烫伤药水喷雾剂促进大鼠烫伤愈合实验研究 ※

烫伤药水喷雾剂促进大鼠烫伤愈合实验研究※

张星马朝群△

(南京中医药大学2012级硕士研究生，江苏南京210023)

【摘要】目的观察烫伤药水喷雾剂对大鼠烫伤创面愈合的影响。方法将150只浅Ⅱ度烫伤SD大鼠模型随机分为5组，即实验高、中、低剂量组(烫伤药水喷雾剂)，阳性对照组(磺胺嘧啶银软膏)，阴性对照组(基质软膏)，每组各30只。5组大鼠制备浅Ⅱ度烫伤模型后，阴性对照组予基质软膏外涂，剩余4组分别予相应药物外涂或外喷。于烫伤后第2、7、14 d随机取各组大鼠各10只，计算创面愈合率；第1、2、3 d随机取各组大鼠各10只，截取创面皮肤，计算组织含水量；第5、10、15 d 8：00取各组剩余10只大鼠，计算大鼠新生毛细血管生长情况。结果第2、7、14 d实验中剂量组及阳性对照组创面愈合率高于阴性对照组同期(P<0.01)，第7、14 d实验高剂量组创面愈合率高于阴性对照组同期(P<0.01)，第2、7 d实验低剂量组创面愈合率高于阴性对照组同期(P<0.05)；第1、2、3 d实验中剂量组及阳性对照组创面组织含水量均低于阴性对照组同期(P<0.01，P<0.05)，第1、2 d实验高、低剂量组创面组织含水量低于阴性对照组同期(P<0.05)。第5、10、15 d实验高、中剂量组及阳性对照组创面组织新生毛细血管数均高于阴性对照组同期(P<0.05，P<0.01)。结论烫伤药水喷雾剂具有减少烫伤组织水肿，促进大鼠创面愈合的良好作用。

【关键词】大鼠；疾病模型，动物；伤口愈合；烧伤；外用药；中药疗法

doi：10.3969/j.issn.1002-2619.2015.06.026

【中图分类号】R-332；R64；R644.053.1

【文献标识码】A

【文章编号】1002-2619(2015)06-0871-04

通讯作者：△江苏省中医院普外科，江苏南京210029

作者简介：张星(1983—)，男，住院医师，硕士研究生在读，学士。

Abstract【】ObjectiveTo observe the healing effects of scald lotion spray on scalded wound in rats. Methods150 SD rats (shallow Ⅱ degree scald model) were randomly divided into 5 groups：the experimental high-，middle-，low-dose group (scald lotion spray)，positive control group (sulfadiazine silver ointment) and negative control group (matrix ointment)，30 rats in each group. After shallow Ⅱ degree scald modeling，rats in negative control group were received matrix ointment for external use，and rats in other four groups were received corresponding drugs for external use.10 rats were randomly selected in each group，and the wound healing rate was detected on the second，seventh and fourteenth day after scald. 10 rats were randomly selected in each group that removed skin after anesthesia on the first，second and third day of experiment，and the tissue water content was calculated. The remaining 10 rats in each group were selected，and the growth situations of newly born capillaries on skin tissue were observed on the 5，10，15 d at 8 am in order to evaluated the regenerative capacity of scald lotion spray on scald wound healing. ResultsThe wound healing rate in experimental middle-dose group and positive control group was higher than that in negative control group on 2，7，14 d (P<0.01)，the wound healing rate in experimental high-dose group was higher than that in negative control group on 7，14 d (P<0.01)，as well as the esperimental low-dose group on 2，7 d (P<0.05). The tissue water content in experimental middle-dose group and positive control group was lower than that in positive control group on 1，2，3 d (P<0.01，P<0.05)，as well as the experimental high-，low-dose group(P<0.05).The amounts of newborn blood capillary in experimental high-dose，middle-dose and positive group was higher than that in negative group (P<0.05，P<0.01). ConclusionScald lotion spray has good effects on the promoting wound healing in rats involves reduce scalded tissue edema in rats.

