宫颈癌组织中HMGB-1、PCNA的表达变化及临床意义

吴英娟

（天津市第四中心医院，天津 300140）

宫颈癌是妇科常见肿瘤之一，病理过程与肿瘤的增殖、侵袭性相关，针对肿瘤的增殖和侵袭性进行的基因治疗非常有意义［1］，但目前有效的治疗基因尚不清楚。增殖细胞核抗原（PCNA）是细胞中的一种核蛋白，与细胞的增殖状态密切相关，可作为反映肿瘤细胞增殖程度与判断预后的指标［2］。高迁移率族蛋白B1（HMGB-1）属于高迁移率族蛋白家族，是一种非组蛋白染色体蛋白，主要在胚胎发育早期表达，而在高度分化的组织中几乎不表达。HMGB-1被证实与多种肿瘤的恶性程度、侵袭性和预后相关［3］。本研究观察了宫颈癌组织中HMGB-1、PCNA的表达变化，并探讨其临床意义。

1 资料与方法

1.1 临床资料 选择2010年5月 ～2014年6月天津市第四中心医院收治的宫颈癌患者70例，年龄22～74（42.6±13.2）岁;所有患者均经病理证实，且术前均未进行放化疗及其他针对肿瘤的治疗。病理类型:局限型34例，浸润型36例;分化程度:低分化37例，高中分化33例;浸润深度:T1+T2 14例，T3+T4 56例;无淋巴结转移23例，淋巴结转移47例;按FIGO分类标准［4］，TNM分期Ⅰ+Ⅱ期28例，Ⅲ+Ⅳ期42例。手术留取70例份宫颈癌组织（宫颈癌组）、70例份宫颈癌癌旁组织（癌旁组），另取正常宫颈组织20例份（正常组）。

1.2 组织HMGB-1、PCNA检测 采用免疫组化法。收集石蜡包埋的组织标本，切片（厚4～5 μm），通过10 mmol/L柠檬酸盐缓冲液（pH6.0）高压加热法对宫颈癌组织以及正常宫颈组织切片进行抗原修复，以消除内源性过氧化物酶的活性。经10%山羊血清封闭1 h，滴加一抗（兔抗人PCNA单克隆抗体与兔抗人 HMGB-1单克隆抗体，稀释浓度均为1∶20），置入4℃孵箱过夜，与辣根酶标记的二抗反应（北京中杉桥生物公司），DAB显色，苏木精复染胞核，脱水，封片，置于倒置显微镜下观察并拍照。PBS代替一抗作为阴性对照，已知抗体阳性标本阳性对照。结果判定标准:HMGB-1阳性染色信号呈棕色细小颗粒，均位于细胞质。PCNA蛋白分布于细胞核内，呈棕黄色乃至棕褐色颗粒。每一张切片选取连续的10个高倍视野（400×），每个视野计数200个细胞，分别统计其中的所有阳性细胞，计算阳性细胞百分比。

1.3 统计学方法 采用SPSS19.0统计软件。计数资料比较采用χ2检验，相关性分析采用Pearson相关分析法。P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 各组HMGB-1、PCNA阳性率比较 宫颈癌组、癌旁组、正常组HMGB-1阳性率分别为95.7%（67/70）、22.9%（16/70）、5.0%（1/20），两两比较，P均＜0.05;PCNA 阳性率分别为 90.0%（63/70）、65.0%（45/70）、45.0%（9/20），两两比较，P均 ＜0.05。

