓度的升高，G1期的细胞比率增加，S期细胞比率减少(P<0.01)，见表1。流式细胞术检测细胞凋亡结果显示，凋亡率随着药物浓度的增加而逐渐上升，均较对照组明显增加(P<0.01)，见图2。

表1流式细胞术检测等体积不同浓度褐藻糖胶对RPMI 8226细胞周期的影响

Table 1.The effect of fucoidan on the cell cycle of human multiple myeloma RPMI 8226 cells (Mean±SD.n=3)

Fucoidan(mg/L)G1phaseSphaseG2phase055.56±2.7431.62±2.4512.83±2.312559.53±4.0228.49±2.1411.98±2.275063.53±2.9021.36±2.55**15.10±3.9010067.62±2.63**17.32±3.04**15.06±1.8820071.02±3.53**13.99±2.26**14.99±2.63

**P<0.01vs0 mg/L group.

Figure 2.The apoptotic rate of RPMI 8226 cells increased gradually with the increasing concentration of fucoidan after treatment for 72 h. Mean±SD.n=3.**P<0.01vs0 mg/L group.

图2褐藻糖胶作用72 h对RPMI 8226细胞凋亡率的影响

3褐藻糖胶对RPMI 8226细胞自分泌VEGF的影响

收集各组RPMI 8226细胞培养上清，通过ELISA法检测上清中VEGF的分泌量，对吸光度进行分析，发现褐藻糖胶对RPMI 8226细胞自分泌VEGF有抑制作用。与未处理组相比，处理组VEGF分泌量均有所下降，当褐藻糖胶浓度为50 mg/L时VEGF的分泌受到明显抑制，随着浓度的升高，受抑制程度更加明显，见表2。

表2ELISA法检测等体积不同浓度褐藻糖胶处理细胞对VEGF自分泌的影响

Table 2.The effect of fucoidan on the secretion of VEGF in human multiple myeloma RPMI 8226 cells and the corresponding inhibitory rate (Mean±SD.n=3)

Ficoidan(mg/L)VEGFconcentration(ng/L)Inhibitoryrate(%)0640.85±15.43025629.50±11.841.77%50595.81±22.357.03%*100530.29±15.5817.25%**200485.39±13.9824.25%**

*P<0.05,**P<0.01vs0 mg/L group.

4褐藻糖胶对RPMI 8226细胞培养液上清诱导小管形成的影响

未经褐藻糖胶作用的RPMI 8226细胞培养液上清能够诱导EA.hy 926细胞在Matrigel上形成小管结构并逐渐连成网状，管腔完整，数目多，面积较大。经褐藻糖胶作用后的培养液上清诱导内皮细胞形成小管的能力低于对照组，100 mg/L褐藻糖胶组小管形成明显受到抑制，小管数目减少，管腔不连续，呈间断状，形成的小管面积较对照组明显缩小(P<0.05)，200 mg/L褐藻糖胶组难以观察到完整的小管(P<0.01)，见图3。

5褐藻糖胶对RPMI 8226细胞HIF-1α和VEGF表达的影响

Western blot实验结果显示，与对照组相比，50 mg/L褐藻糖胶处理RPMI 8226细胞78 h后，HIF-1α和VEGF蛋白表达水平明显下降(P<0.05)，且2种蛋白表达受抑制程度与药物浓度呈正相关，见图4。

6褐藻糖胶对RPMI 8226细胞AKT和ERK1/2磷酸化水平的作用

Western blot实验结果显示，与对照组相比，50 mg/L褐藻糖胶处理RPMI 8226细胞72 h后，p-AKT和p-ERK1/2的蛋白水平明显下降，差异有统计学意义(P<0.05)，且2种蛋白表达受抑制程度与药物浓度呈正相关，200 mg/L时差异更显著(P<0.01)；而总AKT和ERK1/2的表达无明显改变，见图5。