收稿日期：(2014-05-19)

※项目来源：江苏省中医药局科技项目(编号：LZ11023)

研究方向：普外科。

Experimental study of scald lotion spray on the promoting scald wound healing in ratsZHANGXing*，MAChaoqun.*PostgraduateofNanjingTraditionalChineseMedicineUniversity，Classof2012，Jiangsu，Nanjing210023

【Key words】Rat；Disease models；Animal；Wound healing；Burn injury；Traditional Chinese medicine therapy；External application drugs

随着时代及经济的发展，烫伤的发病率逐年增高，在日常生活中，因意外烫伤引起的皮肤损伤非常多见。治疗烫伤的中药使用广泛，剂型丰富，并且近些年来在借鉴了西医及当代生物科技后，中药治疗烫伤制剂有了大幅度发展[1-2]。烫伤药水喷雾剂是江苏省中医院外科临床常年使用的特色外用药物，治疗小面积烫伤效果良好，适用于临床常见的小面积Ⅰ、Ⅱ度烫伤。本实验通过建立大鼠浅Ⅱ度烫伤模型，外喷烫伤药水喷雾剂，观察其对促进大鼠烫伤愈合的作用，结果如下。

1材料与方法

1.1材料

1.1.1实验动物SD大鼠(清洁级)150只，雌雄各半，体质量190~220 g，南京中医药大学实验动物中心提供，动物合格证号SCXK(浙)2008-0033。

1.1.2实验仪器恒温水浴锅(HH-1A型，J2082，南京环科实验仪器有限公司)，数码相机(佳能D50)，电子天平(HANG PING牌YP102N型，上海精密仪器有限公司)，冷冻干燥机(北京松源华兴科技发展有限公司)，50 mL喷雾瓶5只。

1.1.3实验试剂及药品烫伤药水喷雾剂(江苏省中医院院内制剂，苏药制字Z0400054)，药物组成为虎杖、地榆、黄连、忍冬藤、大黄、冰片等，以浸渍法、醇提法及水提法等提取相关成分，合并滤液，以适量乙醇溶解冰片，再加入95%乙醇，至测定乙醇浓度为75%，分别制备浓度相当于含生药10、20、30 g的药水各500 mL；磺胺嘧啶银软膏(每支含1%磺胺嘧啶银 40 g，广东恒健制药有限公司，国药准字H44020614)；70%酒精 500 mL；10%水合氯醛50 mL；0.9%氯化钠注射液500 mL 2瓶。

1.2实验方法

1.2.1大鼠烫伤模型建立首先制作动物固定板，25 cm×20 cm×1.0 cm的木板1块，在其中心抠出一长轴为7.7 cm，短轴为4.3 cm的标准椭圆型孔备用，椭圆面积26 cm2[1]。150只大鼠饲养1周后，称体质量，剃毛器脱毛，70%酒精消毒，然后以10%水合氯醛3 mL/kg腹腔注射麻醉后，将制作好的木板覆盖在去毛后的大鼠背部，恒温水浴箱温度设定在75 ℃，将4层无菌纱布浸泡在水浴箱内，10 s后取出，均匀覆盖在大鼠背部裸露处15 s，用0.9%氯化钠注射液冲洗，无菌纱布擦干水分[2]，形成浅Ⅱ度烫伤模型(病理切片证实)。

1.2.2动物分组烫伤后30 min将150只大鼠随机分为5组，即阴性对照组(基质软膏组)、阳性对照组(磺胺嘧啶银软膏组)、实验低剂量组(相当于含提取液生药10 g)、实验中剂量组(相当于含提取液生药20 g)、实验高剂量组(相当于含提取液生药30 g)，分笼饲养。

1.2.3给药方法阴性对照组予基质软膏烫伤部位外涂，阳性对照组予磺胺嘧啶银软膏烫伤部位外涂，均每日1次，每次每只大鼠约20 mg。实验高、中、低剂量组分别予相应药液外喷，3喷，约10 mL，每日1次。

1.3检测指标及方法

1.3.1创面面积愈合率于烫伤后第2、7、14 d 8：00随机取各组各大鼠10只，固定，裸露烫伤创面，以相同焦距、相同距离，用数码相机拍摄创面，并辅以ImageJ软件，计算烫伤创面面积，并予以记录，然后按公式计算创面愈合率。创面愈合率=[(原始创面面积-未愈合创面面积)/原始创面面积]×100%。

