广东省虎门地区儿童肺炎链球菌血清型分布及耐药性监测

李 明， 谭丁丁， 张曲涛， 周 湧， 李 薇， 郭文婷， 郭锦均

·论著·

广东省虎门地区儿童肺炎链球菌血清型分布及耐药性监测

李 明， 谭丁丁*， 张曲涛， 周 湧， 李 薇*， 郭文婷， 郭锦均*

目的 了解东莞虎门地区儿童肺炎链球菌的血清型分布和对抗菌药物的耐药性，评估几种疫苗，尤其是7价结合疫苗（PC V7）在本地区对肺炎链球菌的覆盖情况，并为临床合理使用抗菌药物提供依据。方法 对2011年1月—2012年12月就诊肺炎患儿呼吸道标本中分离的肺炎链球菌，采用荚膜肿胀试验进行血清分型，并采用法国生物梅里埃公司的A T B ST R E P 5肺炎链球菌板条进行药物敏感性试验。采用C LSI 2010年版标准判断结果，数据分析采用 W H O N E T 5.5软件。结果 共分离到229株肺炎链球菌，主要血清型为19F 146株（63.8%）、23F 49株（21.4%）、6B 12株（5.2%）和14型8株（3.5%）。7价疫苗（PC V7）的覆盖率为95.2%，11价疫苗（PC V11）的覆盖率为95.2%，13价疫苗（PC V13）的覆盖率为97.4%。所分离的肺炎链球菌中青霉素敏感的肺炎链球菌（PSSP）占92.6%（212/229），青霉素中介的肺炎链球菌（PISP）占5.7%（13/229），青霉素耐药的肺炎链球菌（PRSP）占1.7%（4/229）。肺炎链球菌对红霉素、克林霉素、四环素、甲氧苄啶-磺胺甲口恶唑、氯霉素、头孢噻肟、阿莫西林的耐药率依次为95.6%、93.0%、88.2%、86.5%、7.0%、2.2%、0.9%，所有菌株对万古霉素和左氧氟沙星完全敏感。结论该地区儿童肺炎链球菌的血清型主要为19F、23F、6B和14型，PC V7的覆盖率为95.2%，提示可用于本地区的预防接种。肺炎链球菌对红霉素、克林霉素、四环素、甲氧苄啶-磺胺甲口恶唑耐药严重，对万古霉素、左氧氟沙星、青霉素的敏感率较高。

肺炎链球菌； 血清型； 儿童； 耐药性

肺炎链球菌是儿童社区获得性感染的重要病原菌，可引起肺炎、脑膜炎、菌血症、中耳炎等疾病。近20年来，该菌对多种抗菌药物的耐药性日益严重。现已发现肺炎链球菌有90个血清型，感染后免疫具有型特异性。根据本地区流行病学调查结果，选择和应用相应疫苗不但可以预防肺炎链球菌感染，而且可防止耐药菌株传播。本研究分析了本院2011年1月—2012年12月临床5岁以下儿童患者所分离的229株肺炎链球菌的血清型分布及其对抗菌药物的耐药状况，为临床经验用药、疫苗研制和免疫预防提供实验室依据，现将结果报道如下。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 菌株来源 2011年1月—2012年12月我院儿科门诊及住院5岁以下肺炎患儿痰标本分离的肺炎链球 菌229株，经 法国生 物 梅里埃VIT E K-2 Compact全自动细菌鉴定仪或常规方法鉴定到种。

1.1.2 抗菌药物及培养基 O ptochin（奥普托欣）、苯唑西林纸片为O X OID公司产品，药敏试验平皿采用O X OID公司生产的 M H 琼脂加5%脱纤维羊血。生理盐水、A T B S T R E P 5药敏板条和E试验条为法国生物梅里埃公司产品。

1.1.3 多价血清 多价血清购自丹麦血清研究所（Statens Seru m Institut，Den mark）。

1.2 方法

1.2.1 药敏试验 肺炎链球菌的药敏试验采用法国生物梅里埃公司生产的A T B S T R E P 5药敏板条，包括青霉素、阿莫西林、头孢噻肟、红霉素、克林霉素、四环素、氯霉素、左氧氟沙星、万古霉素和甲氧苄啶-磺胺甲口恶唑，严格按试剂盒说明书进行操作和判读。并采用 E试验条确证青霉素的最低抑菌浓度（M IC），以便正确区分青霉素敏感、中介和耐药肺炎链 球 菌 （PSSP、PISP 和P R SP）。结 果 判断 以C LSI 2010版为 标 准［1］。质 控菌株为肺 炎 链 球 菌A T C C49619。

1.2.2 血清分型 采用荚膜肿胀试验进行血清分型，分型血清可判断23价多糖疫苗（P C V23）所覆盖的血清型（1、2、3、4、5、6B、7F、8、9 N、9 V、10 A、11 A、12F、14、15B、17F、18C、19 A、19F、20、22F、23F和33F）和6 A，此外的血清型归为不能分型类。根据血清分型结果，计算多价疫苗，7价疫苗（P C V7，可覆盖4、6B、9 V、14、18C、19F和23F）、11价疫苗（P C V11，可覆盖1、3、4、5、6B、7F、9 V、14、18C、19F和23F，即在PC V7基础上增加1、3、5、7F）和13价疫苗（P C V13，可覆盖1、3、4、5、6 A、6B、7F、9 V、14、18C、19 A、19F 和23F，即在 P C V11 基础上增加6 A、19 A）的覆盖率。