讨论

多发性骨髓瘤是多因素多阶段发展的血液系统恶性肿瘤，发病率逐年升高，发病年龄日趋年轻化。随着新药(如雷那度胺、硼替佐米)的问世，多发性骨髓瘤患者的平均生存时间由原来的3年逐渐延长至6年，但是多发性骨髓瘤的临床疗效仍然不理想[1]，这使得寻找新的有效的治疗方法很有必要。

Figure 3.The effect of fucoidan on the tube formation of EA.hy926 cells was examined by plating EA.hy 926 cells on the Matrigel for 6 h (×40). Mean±SD.n=3.*P<0.05,**P<0.01vs0 mg/L group.

图3经过褐藻糖胶处理后的RPMI 8226细胞培养液上清对EA.hy 926细胞形成小管能力的影响

Figure 4.The protein expression levels of HIF-1α and VEGF in fucoidan group were significantly lower than those in control group. Mean±SD.n=3.*P<0.05,**P<0.01vs0 mg/L group.

图4Western blot检测等体积不同浓度褐藻糖胶处理细胞后HIF-1α和VEGF蛋白表达的影响

Figure 5.The protein levels of p-AKT and p-ERK1/2 in fucoidan group were significantly lower than those in control group but not total AKT and ERK1/2. Mean±SD.n=3.*P<0.05,**P<0.01vs0 mg/L group.

图5Western blot检测等体积不同浓度褐藻糖胶处理细胞后总AKT和ERK1/2蛋白表达及相应磷酸化水平的影响

褐藻糖胶由日本学者Kylin首次从褐藻掌状海带中发现，具有抗肿瘤、调节免疫、抗病毒及降脂等多种生物学功能，近年来被单用于多种肿瘤(如乳腺癌、肺癌、结肠癌等)的研究，并取得了一定的成果[5]。本研究褐藻糖胶作用于多发性骨髓瘤RPMI 8226细胞株，结果表明，单用褐藻糖胶可以抑制多发性骨髓瘤细胞株的增殖，将细胞阻滞于G1期，并促进其凋亡。

血管生成是造成多发性骨髓瘤复发、难治的重要原因，抗血管生成是治疗多发性骨髓瘤等多种肿瘤的重要靶点[6-7]。VEGF是促进血管生成最重要的炎症因子[8]。有研究表明多发性骨髓瘤患者骨髓中血管生成明显增多，且与疾病进展、预后呈负相关[9]，本研究收集单纯的骨髓瘤细胞株培养液上清，经过褐藻糖胶处理的细胞培养液上清检测其中VEGF的含量。结果表明，随着药物浓度的增高，骨髓瘤细胞自分泌的VEGF含量逐渐减少，当褐藻糖胶浓度达到50 mg/L时，VEGF分泌量明显减少，进一步通过Western blot检测骨髓瘤细胞的VEGF蛋白的表达量，其表达量同样减低。

小管形成是目前检测血管生成最重要的体外实验，内皮细胞能否在基质胶上形成毛细血管样结构是检测血管生成能力最直观的方法[10]。单纯RPMI 8226细胞培养液上清能够有效诱导血管内皮细胞EA.hy 926于基质胶上形成完整的小管，而经褐藻糖胶处理的RPMI 8226细胞培养液上清诱导EA.hy 926细胞形成小管的能力减弱，200 mg/L褐藻糖胶组难以观察到完整的小管，这进一步说明褐藻糖胶能够抑制多发性骨髓瘤细胞诱导的血管生成。

