2012年国产葡萄糖酸钙口服溶液评价性抽验结果与质量评价*

2015-06-24安宝文何家田李加恒赵兴红张志海王俊丽卢永杰张建春

医药导报 2015年3期

关键词：氯化铁葡萄糖酸钙试液

安宝文，何家田，李加恒，赵兴红，张志海，王俊丽，卢永杰，张建春，3

(1.兰州大学药学院，兰州 730000；2.兰州军区联勤部药品仪器检验所，兰州 730050；3.解放军第一医院药剂科，兰州 730030)

2012年国产葡萄糖酸钙口服溶液评价性抽验结果与质量评价*

安宝文1，何家田2，李加恒2，赵兴红2，张志海2，王俊丽2，卢永杰2，张建春1，3

(1.兰州大学药学院，兰州 730000；2.兰州军区联勤部药品仪器检验所，兰州 730050；3.解放军第一医院药剂科，兰州 730030)

目的评价国产葡萄糖酸钙口服溶液质量现状及存在的问题。方法按照2012年军队评价性抽验计划总体要求，依据《中华人民共和国药典》2010年版二部或2005年版二部对抽验的46批国产葡萄糖酸钙口服溶液进行全项检验，并对检验结果进行统计分析。结果 46批葡萄糖酸钙口服溶液样品质量均符合标准规定。结论目前国产葡萄糖酸钙口服溶液的生产工艺较稳定，质量总体较好，但质量标准仍需进一步充实和完善。

葡萄糖酸钙；口服溶液；评价抽验；质量评价

葡萄糖酸钙是常用的有机补钙剂之一，其原料药(无水物或一水合物)及相关制剂各国药典均有收载。2010年版《中华人民共和国药典》(以下简称《中国药典》)二部收载了葡萄糖酸钙一水合物原料药及其相关的7种制剂：葡萄糖酸钙口服溶液、葡萄糖酸钙片、葡萄糖酸钙含片、葡萄糖酸钙注射液、葡萄糖酸钙氯化钠注射液、葡萄糖酸钙颗粒、复方葡萄糖酸钙口服溶液等。葡萄糖酸钙口服溶液是我国特有品种，国外药典未见收载。《美国药典》(USP32-NF27)收载了葡萄糖酸钙注射液、葡萄糖酸钙片2种制剂；《英国药典》(BP2009)收载了葡萄糖酸钙注射液、注射用葡萄糖酸钙、葡萄糖酸钙片3种制剂；未能查询到《日本药局方》(JP15)收载的葡萄糖酸钙相关制剂。按照总后勤部卫生部的安排部署，葡萄糖酸钙口服溶液被列入2012年度全军药品质量评价性抽验计划。按国家食品药品监督管理总局(China Food and Drug Administration，CFDA)要求，评价性抽样工作除按法定标准进行常规的全检外，还需对检验结果进行统计分析。根据分析结果，结合文献，对检验中发现的问题有针对性地开展探索性研究工作，本品种主要对现行标准合理性[包括鉴别(1)项实验的改进、含量限度的表述方式、性状描述的改进]、液相色谱法进行含量测定及鉴别方法的建立、生产工艺的改进建议等几方面进行了探索性研究。

1 仪器与试药

1.1 仪器高效液相色谱(HPLC)仪：岛津LC-20A Prominence(2个LC-20AT泵、SIL-20A自动进样器、SPD-20A UV-VIS检测器、CTO-10AS vp柱温箱、FCV-11AL溶剂切换阀、DGU-20A3脱气单元)，LC Solution化学工作站(版本号1.22)；AE200型梅特勒电子分析天平(感量：万分之一)；XS205DU专业型电子分析天平(感量：十万分之一)；CHJ澄清度检查装置(沈阳市理化仪器厂，伞棚灯照度为1 000 lx)；梅特勒-托利多Delta 320型pH计。

1.2 试药葡萄糖酸钙对照品(中国食品药品检定研究院，批号：100082-199701，按C12H22CaO14·H2O计，含量为100.0%)；46批葡萄糖酸钙口服溶液均由兰州军区联勤部药品仪器检验所提供。

