急性子提取物抗炎镇痛作用的实验研究*

丁玉峰，胡敦梅，彭金兰，李琼阁，闫兴津，杜光，曾凡波

(1.华中科技大学同济医学院附属同济医院药学部，武汉 430030；2.华中科技大学同济医学院附属普爱医院内科，武汉 430034；3.华中科技大学同济医学院药学院，武汉 430030)

急性子提取物抗炎镇痛作用的实验研究*

丁玉峰1，胡敦梅1，彭金兰2，李琼阁1，闫兴津3，杜光1，曾凡波3

(1.华中科技大学同济医学院附属同济医院药学部，武汉 430030；2.华中科技大学同济医学院附属普爱医院内科，武汉 430034；3.华中科技大学同济医学院药学院，武汉 430030)

目的 探讨中药急性子的抗炎镇痛效果，为临床合理应用提供理论依据。方法 采用二甲苯致小鼠耳肿胀、冰醋酸致小鼠扭体反应、小鼠热板法、蛋清致大鼠足肿胀和肉芽肿实验观察急性子提取物的抗炎镇痛效果。结果 与模型对照组比较，急性子水提物中、大剂量组小鼠扭体次数明显减少(P<0.05)，急性子水提物中、大剂量组大鼠足肿胀减轻。中、大剂量急性子水提物对小鼠耳肿胀无效，其中大剂量可延长60 min(P<0.01)和90 min(P<0.05)小鼠疼痛阈值；急性子醇提取物大剂量可显著减少小鼠扭体次数(P<0.01)，减轻小鼠耳肿胀程度(P<0.05)，明显延长30 min疼痛阈值(P<0.01)，减轻大鼠肿胀程度；急性子醇提物大剂量可延长60 min疼痛阈值(P<0.01)。急性子提取物对大鼠肉芽肿无抑制作用。结论 急性子提取物有一定的镇痛效果和抑制急性炎症作用。

急性子提取物；抗炎；镇痛

急性子为凤仙花科植物凤仙花的种子，《本经逢原》《医林纂要》《本草再新》等记载其有软坚消肿、治外疡、败火毒等功效。现代研究表明，急性子提取物有一定的抗氧化、抗生育、抗肿瘤等作用。急性子化学成分主要包括脂肪油、黄酮类、萘醌类、皂苷类、挥发油和多肽及蛋白质类等，这些化合物具有一些药理功效[1]。近年来研究发现，急性子含有抑制细菌生长、但对培养的人体细胞无毒性作用的多肽[2]。凤仙花提取物具有拮抗组胺H1受体作用，其地上部分具有抗炎、抗风湿、治疗瘙痒等作用[3]。笔者在目前已发现的治疗作用基础上进行相关研究，探讨急性子抗炎镇痛功效。

1 材料与方法

1.1 动物 昆明种小鼠，清洁级，体质量(20±2) g，雌雄兼用；斯泼累格·多雷(Sprague Dawley,SD)大鼠，清洁级，体质量(180±20) g，雌雄各半。均由华中科技大学同济医学院实验动物中心提供，动物实验许可证编号：SCXK(鄂)2010-0009。饲养条件：温度(25±2) ℃，相对湿度75%，光照、黑暗各12 h，普通饲料喂养。

1.2 仪器 电热恒温水浴箱(北京市医疗设备厂，型号：GSY3-Ⅱ)，高速粉碎机(郑州科丰仪器设备有限公司，型号：FW100)，电子天平(OHAUS公司，型号：AR2140)，游标卡尺(中国上海工量具有限公司，型号：O-300)，电热恒温鼓风干燥箱(上海精宏实验设备有限公司，型号：DHG-9123A)，手提式压力蒸汽灭菌器(浙江新丰医疗器械有限公司，型号：XFS-280CB)。

1.3 药物 急性子[武汉神草中药饮片有限责任公司，批号：080424-5，经华中科技大学同济医学院药学院张长弓教授鉴定为凤仙花科凤仙花属植物凤仙花(ImpatiensbalsaminaL.)的干燥成熟种子]，阿司匹林片(神威药业有限公司，批号：1003171，规格：0.3 g)，蛋清(新鲜鸡蛋去壳，取蛋清直接使用)，脱脂棉(河南飘安集团有限公司)，试剂均为分析纯。

1.4 急性子提取物的制备 根据急性子所含主要化学成分及其有关研究报道，选择将其分别进行醇提和水提。先将药材适度粉碎，干燥灭活，置于4 ℃冰箱待用。水提：取药材粉末，加入石油醚脱脂，过滤石油醚(沸程60～90 ℃)并将药材中的石油醚挥净，加入纯化水沸提，合并药液，挥干得干浸膏(收率10%)，备用。醇提：取药材粉末，加入固定比例的乙醇沸提，合并提取液，回收溶剂，得干浸膏(收率9.5%)，备用。