许多生长因子、原癌基因等通过激活PI3K/AKT与MAPK/ERK1/2信号通路上调HIF-1α的表达，继而调节VEGF的水平。PI3K/AKT通路在多种肿瘤细胞中持续激活，并且与肿瘤细胞的增殖、侵袭、血管生成及耐药关系密切[11]，目前已成为肿瘤靶向治疗的研究对象。ERK1/2在多发性骨髓瘤中处于高度活化状态[12]，同时是血管生成的重要信号分子，与其下游的信号分子调节血管内皮细胞的分化、增殖和迁移，促进管腔的形成。HIF-1α是直接调控VEGF的上游因子[13]，35%的多发性骨髓瘤患者中存在 HIF-1α的过表达[14]，而HIF-1α的过表达造成多发性骨髓瘤细胞自分泌及骨髓微环境中的基质细胞旁分泌过多的VEGF等血管生长因子，促进血管生成，促进多发性骨髓瘤的进展[15]。我们检测三者的表达量，随着褐藻糖胶浓度的提高，AKT和ERK1/2的磷酸化水平逐渐降低，并有效减少HIF-1α的表达，这可能是褐藻糖胶减弱骨髓瘤细胞诱导血管生成能力的主要机制之一。

近年来，针对治疗多发性骨髓瘤的新药研究取得较大进展，但是常规化疗带来的毒副作用及不同程度的耐药是两大亟待解决的重要问题，这使得低毒的生物提取物可能成为临床治疗的重要手段。本研究证实，褐藻糖胶能够有效抑制多发性骨髓瘤细胞的增殖，促进其凋亡，降低骨髓瘤细胞自分泌及表达VEGF，减弱骨髓瘤细胞诱导血管内皮细胞形成小管的能力，抑制HIF-1α表达，降低AKT和ERK1/2的磷酸化，为研究褐藻糖胶治疗多发性骨髓瘤的临床应用提供理论依据。

[参考文献]

[1]谷景立，李娟. 多发性骨髓瘤的诊断及治疗进展[J]. 临床内科杂志, 2013, 30(6):365-367.

[2]Giatromanolaki A, Bai M, Margaritis D, et al. Hypoxia and activated VEGF/receptor pathway in multiple myeloma[J]. Anticancer Res, 2010, 30(7):2831-2836.

[3]Kwak JY. Fucoidan as a marine anticancer agent in preclinical development[J]. Mar Drugs, 2014, 12(2):851-870.

[4]肖青，唐中山，黄宗干，等. 昆布多糖硫酸酯对急性髓性白血病 HL-60 细胞的调控[J]. 重庆医科大学学报, 2003, 28(3):328-330.

[5]Atashrazm F, Lowenthal RM, Woods GM, et al. Fucoidan and cancer: a multifunctional molecule with anti-tumor potential[J]. Mar Drugs, 2015, 13(4):2327-2346.

[6]Wang Z, Dabrosin C, Yin X, et al. Broad targeting of angiogenesis for cancer prevention and therapy[J]. Semin Cancer Biol, 2015 Jan 16.[Epub ahead of print]

[7]Andersen NF, Vogel U, Klausen TW, et al. Vascular endothelial growth factor (VEGF) gene polymorphisms may influence the efficacy of thalidomide in multiple myeloma[J]. Int J Cancer, 2012, 131(5): E636- E642.

[8]刘丽璇，吴灵飞，邓巍，等. 丹参酮IIA对低氧条件下人肝癌HepG2细胞增殖、凋亡的影响及与HIF-1α、VEGF和野生型P53蛋白表达的关系[J].中国病理生理杂志, 2014, 30(12):2155-2160.

[9]Ribatti D, Mangialardi G, Vacca A. Antiangiogenic therapeutic approaches in multiple myeloma[J]. Curr Cancer Drug Targets, 2012, 12(7):768-775.

[10]Arnaoutova I, Kleinman HK.Invitroangiogenesis: endothelial cell tube formation on gelled basement membrane extract[J]. Nat Protoc, 2010, 5(4):628-635.

[11]王雅丹，胡豫，孙春艳. AKT、ERK1/2活化在脑源性神经营养因子促血管新生过程中的作用[J]. 中国病理生理杂志, 2007, 23(5):833-838.