水为超纯水；成套缓冲剂pH4.7.9[标准号：Q/SOIE04·2003，批号：501110，爱建德固赛(上海)引发剂有限公司，25 ℃时pH4.003，pH6.864，pH9.182]、乙二胺四乙酸二钠、氢氧化钠、三氯化铁、盐酸、氨水、草酸铵、磷酸二氢钠、磷酸、钙紫红素、甲基红均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 法定检验方法参照各厂家执行的《中国药典》2010年版二部[1]或2005年版二部[2]进行法定检验。

2.2 探索性研究方法参照《中国药典》2010年版、《美国药典》USP32-NF27、《英国药典》BP2009、《日本药局方》JP15葡萄糖酸钙原料与制剂的标准及文献[3-5]开展探索性研究。

2.3 HPLC条件色谱柱：ZORBAX SB-Aq C18(150 mm×4.6 mm，5 μm)，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流动相：0.025 mol·L-1磷酸二氢钠(NaH2PO4)溶液；流速：1.0 mL·min-1；检测波长：210 nm；柱温：25 ℃；进样量：10 uL。

2.4 基本情况

2.4.1 药品剂型、规格与包装材料葡萄糖酸钙口服溶液规格为10%。其包装材料有药用口服液玻璃瓶、管制玻璃瓶、棕色玻璃瓶、聚氯乙烯/低密度聚乙烯口服液体药用复合硬片等。

2.4.2 药品生产企业与批准文号数在CFDA网站上查到葡萄糖酸钙口服溶液生产企业有28家，批准文号28个。此次抽取有效样品46批，涉及生产企业7家。

2.4.3 抽样情况葡萄糖酸钙口服溶液的抽样工作由总后勤部卫生部药品仪器检验所和各军区联勤部药品仪器检验所组织实施，被抽样单位涉及全军42家医疗机构、3家药材仓库(或供应站)。

本次抽样葡萄糖酸钙口服溶液涉及7家生产企业共计46批样品，占生产企业总数的25%；涉及的生产批准文号7个，占总生产批准文号数的25%；涉及葡萄糖酸钙口服溶液生产企业省份5个，占药品生产省份总数的31.25%。北京、上海、广东、广西、海南、新疆、江西、江苏、辽宁、山西和陕西等11个省、自治区和直辖市的生产企业样品没有涉及抽样。本次抽样基本涵盖了全军葡萄糖酸钙口服溶液的主要流通和使用单位，因此对所抽样葡萄糖酸钙口服溶液进行的全项检验和统计分析结果也能较好地反映目前军队使用葡萄糖酸钙口服溶液的质量现状。

2.4.4 抽样品种现行法定检验标准葡萄糖酸钙口服溶液现行法定检验标准为《中国药典》2010年版二部。

2.4.5 处方与生产工艺葡萄糖酸钙口服溶液(有糖型)的处方收载于《中国药典》2000年版二部：葡萄糖酸钙100 g、乳酸5 g、氢氧化钙0.5 g、蔗糖200 g、香精适量、水等，在《中国药典》2005年版、2010年版均未见收载。比较各厂家葡萄糖酸钙口服溶液的说明书发现，有糖型与无糖型的区别主要在于蔗糖被甜味剂代替，无糖型之间的区别主要在于所用甜味剂种类不同。生产工艺的研究主要见于文献报道[6-8]，内容重点涉及的是如何提高葡萄糖酸钙口服溶液的稳定性，因为葡萄糖酸钙口服溶液属葡萄糖酸钙过饱和溶液，很容易在制备及储藏过程中析出葡萄糖酸钙。

2.5 法定检验结果与分析对7家企业生产的44批葡萄糖酸钙口服溶液按现行《中国药典》2010年版二部进行了全项检验，结果全部符合规定。哈药集团三精制药有限公司生产的2批葡萄糖酸钙口服溶液，生产日期分别为2010年6月4日，2009年6月30日，对应的生产批号分别为10060443，09063023，按《中国药典》2005年版二部全项检验，结果均符合规定。整体检验合格率100%。