1.3.2创面组织含水量于烫伤后第1、2、3 d 8：00随机取各组各大鼠10只，以10%水合氯醛3 mL/kg腹腔注射麻醉后，截取1.5 cm×1.5 cm创面皮肤，每次取2块，电子天平称质量，后将其干燥后再称质量，计算组织含水量。

1.3.3新生毛细血管观察于烫伤后第5、10、15 d 8：00取各组剩余10只大鼠，以10%水合氯醛3 mL/kg腹腔注射麻醉后，截取1.5 cm×1.5 cm创面皮肤，每次取2块，固定于4%甲醛溶液，24 h后用酒精逐级脱水，二甲苯透明2次，石蜡包埋切片，苏木精—伊红(HE)染色，病理图文分析系统计算各组大鼠新生毛细血管生长情况。

2结果

2.15组大鼠创面愈合率比较见表1。

由表1可见，第2、7、14 d实验中剂量组及阳性对照组创面愈合率高于阴性对照组同期(P<0.01)，第7、14 d实验高剂量组创面愈合率高于阴性对照组同期(P<0.01)，第2、7 d实验低剂量组创面愈合率高于阴性对照组同期(P<0.05)。实验高、中、低剂量组创面愈合率与阳性对照组同期比较差异无统计学意义(P>0.05)。第2 d实验中剂量组创面愈合率高于实验高剂量组同期(P<0.01)，实验中剂量组与低剂量组同

表1　5组大鼠创面愈合率比较　 ± s

期比较差异无统计学意义(P>0.05)，实验低剂量组创面愈合率与高剂量组同期比较差异无统计学意义(P>0.05)；第7 d实验高、中、低剂量组创面愈合率同期比较差异无统计学意义(P>0.05)；第14 d实验中剂量组创面愈合率高于实验高剂量组和低剂量组同期(P<0.01)，实验高剂量组与低剂量组同期比较差异无统计学意义(P>0.05)。

2.25组大鼠创面组织含水量比较见表2。

表2　5组大鼠创面组织含水量比较　 ± s

由表2可见，第1、2、3 d实验中剂量组及阳性对照组创面组织含水量均低于阴性对照组同期(P<0.01，P<0.05)，第1、2 d实验高、低剂量组创面组织含水量低于阴性对照组同期(P<0.05)。实验高、中、低剂量组创面组织含水量与阳性对照组同期比较差异无统计学意义(P>0.05)。第1、2、3 d实验高、中、低剂量组创面组织含水量比较差异无统计学意义(P>0.05)。

2.35组大鼠创面组织新生毛细血管数比较见表3。

表3　5组大鼠创面组织新生毛细血管数比较　条， ± s

由表3可见，第5、10、15 d，实验高、中剂量组及阳性对照组创面组织新生毛细血管数均高于阴性对照组同期(P<0.05，P<0.01)，实验高、中、低剂量组创面组织新生毛细血管数与阳性对照组同期比较差异无统计学意义(P>0.05)。第10 d实验高剂量组及实验低剂量组创面组织新生毛细血管数均低于实验中剂量组(P<0.05)，实验高剂量组与实验低剂量组同期比较差异无统计学意义(P>0.05)；第5、15 d实验高、中、低剂量组创面组织新生毛细血管数同期比较差异无统计学意义(P>0.05)。

3讨论

烫伤的原因主要包括火焰、炽热液体和固体化学物质等致伤因素，属中医学“不内外因”范畴[3-5]。中医学认为，烫伤乃由火毒伤肌肤，气滞水阻血瘀，伤处红肿热痛，可见水疱[6]。烫伤药水喷雾剂方中虎杖清热解毒，散瘀止痛，易收敛，为君药。地榆凉血止血，解毒敛疮；忍冬藤清热疏风，通络止痛；大黄、黄连清热泻火，凉血解毒，逐瘀活血，均为臣药。冰片清热止痛，止痒防腐，为佐使。