[12]姚瑶，边月平，徐开林，等. MEK 抑制剂AZD8330 对多发性骨髓瘤抗肿瘤作用的初步研究[J]. 中国实验血液学杂志, 2014, 22(5):1311-1315.

[13]Storti P, Bolzoni M, Donofrio G, et al. Hypoxia-inducible factor (HIF)-1α suppression in myeloma cells blocks tumoral growthinvivoinhibiting angiogenesis and bone destruction[J]. Leukemia, 2013, 27(8):1697-1706.

[14]Borsi E, Perrone G, Terragna C, et al. Hypoxia inducible factor-1 alpha as a therapeutic target in multiple myeloma[J]. Oncotarget, 2014, 5(7):1779-1792.

[15]Martin SK, Diamond P, Gronthos S, et al. The emerging role of hypoxia, HIF-1 and HIF-2 in multiple myeloma[J]. Leukemia, 2011, 25(10):1533-1542.

(责任编辑： 陈妙玲， 罗森)

*[基金项目]河北省科学技术研究与发展计划项目(No.08966107D)；2012年保定市科学技术研究与发展指导计划(No.12ZF105)

Effects of fucoidan on angiogenesis of human multiple myeloma RPMI 8226 cellsLIU Fen1, XIAO Qing1, TANG Wei-xue2, LÜ Jing-long3

(1DepartmentofHematology，2CentralLaboratory,TheFirstAffiliatedHospitalofChongqingUniversityofMedicalSciences,Chongqing400016,China;3DepartmentofHematology,ChongqingThreeGorgesCentralHospital,Chongqing404000,China.E-mail: 13220327680@163.com)

[ABSTRACT]AIM: To investigate the effects of fucoidan on the angiogenesis of multiple myeloma cells in vitro, and its related mechanisms. METHODS: The human multiple myeloma RPMI 8226 cells and human endothelial cells were cultured in vitro. The growth inhibition rate of RPMI 8226 cells was examined by MTT assay. The cell cycle and apoptosis rate were measured by flow cytometry. RPMI 8226 cells were treated with fucoidan for 72 h, and the cell culture supernatant was collected. The VEGF concentration was examined by ELISA, and the tube formation assay was applied to assess the angiogenic activity. After treatment with fucoidan for 72 h at different concentrations, the protein levels of HIF-1α, VEGF, p-AKT and p-ERK1/2 were detected by Western blot. RESULTS: Fucoidan inhibited the growth of RPMI 8226 cells in a dose- and time-dependent manner. After treatment with fucoidan for 72 h, the cell cycle was arrested at G1phase, and the apoptotic rate of RPMI 8226 cells was increased with the increasing concentration of fucoidan, which was much higher than that in control group (P<0.05). The VEGF concentration was significantly decreased with the increa-sing concentration of fucoidan. The numbers and areas of the capillary-like structures decreased while the concentration of fucoidan increased, and those at 100 mg/L were less than those in the control (P<0.05). The protein levels of HIF-1α, VEGF, p-AKT and p-ERK1/2 in fucoidan group were significantly lower than those in control group (P<0.05). CONCLUSION: Fucoidan inhibits the secretion of VEGF in multiple myeloma cells, and reduces angiogenesis induced by multiple myeloma cells. It inhibits the protein expression of HIF-1α and VEGF, which may be related to inhibiting the phosphorylation of AKT and ERK1/2.

[KEY WORDS]Fucoidan; Multiple myeloma; HIF-1α； VEGF; AKT； ERK1/2

通讯作者△梁文同 Tel: 0312-2096686; E-mail: liangwentong1967@sina.com; 成志勇 Tel: 0312-2096685; E-mail: dzczy@sohu.com

[收稿日期]2015- 06- 08[修回日期] 2015- 09- 09

[文章编号]1000- 4718(2015)12- 2158- 06

doi:10.3969/j.issn.1000- 4718.2015.12.007

[中图分类号]R363; R979.1

[文献标志码]A