1.2.3 统计分析 采用 W H O N E T5.5软件进行分析。

2 结果

2.1 肺炎链球菌血清群/型分布

229株肺炎链球菌中，血清型依次为19F 146株（63.8%）、23F 49株（21.4%）、6B 12株（5.2%）、14型8株（3.5%）、19 A 4株（1.7%）、4型3株（1.3%）、15B 2株（0.9%）和6 A 1株（0.4%），4株菌株（1.7%）在本次研究中不能明确分型。229株肺炎链球菌中，P C V7所包含的9 V、18C，P C V11所包含的1、3、5、7F在本次研究中未分离到。PC V7和P C V11的覆盖率均为95.2%，P C V13的覆盖率为97.4%。两者相比较差异无统计学意义（P＞0.05）。血清型的分布情况见表1。

表1 肺炎链球菌的血清型分布Table 1 Distribution of serotypes ofS.pneu moniae

2.2 肺炎链球菌对常用抗菌药物的敏感性

所分离的肺炎链球菌中PSSP占92.6%（212/ 229），PISP占5.7%（13/229），P R SP占1.7%（4/ 229）。其中PC V7所覆盖的肺炎链球菌对青霉素的敏感率93.6%（204/218），P C V13所覆盖的肺炎链球菌对青霉素的敏感率92.8%（207/223），两者相比较差异无统计学意义（P＞0.05）。所分离的肺炎链球菌对红霉素、克林霉素、四环素、甲氧苄啶-磺胺甲口恶唑、氯霉素、头孢噻肟、阿莫西林的耐药率依次为95.6%、93.0%、88.2%、86.5%、7.0%、2.2%、0.9%，所有菌株对万古霉素和左氧氟沙星完全敏感。药敏试验结果见表2。

2.3 不同血清型对抗菌药物的耐药性

本次所分离的肺炎链球菌主要血清型为19F、23F和6B型，其中对青霉素耐药的4株肺炎链球菌均集中在19F。各主要血清型对本次试验相应抗菌药物的耐药性差异均无统计学意义（P＞0.05）。试验结果见表3。

表2 229株肺炎链球菌对抗菌药物的敏感率和耐药率Table 2 Susceptibility of 229 strains ofStreptococcus pneu moniaeto antimicrobial agents（%）

表3 主要血清型肺炎链球菌对抗菌药物的耐药率Table 3 Resistance ofStreptococcus pneu moniaestrains to antimicrobial agents by serotype［n （%）］

3 讨论

肺炎链球菌是儿童社区获得性肺炎的主要病原菌。据估计，发展中国家每年约有814 000例5岁以下的儿童死于肺炎链球菌感染［2］。为保障人类健康，W H O主张采用接种肺炎链球菌疫苗来预防肺炎链球菌感染，而选择疫苗应以本地区人群中肺炎链球菌血清型分布为依据方能达到最佳效果。

流行病学调查显示，P C V7在美国、欧洲、非洲和亚洲部分国家的覆盖率分别可达86%、74%、67%和 43%［3］。 国内 H o 等［4］研 究显 示香港地区P C V7的覆盖率为66.5%；姚开虎等［5］的研究显示北京、上海、广州、深圳儿童人群中P C V7的覆盖率分别为46.0%、80.0%、98.4%、94.4%。本研究中，PC V7在本地区儿童人群中的覆盖率为95.2%，与广州（98.4%）、深圳（94.4%）接近，但与北京（46.0%）、上海（80.0%）、香港（66.5%）存在较大差异。张泓等［6］在2007年10 月—2008年5月对上海某儿童医院分离的肺炎链球菌的研究显示，P C V7的覆盖率为58.9%；姚开虎等［5］在2006年2月—2007年2月对上海另一所儿科医院分离的肺炎链球的研究显示PC V7的覆盖率为80.0%，两者差异较大。提示血清型的分布除了存在地域上的差异外，即使在同一地区的不同医院，不同时期，肺炎链球菌的血清型分布也有可能有所变化。使用疫苗应注意地区差异，同时也需进行连续监测。

欧美的监测研究表明，在广泛使用P C V 7疫苗后，非疫苗覆盖的血清型引起的侵袭性肺炎链球菌病 持 续上 升，尤其 是 19 A。M essina 等［7］报道2002—2005年5岁以下儿童侵袭性肺炎链球菌菌株中，19 A 所占比率逐年升高，分别为11.5%、16.0%、36.0%和44.0%。由于PC V7价格较高，在中国尚未纳入计划免疫之列，加之本地区以流动人口居多，PC V7接种率极低，19 A 所占比率仅为1.7% （4/229），在广泛接种P C V7后，是否如国外的监测19 A的比率大幅上升，值得进一步关注。

