卵巢癌组织中CXCR4、MMP-9的表达变化及临床意义

刘静，张柳，杨勇，李春燕，龚平，郭华雄

（荆州市中心医院，湖北 荆州 434020）

卵巢癌是妇科三大恶性肿瘤之一，具有较高的病死率，肿瘤细胞发生侵袭转移是其主要的致死因素。近年大量研究显示，CXC家族趋化因子受体4（CXCR4）在多种恶性肿瘤中表达，并通过CXC家族趋化因子受体4配体（CXCL12）相结合来影响肿瘤细胞定向迁移，从而促进肿瘤的侵袭转移［1］。基质金属蛋白酶9（MMP-9）是一种能降解细胞外基质（ECM）成分的重要蛋白水解酶，参与多种恶性肿瘤的侵袭转移过程。但CXCR4、MMP-9在卵巢癌组织中的相关性研究鲜有报道。2007年3月～2013年9月，我们观察了卵巢癌组织中CXCR4、MMP-9的表达变化，并探讨其意义。

1 资料与方法

1.1 临床资料 收集2007～2013年荆州市中心医院收治的卵巢癌患者60例，年龄28～69岁，平均52.4岁;其中＞50岁者36例，≤50岁者24例。所有患者均经病理证实且术前均未进行放化疗。组织学分型:浆液性癌45例，黏液性癌15例。参照WHO（2003年版）组织学分级:高分化（G1）15例，中分化（G2）25，低分化（G3）20例。根据国际妇产科联盟FIGO分期标准:Ⅰ期10例，Ⅱ期18例，Ⅲ期27例，Ⅳ期5例。伴有淋巴结转移组28例，无淋巴结转移组32例。手术留取卵巢癌组织60例份（A组），另取20例份交界性肿瘤（B组）、10例份良性肿瘤（C组）。

1.2 主要试剂 CXCR4多克隆抗体购自武汉博士德试剂公司，兔抗人多克隆抗体MMP-9、EnVision试剂盒及DAB显色试剂盒均购自上海基因试剂公司。

1.3 CXCR4、MMP-9表达检测 标本经10%中性甲醛固定，脱水及石蜡包埋，4 μm连续切片，采用EnVision法进行免疫组化染色，以PBS代替一抗作阴性对照，以已知阳性片作阳性对照。滴加一抗前均经高温抗原修复，DAB显色后进行苏木精复染。具体操作步骤参照检测试剂盒说明书进行。结果判定标准:以细胞膜和细胞质呈黄色或棕黄色为CXCR4和MMP-9阳性表达。由两位中级以上医师在双盲法下进行独立计数;随机选取10个高倍镜视野，取平均值;采用半定量—积分法进行综合评分［2］。染色强度:阴性为0分，淡黄色为1分，棕黄色为2分，棕褐色为3分;阳性细胞数:无阳性细胞0分，阳性细胞≤10%为1分，11% ～50%为2分，51% ～75%为3分，＞75%为4分。染色强度和阳性细胞百分比的乘积＞3分即为阳性。

1.4 统计学方法 采用SPSS19.0统计软件。组间比较采用χ2检验，相关性分析采用Spearman相关分析法。P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 各组 CXCR4、MMP-9表达比较 A、B、C组CXCR4阳性率分别为 58.33%（35/60）、20.00%（4/20）、10.00%（1/10），A 组分别与 B、C 组比较，P均 ＜0.05（χ2值分别为 8.822、8.016）;MMP-9 阳性率分别为 83.33%（50/60）、35.00%（7/20）、20.00%（2/10），A组分别与 B、C组比较，P均 ＜0.05（χ2值分别为 17.107、17.999）。