2.5.1 鉴别主要是针对葡萄糖酸根离子和钙离子鉴别。《中国药典》2010年版和《中国药典》2005年版二部的鉴别项目略有不同，2005年版二部多一项葡萄糖酸根离子的鉴别反应，系葡萄糖酸根离子与过量苯肼反应生成黄色的糖脎结晶，属于α-羟基醛(酮)的特有反应。《中国药典》2010年版二部取消了此项鉴别反应，只保留了葡萄糖酸根离子与Fe3+的反应，对于该鉴别反应的结果，将结合探索性研究进行讨论。钙盐鉴别反应的检验结果均符合规定。

2.5.2 pH 经过统计分析，本次抽样的46批样品pH测定结果分布在4.0～4.3之间，平均4.3(n=46)，见图1。且相同企业不同批次样品间pH差异<0.2。表明各厂家整体上对pH控制较好。

图1 46批葡萄糖酸钙口服溶液的pH测定结果分布图

2.5.3 装量经过检验，46批样品装量10.1～10.9 mL(图2)，平均10.52 mL(n=46)，基本呈正态分布。以46批样品装量数据RSD为指标进一步分析各企业生产工艺。据此计算出可信限为95%时，装量差异RSD为2.5%。46批测定数据中，RSD<2%占87.0%；RSD≥3%占0.0%。进一步分析发现，同一企业不同批次样品装量差异RSD较均一；不同企业样品装量RSD集中分布在2%～3%。说明大部分企业生产工艺较好，水平较稳定。

2.5.4 相对密度按照《中华人民共和国药典》规定，无糖型不需检验相对密度。46批样品中有4批为有糖型，分别来自4家不同生产企业，其相对密度检验结果均符合规定。4家企业样品相对密度RSD为0.8%，说明这4家企业生产工艺控制较稳定。

上述46批葡萄糖酸钙口服溶液的关键质量控制参数(pH、装量、鉴别)的分析结果表明，绝大多数样品差异属于生产、检验方法以及随机测定的正常波动，即本次抽样的企业均较严格地按照各自执行的质量标准对其产品进行了较好的控制。

图2 46批葡萄糖酸钙口服溶液装量测定结果分布图

2.6 探索性研究结果与分析在本次评价性抽验工作中，针对葡萄糖酸钙口服溶液及其质量标准的现状，开展了一系列探索性研究，以进一步评价各生产企业产品的质量。

2.6.1 采用HPLC法进行含量测定目前，葡萄糖酸钙含量测定的方法有乙二胺四乙酸(EDTA)络合滴定法[1]、原子吸收分光光度法[9-10]、电感耦合等离子体发射光谱法[11]、HPLC法[3-4]。其中，前3种方法是以钙离子为测定对象，HPLC法是以葡萄糖酸根离子为测定对象。《中国药典》2010年版二部中，葡萄糖酸钙口服溶液含量测定采用EDTA络合滴定法。根据各厂家药品说明书中的成分说明，葡萄糖酸钙口服溶液中加入了其他钙盐作为助溶剂或稳定剂，用EDTA络合滴定法测得的结果是总钙量，由总钙量推算得到的葡萄糖酸钙的量高于葡萄糖酸钙口服溶液中葡萄糖酸钙的真实含量。以《中国药典》2000年版二部所列处方量为例计算，0.50 g氢氧化钙中钙的质量为0.50 g×40.08÷74.09=0.27 g，相当于0.27 g÷40.08×448.40=3.02 g葡萄糖酸钙一水合物；处方中葡萄糖酸钙一水合物的实际量是100 g，采用EDTA络合滴定法测得的量是103.02 g，理论上存在约3%的误差。为了更准确地反映葡萄糖酸钙口服溶液含量的真实情况，此次评价性抽验中，在法定检验的基础上，还参照文献[3-4]采用HPLC法分析了产品的含量。通过统计分析对产品的质量与其处方及生产工艺的相关性进行重点评价。

对照品溶液的制备：取葡萄糖酸钙对照品312.6 mg，精密称定，加流动相溶解，制成0.01 mmol·mL-1葡萄糖酸钙(C12H22CaO14·H2O)溶液，即得。