1.5 急性子提取物镇痛作用研究

1.5.1 小鼠醋酸扭体法 取小鼠80只，雌雄兼用，按体质量随机分为8组，每组10只，随机分为空白对照组(纯化水)、阳性组(阿司匹林200 mg·kg-1)，醇提物和水提物各小、中、大剂量组(即分别相当于生药材3，6，9 g·kg-1)。均灌胃给药，连续给药3 d，于末次给药30 min后，腹腔注射0.6%醋酸，10 mL·kg-1，观察小鼠15 min内扭体次数及出现扭体反应的时间[4-5]。

1.5.2 小鼠热板法 调节恒温水浴箱，使温度保持(55±1) ℃，预热30 min。取体质量(20±2) g雌性小鼠80只，按体质量随机分为8组，每组10只，即空白对照组(纯化水)、阳性组(阿司匹林200 mg·kg-1)，醇提物和水提物各小、中、大剂量组(即分别相当于生药材3，6，12 g·kg-1)。均灌胃给药，连续给药3 d，末次给药后30，60，90 min记录小鼠在热板上出现舔足所用时间(s)，作为该鼠的痛阈值。如果痛阈值超过60 s或小鼠跳出，即停止测试而将此时终止时间作为小鼠痛阈值[4-5]。

1.6 急性子提取物抗炎作用研究

1.6.1 蛋清致大鼠足跖肿 取SD大鼠50只，按体质量随机分为8组：空白对照组8只；阳性组，醇提物和水提物各3个剂量组(给药剂量依“1.5.2”项小鼠种属换算)，每组6只。连续给药5 d，最后一次给药1.5 h后，于大鼠右后足掌腱膜下注入10%新鲜蛋清溶液0.1 mL致炎。测定致炎前及致炎后0.5，1，2，4，6 h右后足跖厚度，以致炎前后足跖厚度差作为肿胀度(致炎后足跖厚度-致炎前足跖厚度)[4-5]。

1.6.2 二甲苯致小鼠耳肿胀 取雄性小鼠80只，分组、给药剂量同“1.5.2”项，连续给药3 d，末次给药后30 min以二甲苯0.05 mL均匀涂于左耳两面，右耳作为参照。1 h后处死小鼠，沿耳廓线取两耳，对齐后用直径8 mm打孔器在同一部位分别打下耳片，称质量以左右耳质量差表示肿胀度[4-5]。

1.6.3 大鼠棉球肉芽肿实验 取SD大鼠50只，分组及给药剂量同“1.6.1”项。棉球(20±1) mg，高压灭菌，60 ℃烘干。在水合氯醛麻醉下无菌操作，于两腋下切口，两侧腋窝部皮下各植入两个灭菌棉球，缝合皮肤。给药方法：术后第二天给药，每天一次，连续7 d。第8天处死大鼠，取出棉球，60 ℃烘干至恒重。肉芽肿质量=术后棉球质量-术前棉球质量、抑制率(%)=(空白对照组肉芽肿平均质量-给药组肉芽肿平均质量)/空白对照组肉芽肿平均质量×100%[4-5]。

2 结果

2.1 急性子提取物镇痛作用

2.1.1 小鼠醋酸扭体实验 见表1。与空白对照组比较，水提物和醇提物中、高剂量组小鼠15 min内扭体次数均明显减少，且差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。与空白对照组比较，阳性组潜伏时间明显延长，且差异有统计学意义(P<0.01)。水提物各剂量组镇痛率与给药剂量有一定量效关系趋势。

2.1.2 小鼠热板实验 见表2。30 min时，与空白对照组比较，阳性组和醇提物中、大剂量组舔足时间均明显延长，且差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01)，醇提物中、大剂量组延长更明显(P<0.01)。60 min时，与空白对照组比较，水提物大剂量组和醇提物大剂量组舔足时间明显延长，差异有统计学意义(P<0.01)。90 min时，与空白对照组比较，阳性组和水提物大剂量组舔足时间明显延长，差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。

2.2 急性子提取物抗炎作用

2.2.1 蛋清致大鼠足跖肿 见表3。0.5 h时，与空白对照组比较，水提物和醇提物大剂量组大鼠足肿胀度减轻，差异有统计学意义(P<0.05)。1和2 h时，与空白对照组比较，水提物和醇提物中、大剂量组大鼠足肿胀度减轻，差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。

表1 8组小鼠扭体反应测定结果

与空白对照组比较，*1P<0.01，*2P<0.05

Compared with blank control group，*1P<0.01，*2P<0.05

4 h时，与空白对照组比较，水提物中剂量组和醇提物中、大剂量组大鼠足肿胀度减轻，差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。