2.2 CXCR4、MMP-9表达与卵巢癌临床病理参数的关系 结果见表1。由表1可知，CXCR4表达与卵巢癌TNM分期、淋巴结转移有关，MMP-9表达与卵巢癌组织学分级、TNM分期、淋巴结转移有关（P均＜0.05）。

表1 CXCR4、MMP-9表达与卵巢癌临床病理参数的关系

2.3 卵巢癌组织中CXCR4与MMP-9表达的关系卵巢癌组织中CXCR4与MMP-9表达呈正相关（r=0.257，P＜0.05）。

3 讨论

恶性肿瘤细胞发生浸润转移是一个多步骤、多因素协同参与的结果，也是致死的主要原因。CXCR4是一种编码352个氨基酸且高度保守的G蛋白偶联的7次跨膜受体，其特异性配体为趋化因子CXCL12，配体与受体结合后构成的 CXCL12/CXCR4偶联分子不仅在维持胚胎发育、介导免疫及炎症反应、调节淋巴造血系统中发挥重要作用，且与细胞间信号传递、细胞迁移密切关系［3］，CXCL12/CXCR4生物轴通过影响肿瘤细胞与基质相互作用，调控信号传导途径，促进肿瘤浸润转移;而另一方面可通过抑制血管生成及免疫活性细胞来抑制肿瘤的生长及转移［4］。目前，越来越多的研究发现，CXCR4在多种恶性肿瘤中呈不同程度的高表达，活化后的CXCR4可通过 PI3K/AKT、MEK/MAPK或 JAK/STAT等不同信号传导途径来调控肿瘤细胞黏附、增殖以及浸润转移［5］。本研究显示，A组CXCR4阳性率高于B、C组，且CXCR4阳性表达与卵巢癌TNM分期有关。推测CXCR4在卵巢癌中表达增高，可能通过激活某种信号转导途径增强肿瘤细胞抗凋亡能力，传导调节肌动蛋白聚合和伪足形成的信号，从而导致肿瘤细胞趋化和侵袭，参与卵巢癌发生发展过程［6］。CXCR4与肿瘤的浸润转移密切相关这一观念在宫颈癌、胃癌等多种恶性肿瘤中已得到证实［7］，在乳腺癌及肠癌研究中发现运用si-RNA干扰或抑制CXCR4的表达后，肿瘤细胞增殖活性明显降低，患者的生存率亦得到提高［8，9］。近年来通过免疫组化法检测CXCR4在肿瘤组织中的表达发现，CXCR4阳性表达定位于肿瘤细胞膜、细胞质甚至细胞核，而表达在细胞核常发生在早期肿瘤细胞，且预后较好，只有定位于细胞膜/质的CXCR4与肿瘤浸润转移密切相关［10］。本研究显示，CXCR4定位于细胞膜/胞质，且CXCR4表达与卵巢癌淋巴结转移有关，此与以往文献报道一致。因此，CXCR4有望成为预测卵巢肿瘤预后的独立指标。

MMP-9属于明胶酶（Ⅳ型胶原酶）类的蛋白水解酶，当组织发生炎症时，MMP-9即可被激活，降解ECM中的Ⅳ型胶原和凝胶，导致基膜破坏［11］。而ECM降解是促使肿瘤转移的重要步骤之一，MMP-9在多种恶性肿瘤中表达增高，在肿瘤细胞的侵袭转移中发挥着重要作用［12］。本研究显示，A组MMP-9阳性率高于B、C组，且MMP-9表达与卵巢癌组织学分级、TNM分期、淋巴结转移有关，因此推测MMP-9可作为评估卵巢癌恶性程度及淋巴结转移的一个评估指标。CXCR4通过与CXCL12结合形成CXCL12/CXCR4生物轴，通过PI3K/AKT信号传导途径促进肿瘤细胞MMP-9的表达，促进肿瘤的侵袭转移［13］。Sekuła 等［14］在宫颈癌 HTB-35 细胞株研究中发现，CXCR4可正调控MMP-9的表达水平，活化的CXCR4通过诱导细胞内钙离子的浓度来调节细胞外信号调节激酶（ERK1/2）表达分泌MMP-9，降解基底膜，促进肿瘤发生浸润转移［15］。本研究显示，卵巢癌组织中CXCR4与MMP-9表达呈正相关，推测两者在卵巢癌的发生发展及浸润转移中可能起协同作用。研究［16］表明，活化的CXCR4能促进肿瘤细胞与ECM的黏附，诱导MMP-9的表达，破坏基底膜及重组调节骨架蛋白的聚合与再分布，调节细胞的运动和迁移，进一步说明CXCR4可能促进MMP-9的产生，降解ECM并诱导肿瘤细胞发生浸润及淋巴结转移。

综上所述，CXCR4与MMP-9表达均与卵巢癌的TNM分期及淋巴结转移密切相关，且两者存在一定的协同效应，即CXCR4可调控MMP-9的表达促进肿瘤侵袭转移，这与目前国内外学者研究［17，18］结果相一致，但其具体作用机制尚未明确，有待进一步研究。

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