本次研究中，肺炎链球菌对万古霉素、左氧氟沙星100%敏感，对青霉素的体外敏感率为92.6%，各主要血清型对本次试验相应抗菌药物的耐药性差异均无统计学意义（P＞0.05）。所分离的肺炎链球菌仍对红霉素、克林霉素、四环素、甲氧苄啶-磺胺甲口恶唑的耐药率较高，与以往的监测基本相同［8］。

P C V7疫苗能有效覆盖本地区肺炎患儿分离的肺炎链球菌，可用于本地区的预防接种。所分离菌株对万古霉素、左氧氟沙星、青霉素敏感率较高，但对大环内酯类药物耐药率仍维持较高水平。

［1］ Cl inical and Laboratory Standards Institute.Performance Standards for A ntimicrobial Susceptibility Testing ［S］.T wentieth Informational Supplement，2010，M 100-S20.

［2］ Scott JA.The preventable burden of pneu m ococcal disease in the developing world［J］.Vaccine，2007，25（13）：2398-2405.

［3］ W orld H ealth Organization.Pheu m ococcal conjugated vaccine for childhood im m unization-W H O position paper［J］.W kly Epidemiol Rec，2007，82（12）：93-104.

［4］ H o PL，La m K F，Chow F K，et al.Serotype distribution and aitimicrobial resistance pattems of nasopharyngeal and invasiveStreptococcus pneu moniaeisolates inH ongK ong children［J］.Vaccine，2004，22（25-26）：3334-3339.

［5］ 姚开虎，王立波，赵根明，等.北京上海广州深圳4家儿童医院肺炎住院患儿肺炎链球菌分离株的血清型分布［J］.中国循证儿科杂志，2008，3（6）：426-432.

［6］ 张泓，李万华，孔菁，等.儿童肺炎链球菌血清型分布及其对抗菌药物的耐药性［J］.中国感染与化疗杂志，2011，11（4）：287-290.

［7］ M essina A F，katz-Gaynor K，Barton T，et al.Im pact of the pneu m ococcal conjugate vaccine on serotype distribution and antimicrobial resistance of invasiveStreptococcus pneu moniae isolates in Dallas，T X，children fro m 1999 through 2005［J］. Pediatr Infect Dis J，2007，26（6）：461-467.

［8］ 李明，周湧，郭文婷，等.2011年东莞市太平人民医院细菌耐药性监测［J］.中国感染与化疗杂志，2013，13（1）：65-71.

Serotype distribution and antimicrobial resistance ofStreptococcus pneumoniaein children in Hu men area

LI Ming，TA N Dingding，Z H A N G Qutao，Z H O U Yong，LI Wei，G U O Wenting，G U O Jinjun. （Department of Laboratory Medicine，Taiping People′s H ospital，Dongguan Guangdong 523907，China）

Objective To investigate the serotype distribution and antimicrobial resistance of theS.pneu moniaestrains isolated fro m children in H u men，and evaluate coverage of the serotypes by several vaccines，especially PC V7.M ethods A total of 229 S.pneu moniaestrains were isolated fro m the children treated in our hospital during January 2011 and Decem ber 2012. Capsular typing was performed by Q uellung reaction.A ntimicrobial susceptibility was determined by A T B ST R E P 5.The data were analyzed by W H O N E T 5.5 software according to C LSI 2010 breakpoints.Results The main serotypes identified fro m the 229S.pneu moniaestrains were 19F（146，63.8%），23F（49，21.4%），6B（12，5.2%）and 14（8，3.5%）.The coverage of these serotypes was 95.2%by PC V7，95.2%by PC V11，and 97.4%by PC V13.Of all theS.pneu moniaestrains，penicillin susceptibleS.pneu moniae（PSSP）accounted for 92.6% （212/229），penicillin intermediateS.pneu moniae（PISP）accounted for 5.7% （13/229）and penicillin resistantS.pneu moniae（P RSP）accounted for 1.7% （4/229）.A bout 95.6%，93.0%，88.2%，86.5%，7.0%，2.2% and 0.9% of the isolates were resistant to erythro m ycin，clindam ycin，tetracycl ine，trimethoprim-sulfamethoxazole，chloramphenicol，cefotaxime and am oxicillin，respectively.No strain was found resistant to vanco m ycin or levofloxacin.Conclusions The serotypes 19F，23F，6B and 14 are the main prevalent serotypes ofS. pneu moniaein children inH u men.PC V7 could cover 95.2% of theseS.pneu moniae，indicating its appropriateness for vaccination in H u men area.TheseS.pneu moniaestrains were highly sensitive to vanco m ycin，levofloxacin and penicillin，but relatively m ore resistant to erythro m ycin，clindam ycin，tetracycline and trimethoprim-sulfamethoxazole.

Streptococcus pneu moniae；serotype；children；antimicrobial resistance

R378.14

A

1009-7708（2015）01-0043-04

2014-02-17

2014-08-21

广东省东莞市科技局项目（201110515025046）。

广东省东莞市太平人民医院检验科，广东东莞 523907；*儿科。

李明（1974—），男，学士，副主任技师，主要从事临床微生物检验及细菌耐药监测。

李明，E-mail：liming8813@126.co m。