现代医学认为，创面愈合是机体修复各种损伤造成的组织缺失，通过再生及修复等手段，以恢复机体组织结构及功能完整性的过程。顺利完成愈合过程的基础是多种愈合相关细胞生物学功能的正常发挥，并依赖细胞、细胞外基质及生长因子和细胞因子在内的可溶性介质之间的相互作用[7]。本研究结果显示，第2、7、14 d烫伤药水喷雾剂能显著提高大鼠创面愈合率，但与阳性对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。第2 d实验中剂量组创面愈合率高于实验高剂量组同期(P<0.01)，实验中剂量组与低剂量组同期比较差异无统计学意义(P>0.05)，实验低剂量组创面愈合率与高剂量组同期比较差异无统计学意义(P>0.05)；第7 d实验高、中、低剂量组创面愈合率同期比较差异无统计学意义(P>0.05)；第14 d实验中剂量组创面愈合率高于实验高剂量组和低剂量组同期(P<0.01)，实验高剂量组与低剂量组同期比较差异无统计学意义(P>0.05)。

烫伤早期渗出，凝固性坏死组织周围的受损皮肤组织局部血管扩张、血流增加、流速减慢，同时在炎症介质作用下血管通透性增高，血液成分外渗。烧伤创面渗出的一个特点是受热力损坏的变性胶原还可吸附渗出的钠及水分，使渗出进一步加重，临床表现为创面肿胀和体液外渗。所以在烫伤早期控制水肿很关键，测定组织含水量是评定疗效的一个方面。本研究结果显示，第1、2、3 d烫伤药水喷雾剂能显著降低创面组织含水量，减少烫伤创面早期水肿及渗出。第1、2、3 d实验高、中、低剂量组创面组织含水量比较差异无统计学意义(P>0.05)。

机体血管系统的生成可分为血管发生和血管新生2种不同过程。血管新生是指内皮前体细胞，即成血管细胞分化成内皮细胞，形成原始血管网的过程。血管生成是指从已存在的血管以生芽方式长出新毛细血管的过程。过去人们认为成人血管仅由血管新生来维持和修复，然而循环中内皮祖细胞的发现提示出生后也可能存在血管发生[8]。故测定创面新生毛细血管数是检测烫伤修复的一个重要指标。本研究结果显示，第5、10、15 d 烫伤药水喷雾剂能显著增加创面组织新生毛细血管数，促进创面愈合。第10 d实验高剂量组及实验低剂量组创面组织新生毛细血管数均低于实验中剂量组(P<0.05)，实验高剂量组与实验低剂量组同期比较差异无统计学意义(P>0.05)，第5、15 d实验高、中、低剂量组创面组织新生毛细血管数同期比较差异无统计学意义(P>0.05)。

现代药理研究表明，烫伤药水喷雾剂方中地榆具有良好的止血，抗炎，促进伤口愈合的作用，其中含有的鞣质，可以促进凝血[9]；虎杖对金黄色葡萄球菌等多种细菌均有抑制作用，能促使创面局部收缩型血管转变为扩张型，促进新生毛细血管生成，改善微循环及周围组织血供，促进创面愈合[9]。黄连能减轻早期创面炎性渗出[10]；大黄有较强的抗菌作用，抗菌谱广，其中以大黄酸、大黄素和芦荟大黄素抗菌作用最强；冰片有良好的挥发作用，使创面干燥，并具良好的透皮吸收功效，从而减轻烫伤创面早期水肿，用其外敷还可降低体温，预防毒血症的发生[10]。

综上所述，实验中剂量组在创面愈合率及新生毛细血管、组织含水量方面疗效均优于低剂量组及高剂量组。低剂量组可能为药物浓度偏低，未达到最佳治疗浓度，而高剂量组浓度偏高，不良反应系数增高，如刺激创面，造成渗出过多等。因此,实验中剂量组最佳。在组织含水量的指标中，随着时间的推移，2个指标数值均降低，但实验高、中、低剂量组的数值降低更为明显，以实验中剂量组为最优。新生毛细血管指标中，随时间推移，数值均降低，但实验高、中、低剂量组随时间推移数值降低较对照组缓慢，15 d时，数值仍较高。烫伤药水喷雾剂可通过减轻烫伤创面早期的水肿及渗出，促进创面组织新生毛细血管生成，从而发挥其促进烫伤创面愈合、提高愈合率的功效。

参考文献

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(本文编辑：董军杰)

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