2.2.2 二甲苯致小鼠耳肿胀 见表4。与空白对照组比较，阳性组和醇提物中、大剂量组小鼠耳肿胀度明显减轻，差异有统计学意义(P<0.05)。

2.2.3 大鼠棉球肉芽肿实验 见表5。由于小剂量组未造模成功，故表5中只有中、大剂量组数据。与空白对照组比较，水提物、醇提物组对肉芽肿抑制率差异无统计学意义。

3 讨论

从本实验结果可知，急性子提取物有一定镇痛效果。在醋酸扭体法实验中，与空白对照组比较，中、大剂量醇提物和水提物可明显减少扭体次数，且醇提物效果更好，差异有统计学意义。与阳性对照组比较，提取物组间潜伏时间差异无统计学意义，阳性药可明显延长疼痛发作潜伏时间。在热板实验中，30 min时，醇提物中、大剂量显示出一定镇痛作用；60 min时，大剂量水提物和醇提物有一定镇痛作用；90 min时，只有水提物有抑制小鼠热致痛的作用。由此推断，急性子醇提物和水提物中均含有镇痛物质。在两次镇痛实验中，醇提物中剂量组均表现一定程度镇痛效果，提示可能醇提对急性子镇痛物质的提取更完全。根据热板法实验结果，推测水提物镇痛成分可能较醇提物起效慢，或者水提物中镇痛成分含量稍低，或者镇痛效果稍弱。

表2 8组小鼠热板法试验结果

与空白对照组比较，*1P<0.05，*2P<0.01

Compared with blank control group，*1P<0.05，*2P<0.01

表3 急性子提取物对蛋清致大鼠足肿胀的影响

与空白对照组比较，*1P<0.05，*2P<0.01

Compared with blank control group，*1P<0.05，*2P<0.01

表4 8组小鼠耳肿胀实验结果

与空白对照组比较，*1P<0.05

Compared with blank control group，*1P<0.05

表5 6组大鼠肉芽肿实验结果

与空白对照组比较，*1P<0.05

Compared with blank control group，*1P<0.05

在耳肿胀实验中，与空白对照组比较，中、大剂量醇提物对小鼠耳肿胀的抑制作用差异有统计学意义。足肿胀实验中，0.5 h时，只有水提物和醇提物大剂量组显示一定的抑制炎症作用；1～2 h时，除水提物小剂量组，其他组与对照组比较均有抑制大鼠足肿胀的作用；4 h时，水提物大剂量组和醇提物中、大剂量组与对照组比较，有一定的抑制肿胀的效果。肉芽肿实验中，急性子提取物未表现出明显抑制肉芽生长作用。根据以上结果，推测急性子提取物含有一定量抑制急性炎症物质，对慢性炎症治疗效果还需进一步确证。醇提物与水提物相比较，其提取物的抑制急性炎症效果更明显，即在低剂量组也表现出一定的抑制炎症作用[6-7]。

目前对于凤仙花的花等部位研究较多，但是对于急性子研究还不足。本研究发现急性子也具有一定的抗炎镇痛作用，但其抗炎镇痛作用的物质是否与凤仙花植物相同，以及两者间存在的差异，有待进一步研究。

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DOI 10.3870/yydb.2015.03.004

Experimental Studies on Anti-inflammatory and Analgesic Effects of Extracts ofGardenBalsamSeeds

DING Yufeng1， HU Dunmei1， PENG Jinlan2,LI Qiongge1， YAN Xingjin3， DU Guang1， ZENG Fanbo3

(1.DepartmentofPharmacy，TongjiHospital,TongjiMedicalCollege，HuazhongUniversityofScienceandTechnology，Wuhan430030，China; 2.DepartmentofEndocrinology，Pu'aiHospitalAffiliatedwithTongjiMedicalCollege，HuazhongUniversityofScienceandTechnology，Wuhan430034，China; 3.SchoolofPharmacy,TongjiMedicalCollege,HuazhongUniversityofScienceandTechnology，Wuhan430030，China)

Objective To investigate the anti-inflammatory and analgesic effects of extracts fromGardenBalsamseeds in order to provide theoretical basis for rational clinical application. Methods The mouse ear swelling induced by xylene, the body torsion induced by acetic acid or hot plate method, the rat foot swelling induced by egg white and granuloma model were set up to study anti-inflammatory and analgesic effects of extracts fromGardenBalsamseeds. Results The water extracts at the middle and high doses reduced the body torsion counts of mice (P<0.05), alleviated the rat toe swelling, but did not affect mice ear swelling.The extracts at the high dose prolonged pain threshold at 60 min (P<0.01) and 90 min (P<0.05); the alcohol extracts at the middle and high doses significantly lowered body twisting counts (P<0.01), attenuated the ear swelling of mice (P<0.05), remarkably prolonged the pain threshold (P<0.01)at 30 min, weakened the rat foot swelling, and elevated 60 min pain threshold at the high doses (P<0.01), but the extracts exerted no effects on the rats granuloma. Conclusion The extracts fromGardenBalsamseeds have anti-inflammatory and analgesic effects.

Extracts ofGardenBalsamseeds; Anti-inflammatory; Analgesia

2014-04-27

2014-06-20

*湖北省自然科学基金资助项目(2013CFB162)

丁玉峰(1966-)，男，湖北麻城人，主任药师，硕士生导师，研究方向：药物新制剂研究、临床药学。电话：027-83663519，E-mail:yfding@tjh.tjmu.edu.cn。

彭金兰(1964-)，女，湖北麻城人，副主任医师，学士，主要从事内分泌临床工作。电话：027-68831680，E-mail：jlpeng64@163.com。

R286；R965

A

1004-0781(2015)03-0298-05