2.2 HMGB-1、PCNA表达与宫颈癌临床病理参数的关系 结果见表1。由表1可知，HMGB-1表达与宫颈癌分化程度、淋巴结转移、TNM分期有关，PCNA表达与宫颈癌肿瘤分化程度、浸润深度、淋巴结转移、TNM分期有关（P均＜0.05）。

表1 HMGB-1、PCNA表达与宫颈癌临床病理参数的关系

2.3 宫颈癌组织中PCNA、HMGB-1表达的相关性宫颈癌组织中PCNA与HMGB-1表达呈正相关（r=6.82，P＜0.05）。

3 讨论

宫颈癌严重威胁妇女健康，是仅次于乳腺癌的常见恶性肿瘤，其具有恶性程度高、病死率高的特点。近几年虽然有报道宫颈癌发病率和病死率均有显著降低的情况，但是出现了年轻化趋势，35岁以下妇女患有宫颈癌的比率显著上升，因而宫颈癌的早期诊断以及早期治疗对于这些患者来说非常重要［5］。探索与宫颈癌发生发展的相关分子生物因素及预测肿瘤转移与浸润的潜在风险是当今这个领域的研究热点。目前认为，恶性肿瘤的典型特征为肿瘤侵袭性及转移，一些细胞调节因子及生物活性介质在其中发挥至关重要的作用。大量临床试验表明，高表达侵袭性生物因子的患者预后较差。因此，寻找一个宫颈癌新的基因治疗作用靶点显得尤为重要。

PCNA是一种S期细胞核内大量表达的核蛋白之一，在 DNA的合成调控中发挥至关重要的作用［6］。PCNA水平在DNA合成周期的改变与细胞增殖过程一致，是一种衡量肿瘤恶性程度与增殖能力的可靠指标。有研究［7，8］证实，PCNA 参与中枢神经系统肿瘤、子宫内膜癌、乳腺癌、肝癌等多种恶性肿瘤的发生发展。而细胞无限增殖被认为是肿瘤发生机制之一，肿瘤细胞的增殖活性与肿瘤的浸润、转移和预后密切相关［9］。因此，检测肿瘤组织中PCNA水平有助于预后判断。有研究［10，11］表明，正常胃黏膜组织中PCNA不表达，而胃癌组织中PCNA高表达，分化程度越低，水平越高。已有学者利用免疫组化法检测PCNA在脑胶质瘤、肺癌、宫颈癌、乳腺癌等组织中的表达及其与临床病理分级的关系，并对患者预后进行判断;但宫颈癌组织中PCNA的表达与临床分期、病理分级以及淋巴结转移等临床病理参数之间的关系尚不清楚。本研究显示，宫颈癌组PCNA阳性率高于癌旁组及正常组，且PCNA表达与宫颈癌肿瘤分化程度、浸润深度、淋巴结转移、TNM分期有关，这表明PCNA随着肿瘤病理级别的增高，阳性率明显升高，其表达随肿瘤分级呈递增趋势。上述结果与王晖等［12］和辛海等［13］的结论一致。

HMGB-1是30年前发现的一种细胞因子，主要存在于真核细胞内，在结构上高度保守的单链多肽，约有215个氨基酸残基，其在DNA重组、复制、修复和基因转录的过程中起重要作用［14］。关于HMGB-1在肿瘤中的作用报道逐渐增多，随着深入研究，其在缺血再灌注损伤、自身免疫性疾病、休克中的不同作用也被探索。有研究［15］表明，HMGB-1参与了肿瘤的增殖、生长、浸润与转移，但关于它的研究尚处于探索阶段，有待进一步研究。HMGB-1还与胰腺癌、结肠癌、肝癌、前列腺癌、乳腺癌、卵巢癌等肿瘤的临床分期和不同预后的结局有相关性［16，17］。近年大量研究［18～21］证实，HMGB-1 与胃癌、结直肠癌、胰腺癌的侵袭和淋巴、血液转移密切相关。HMGB-1在多种肿瘤和未成熟细胞中表达，趋化作用可被其诱导产生，参与肿瘤细胞转移。但是关于HMGB-1与宫颈癌临床病理参数的关系以及具体的作用体制目前尚不明确。本研究显示，宫颈癌组HMGB-1阳性率高于癌旁组及正常组，且与宫颈癌肿瘤分化程度、淋巴结转移、TNM分期有关。目前，对于HMGB-1促进肿瘤发展的机制尚不清楚，我们认为可能与HMGB-1通过 Ras、MAPK途径，促使 MAPKs磷酸化，进而激活核转录因子 κB（NF-κB），而 NF-κB 是一种重要的核转录因子，存在于真核细胞中，其与基因上启动子区的固定核苷酸序列结合启动基因转录，从而完成细胞增殖与分化、肿瘤形成与转移等一系列重要生物学功能［22］。

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