供试品溶液的制备：精密量取葡萄糖酸钙口服溶液5 mL，置100 mL量瓶，加流动相稀释至刻度，摇匀，即得。

按“2.3”项下液相色谱条件测定46批样品的含量， 2批样品的HPLC含量测定结果低于标准下限9.00%(g·mL-1)。提示若采用HPLC测定含量，则有2批样品不符合规定，不合格率4.35%。进一步对46批样品HPLC含量测定结果与EDTA络合滴定法结果测定及二者差值比较分析，发现EDTA络合滴定法测定结果均较HPLC法测定结果偏高，表明虽然EDTA络合滴定法含量测定结果总体较好，全部合格，若采用HPLC法测定含量，整体结果低于EDTA络合滴定法测定值，且出现不合格样品。可见在EDTA络合滴定法测定中，因为将其他钙盐中所含钙离子也换算为葡萄糖酸钙计入整体含量而使结果虚高，HPLC法较EDTA络合滴定法专属性更高，更准确。典型HPLC色谱图见图3。

2.6.2 葡萄糖酸钙鉴别(1)项实验的改进《中国药典》2010年版二部中，葡萄糖酸钙鉴别中(1)项实验为：取本品约0.1 g，加水5 mL溶解后，加三氯化铁试液1滴，显深黄色。葡萄糖酸钙口服溶液鉴别项下规定按照葡萄糖酸钙项下的鉴别(1)项实验，应显相同的反应。但在实际检验中发现，鉴别(1)项实验结果都显淡黄色；增加三氯化铁试液加入量，溶液黄色不断加深，待加至8或9滴时，溶液方显深黄色。

葡萄糖酸钙与三氯化铁作用，生成黄色的碱式葡萄糖酸铁[12]：

3C12H22CaO14·H2O+2FeCl3·6H2O⟺(C12H22CaO14)3Fe2+3CaCl2+15H2O

葡萄糖酸钙(一水合物)C12H22CaO14·H2O的相对分子质量为448.40，三氯化铁(六水合物)FeCl3·6H2O的相对分子质量为270.30，根据上述化学反应式计算，对应于葡萄糖酸钙C12H22CaO14·H2O0.1g，需三氯化铁(六水合物)FeCl3·6H2O0.04g才能反应完全。三氯化铁试液的浓度为9%(g·mL-1)，三氯化铁0.04g相当于三氯化铁试液0.45mL，以1.0mL水为20滴进行换算[13]，即需三氯化铁试液9滴才能与葡萄糖酸钙0.1g反应完全。

A.阴性溶液；B.对照品溶液；C.供试品溶液；1.葡萄糖酸钙

从以上可以看出，葡萄糖酸钙鉴别(1)项实验中三氯化铁试液的加入量明显不够，影响了该项实验结果的判断。故该项实验应改为：取本品约0.1 g，加水5 mL溶解后，加三氯化铁试液5～9滴，显深黄色(深于同体积三氯化铁试液的颜色)。具体到葡萄糖酸钙口服溶液，则改为：取本品1 mL，加三氯化铁试液8或9滴，显深黄色(深于同体积三氯化铁试液的颜色)。如果少于8滴或多于9滴变色，在保证三氯化铁试液配制浓度准确的前提下，有可能是葡萄糖酸钙口服溶液的浓度处于标准规定的限度之外，在含量测定时需引起注意。

用改进后的方法进行鉴别，溶液都显深黄色，结果全部符合规定。用改进前的方法进行鉴别，虽严格按《中国药典》操作，但溶液都只显浅黄色，结果不易判定。

2.6.3 含量限度的表述方式《中国药典》2010年版二部中葡萄糖酸钙口服溶液含量限度的表述为“本品含葡萄糖酸钙(C12H22CaO14·H2O)应为9.00%～10.50%(g·mL-1)”。这种表述方式值得商榷，这种表述方式并不能准确、真实的反映葡萄糖酸钙口服溶液中葡萄糖酸钙的真实含量。葡萄糖酸钙口服溶液系葡萄糖酸钙的过饱和溶液，为了提高溶液在制备及储存过程中的稳定性，防止葡萄糖酸钙结晶析出，一般在制备过程中添加其它钙盐作为稳定剂或助溶剂。由“2.6.1”项可知，此推算出来的葡萄糖酸钙的量要高于其真实含量。所以，提出以下建议：①既然采用EDTA络合滴定法测得的是总钙量，那么采用总钙量表达含量的表述方式能更准确、真实的反映药品的含钙量；②或采用其他含量测定方法，如HPLC法，通过测定有机酸根离子来准确测定葡萄糖酸钙的含量；③或者参考《中国药典》2010年版二部中葡萄糖酸钙注射液项下的说明方式“本品中需添加钙盐或其他适宜的稳定剂，但加入的钙盐按钙(Ca)计算，不得超过葡萄糖酸钙中含有钙量的5.0%”，对葡萄糖酸钙口服溶液中添加的钙盐的量加以限定，使得质量标准本身更加严谨。

