东莞地区B群链球菌的血清型与多位点序列型的分析

王佳敏

（肇庆医学高等专科学校 广东 肇庆 526000）

B群链球菌（group b streptococci, GBS），寄生于人下消化道及泌尿生殖道，新生儿GBS感染与母亲生殖道GBS定植关系密切[1]，可引起新生儿肺炎、脑膜炎、败血症，甚至死亡[2]。按照GBS荚膜多糖抗原成分特异性不同，可分为Ⅰa、Ⅰb、Ⅱ～Ⅸ等10种血清型[3]。本研究对临床分离的GBS进行血清学分型和多位点序列分型（multilocus sequence typing, MLST），研究东莞地区GBS的流行病学资料，为实施GBS产前筛查和抗生素预防提供依据。

1.资料与方法

1.1 一般资料

收集2019年1月—2020年1月东莞东华医院门诊及病房孕产妇细菌培养分离的GBS共91株。分离菌株参照文献[4]进行标本的采集、接种和培养，并用VITEK-2全自动微生物分析系统鉴定为GBS。

1.2 血清学分型

使用GBS荚膜抗体进行血清学分型，操作步骤及判读方法参考文献[5]。若菌株与10种分型血清均不发生凝集，定义为不可分型（non-typeable, NT）。

1.3 MLST分型及溯源分析

使用试剂盒提取DNA，参照Jones等[6]建立的MLST分型方案，将7个管家基因进行PCR扩增，扩增产物委托广州生物工程公司进行测序，将测序结果提交到MLST分型数据库确定序列型（sequence type, ST）。用eBURSTv 3.0程序确定克隆群（clonal complexes,CCs）。若7个管家基因中至少有6个是相同的，就认为是同一个CCs[7]。

2.结果

2.1 GBS的血清型

91株GBS分离得到6种血清型，分别为Ⅰa型16株、Ⅰb型12株、Ⅲ型49株、Ⅴ型8株，血清型Ⅵ和Ⅶ各1株，另外有4株GBS为不可分型（NT），见表1。

2.2 MLST分型及溯源分析

经MLST分型和eBURSTv 3.0程序分析91株GBS的分子型，共得到5个克隆群和5个单独序列型（singletons,S），见表1。

表1 91株GBS菌株的序列型与血清型的关系

2.3 多位点序列型与血清型关系

本研究有6种血清型，5种克隆群。66.7%的CC19克隆群菌株和54.5%的CC17克隆群菌株为学清型Ⅲ型，55.6%的CC12克隆群菌株为Ib型；CC19，CC17与血清Ⅲ型比较，CC12和血清Ib型比较，有统计学差异（P＜0.05）。见表1。

3.讨论

本研究测出6个血清型，其中Ⅲ、Ⅰa、Ⅰb、Ⅴ是主要血清型，与北京地区[8]结果相似；在深圳，主要的血清型为Ⅲ、Ⅰa、Ⅰb和Ⅴ型[9]；Lu等[10]研究中，中国流行的血清型主要为Ⅲ、Ⅰa、Ⅰb和Ⅴ，提示国内不同地区GBS流行的血清型基本一致。另外本研究中VI型、VⅢ型各1株和4株不可分型，可能是国内感染流行的新血清型，有待研究。意大利GBS流行血清型为Ⅰa、Ⅲ、Ⅱ、Ⅶ、Ⅴ[11]；提示不同国家、地区GBS流行血清型分布有所区别，但类型基本相似，制备疫苗时应包括Ia、Ib、Ⅲ、Ⅴ型，为进一步开展GBS研究奠定基础。

有研究表明，新生儿GBS感染主要由Ⅰa和Ⅲ血清型引起[12]。婴幼儿早发感染主要为Ⅲ、Ⅰa、Ⅱ和Ⅴ型，迟发感染主要为Ⅲ、Ⅰa、Ⅰb、Ⅴ和Ⅵ型[12]。与本研究中Ⅰa、Ⅰb、Ⅲ和Ⅴ型基本一致，提示东莞地区新生儿GBS疾病的发生率高，需要严格产前检查和抗生素预防。

本研究中，孕妇携带的GBS主要序列型为ST19、ST23和ST17，与北京地区[9]相似；欧洲、亚洲、北美均检测到ST19、ST23和ST17[13]，不同国家、地区收集的GBS序列型相似，表明GBS全球播散。本研究中主要克隆群是CC19、CC17，其中CC19、CC17与Ⅲ型的菌株之间，CC12和Ib型之间以及CC23和Ia型之间有统计学意义（P＜0.05），与Charlotte等[14]的报道相似，提示克隆群和血清型间密切相关，可能与不同克隆群基因水平转移的能力不同有关。研究发现，CC17血清Ⅲ型的GBS常引起新生儿脑膜炎[15]；CC12血清型Ⅰb型的GBS则与新生儿呼吸衰竭有关[16]，表明不同的GBS疾病是由特定的克隆群引起，可能与其黏附力、侵袭力强有关。

综上所述，GBS的血清型和多位点序列型是不断变化的，及时监测我国各地区GBS的血清型和分子型变迁，对防治GBS感染和指导临床治疗具有重要意义。