青年女性大肠癌患者癌组织中ERβ、Bad表达变化及意义

董伟，姜艳芳，魏志，孙晓明

（1山东协和学院医学院，济南 250109;2中国人民解放军济南军区总医院）

大肠癌是胃肠道常见恶性肿瘤，近年来我国大肠癌的发病率有日渐增高的趋势。据研究［1］报道，国内＜40岁青年大肠癌的发病率逐渐增高，尤其青年女性散发性大肠癌发病率增长趋势更为明显。雌激素是一种G18类固醇激素，在调节多种组织器官的发育及维持内环境稳定中发挥了重要的作用，其主要通过雌激素受体（ER）激活信号通路来调控基因表达而发挥作用。ER是类固醇受体超家族中的一员，包括ERα和Erβ两种亚型。Bad属于Bcl-2家族成员，可与凋亡抑制基因Bcl-2和Bcl-xl的表达产物形成异源二聚体，抑制其作用从而启动促凋亡程序。2007年12月～2014年12月，我们观察了青年女性大肠癌患者癌组织中ERβ、Bad表达变化，并探讨其意义。

1 资料与方法

1.1 临床资料 选择济南军区总医院收治的大肠癌患者42例，年龄23～40岁。所有患者均经病理确诊且术前均未行放化疗或免疫治疗。肿瘤部位:结肠26例，直肠16例。肿瘤分化程度:中分化25例，低分化17例。无淋巴结转移19例，有淋巴结转移23。临床分期:Ⅰ+Ⅱ期17例，Ⅲ+Ⅳ期25例。手术留取大肠癌组织42例份（大肠癌组），另取癌旁组织（距癌组织边缘2 cm以外）42例份（癌旁组）。

1.2 ERβ、Bad检测方法 采用免疫组化SP法。所有标本均经4%甲醛溶液固定，石蜡包埋，连续切片，切片厚4 μm。石蜡切片常规脱蜡至水后以3%H2O2灭活内源性过氧化物酶，枸橼酸盐缓冲液微波修复抗原后，以正常山羊血清封闭非特异性抗原，滴加适当稀释的特异性一抗，4℃过夜，滴加相应二抗，37℃孵育30 min，然后滴加相应辣根过氧化物酶工作液，37℃孵育30 min，最后经二氨基联苯胺过氧化氢显色、苏木素复染、中性树脂封片显微镜下观察结果。以PBS代替一抗作为阴性对照染色。结果判断标准［2］:以细胞核内出现棕褐色颗粒为阳性细胞，计数10个高倍视野（400倍），阳性细胞数 ＜5%为阴性，5% ～25%为1分，26% ～50%为2分，51% ～75%为3分，75%以上为4分。阳性强度以淡黄色为1分，黄色为2分，棕黄色为3分。两者相乘，1～4分为弱阳性（+），5～8分为中等阳性（++），9～12分为强阳性（+++）。

1.3 统计学方法 采用SPSS19.0统计软件。计数资料比较采用χ2检验，相关性分析采用Spearman相关分析法。P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组ERβ、Bad阳性率比较 大肠癌组及癌旁组ERβ阳性率分别为71.43%、88.09%，两组比较，P＜0.05（χ2值为 10.496）;Bad 阳性率分别为76.19%、85.71%，两组比较，P＜ 0.05（χ2值为20.287）。

2.2 ERβ、Bad表达与大肠癌临床病理参数的关系结果见表1。由表1可知，ERβ、Bad表达均与大肠癌肿瘤分化程度有关（P均＜0.05）。

2.3 大肠癌组织中ERβ与Bad表达的关系 大肠癌组织中ERβ与Bad表达呈正相关（r=0.389，P＜0.05）。

表1 ERβ、Bad表达与大肠癌临床病理参数的关系

3 讨论

雌激素是一种G18类固醇激素，由雄激素主要在卵巢组织及其他包括肌肉、脂肪、神经等组织的芳香化酶催化转化而来［3］。雌激素在调节多种组织器官的发育及维持内环境稳定中发挥了重要作用，如心血管系统、神经系统、免疫系统及骨代谢等方面［4］。因此，雌激素被牵涉进一系列病理生理学事件，包括癌症（生殖组织及非生殖组织癌症）［5］。雌激素主要通过ER激活信号通路来调控基因表达而发挥作用。ER是类固醇受体超家族中的一员，有ERα和Erβ两种亚型。到目前为止，已发现的ERβ的亚型包括ERβ1（野生型）、ERβ2（也称为ERcx）、ERβ3、ERβ4、ERβ5 等，其生理功能尚未完全澄清［6，7］。大量研究证实，雌激素参与了大肠癌的形成。研究［8，9］发现，结直肠癌发病率存在性别差异，男性较女性多发，但是绝经后妇女的结直肠癌发病率呈现逐年升高趋势，最终与男性发病率相持平。但是雌激素参与大肠癌的机制尚未明确，雌激素能否促进或抑制青年女性散发性大肠癌的发生仍有争论，研究表明ERβ在其中发挥了保护性作用。Rudolph等［10］发现，雌激素替代治疗能明显降低绝经后女性ERβ阳性大肠癌的发病风险。研究［11，12］发现，雌激素能上调结肠细胞错配修复基因（MMR）活性，从而预防MMR功能缺陷引起的结直肠癌，这一保护机制是ERβ调控miRNA的表达而实现的。Taggarshe等［13］最近研究发现，女性大肠癌患者ERβ表达较正常组织低，推测ERβ在大肠癌的发病中起到保护作用，可能通过抑制细胞的增殖和促进细胞凋亡发挥作用。Honma等［14］证实，ERβ基因重复序列多态性与结肠癌发病相关，并且年龄和激素水平在其中发挥了重要作用。Passarelli等［15］也指出，肠道中ERβ的表达缺失与结肠癌的发生发展密切相关，而ERβ基因单核苷酸多态性在ERβ和肿瘤的发生及转移过程中扮演了重要角色。

Bad属于Bcl-2家族成员，可与凋亡抑制基因Bcl-2和Bcl-xl的表达产物形成异源二聚体，抑制其作用从而启动促凋亡程序。Ranger等［16］研究发现，如果小鼠中缺乏Bad，则可以在不需要任何外在因素作用下发生肿瘤细胞的增殖，而且大多数是B淋巴细胞瘤，这一研究结论也说明了Bad在肿瘤发生中是一种抑制肿瘤细胞的作用。若Bad发生磷酸化将会失去活性，间接发挥促进细胞增殖、抗凋亡的作用。Stickles等［17］研究Bad介导的凋亡途径在癌症的发生和进展中的作用时发现，与永生化正常细胞相比，肿瘤细胞中（卵巢癌、结直肠癌、乳腺癌）的pBad表达升高。

本研究显示，大肠癌组ERβ、Bad阳性率均低于癌旁组，提示两者的低表达可能与大肠癌的发生、发展相关，这可能是由于细胞凋亡受到抑制使大肠癌细胞增殖过度引起的。本研究发现，ERβ、Bad阳性表达与大肠癌肿瘤分化程度有关，说明ERβ、Bad的异常表达不仅与大肠癌的发生有关，而且与其进展也有关。本研究还发现，大肠癌组织中ERβ与Bad表达呈正相关，说明ERβ可能是通过与凋亡因子Bad相互作用来诱导大肠癌细胞的凋亡。因此，检测两者大肠癌组织中的表达情况对判断青年女性大肠癌患者预后可能具有一定的参考价值，并可有望成为大肠癌预防及治疗的新靶点。

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