2.6.4 HPLC法鉴别及其他鉴别反应的讨论历版《中国药典》中对葡萄糖酸根离子的鉴别涉及到的方法有：①与三氯化铁试液的反应；②与苯肼的反应。《中国药典》2010年版中，不管是葡萄糖酸钙原料药还是制剂，都取消了与苯肼反应的鉴别项目，只保留了与三氯化铁试液反应的鉴别项目，另外，葡萄糖酸钙原料药还采用了薄层色谱鉴别法。但是其他含有葡萄糖酸根离子的品种如葡萄糖酸亚铁、葡萄糖酸锌等仍保留了与苯肼反应的鉴别项。葡萄糖酸根离子与过量苯肼反应生成黄色的糖脎结晶，属于α-羟基醛(酮)的特有反应。

国外药典如《美国药典》USP32-NF27、《英国药典》BP2009、《日本药局方》JP15，对于葡萄糖酸钙不管是原料药还是制剂，主要采用的是薄层色谱鉴别法。《英国药典》BP2009在葡萄糖酸钙片的鉴别中未采用薄层色谱法，而是采用了与苯肼反应和三氯化铁试液反应来鉴别葡萄糖酸根离子。

按“2.3”项下液相色谱条件测定46批样品含量的同时，用液相色谱对葡萄糖酸根离子进行鉴别，专属性更强，其典型HPLC色谱图见图3。

2.6.5 性状描述的改进建议《中国药典》2010年版、《中国药典》2005年版二部葡萄糖酸钙口服溶液[性状]规定为“本品为无色至淡黄色液体或粘稠液体，气芳香，味甜”。实际生产中，葡萄糖酸钙口服溶液有两种类型：“无糖型”和“有糖型”，依照《中华人民共务药典》规定，经检验，有糖型符合“味甜”的规定，无糖型虽含有甜味剂，但口感并非“味甜”，而是“味酸”，建议国家药典委员会对此进行修订，按“无糖型”和“有糖型”分别规定其性状。使性状描述能更准确反映其真实情况。

2.6.6 葡萄糖酸钙口服溶液生产工艺的改进建议在检验中发现，含糖型葡萄糖酸钙口服溶液的玻璃瓶壁上普遍附着有葡萄糖酸钙的结晶，溶液中也有少量细小颗粒状漂浮物，因微生物限度检查均符合规定，所以排除微生物污染的可能。极有可能是在储藏运输过程中发生了葡萄糖酸钙析出，提示相关生产厂家目前还未能完全解决好葡萄糖酸钙过饱和溶液的稳定性问题，还需改进含糖型葡萄糖酸钙口服溶液的生产工艺，以提高产品的稳定性。无糖型葡萄糖酸钙口服溶液未发现有葡萄糖酸钙析出现象。

3 讨论

葡萄糖酸钙口服溶液系我国特有品种，是临床应用过程中安全性较高的品种，是生产工艺较成熟的制剂品种。综合法定检验和探索性研究结果发现，从葡萄糖酸钙口服溶液检验标准到质量现状，存在一些问题，如鉴别(1)项实验不够严谨，性状描述不充分，导致检验结果不易判定；现行标准采用含量测定方法并不能准确反映药品成分真实含量；生产工艺并没有完全解决好葡萄糖酸钙过饱和溶液稳定性等问题。建议尽快提高、改进现行检验质量标准；生产企业改进制剂生产工艺，提高产品质量；监管部门进一步加强对葡萄糖酸钙制剂的监管。

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