心脏移植排斥反应患者血清IL－6检测的意义

王 平，涂同涛，臧思思，丁 宁，孙 余，杨 露，胡丽华＊

（1.华中科技大学同济医学院附属协和医院检验科，湖北武汉430022；2.华中科技大学同济医学院附属同济医院输血科）

心脏移植排斥反应患者血清IL－6检测的意义

王 平1，涂同涛2，臧思思1，丁 宁1，孙 余1，杨 露1，胡丽华1＊

（1.华中科技大学同济医学院附属协和医院检验科，湖北武汉430022；2.华中科技大学同济医学院附属同济医院输血科）

目的研究心脏移植术后患者血清中IL－6的变化及其在疾病发展过程中的意义。方法 分别在移植前及术后第1、3、7、14、30天抽取患者静脉血，采用双抗体夹心ELISA法检测血清中IL－6浓度，并监测患者血清中FK506药物浓度。结果 心脏移植患者血清中IL－6在术前与健康对照组人群无显著性差异（P＞0.05），并在术后第一天明显升高（P＜0.05），并于第3天开始降低，在术后第7天基本回复术前水平；移植急性排斥组患者血清中IL－6浓度显著高于术前水平，在未发生排斥反应时，移植稳定组患者血清中IL－6与术前无明显差异；移植急性排斥反应患者血清中FK506浓度与IL－6浓度呈现显著地负相关性（P＜0.05）。结论 IL－6在移植急性排斥反应病情的发展中起着重要作用，监测受者血清中IL－6水平可预测急性排斥反应发生的风险。

心脏移植；白细胞介素－6；FK506

（Chin J Lab Diagn，2015，19：1673）

近年来，心脏移植已经成为心脏功能衰竭终末期最为重要的治疗手段，但是移植术后最常发生的免疫排斥反应仍然是影响患者生存及移植物存活的重要因素。如何早期诊断排斥反应，是临床医生面临的重要问题。到目前为止，心肌内膜活检（EMB）仍是心脏移植排斥反应诊断的金标准。但是，进行EMB是一种创伤性的检查方法，不能及时、全面地诊断是否发生排斥反应。因此寻找无创、简便、快捷、全面、可靠、为临床提供可靠的动态连续观测指标的方法具有重要意义。在本研究中，我们通过检测心脏移植患者血清中IL－6在手术前后的变化，来评估其在移植排斥反应的发展及预后中的意义。

1 材料和方法

1.1 研究对象

心脏移植组为本院2014年10月－2015年3月接受异体心脏移植患者36例，男25例，女11例；年龄22－70岁，平均43岁；排除再次移植及术后1个月内发生明显病毒、细菌等病原体感染者（PCT、CRP、WBC等指标正常）。选取年龄、性别与患者相匹配的健康对照者36例，男24例，女12例；22－60岁，平均40岁，均来自健康查体者，各项检查指标均正常。所有患者接受同种异体心脏移植术后第一天开始使用他克莫司（FK506）、马替麦考酚酯（MMF）和皮质激素三联免疫抑制方案。根据患者术后是否出现不明原因的低热、乏力、食欲不振、关节痛、早搏、期前收缩等症状，将患者分为移植稳定组（29例）和移植急性排斥反应组（7例），其中移植急性排斥反应组病例均经心肌内膜活检符合心脏移植排斥病理表现；两组患者在年龄、性别比、原发疾病、冷热缺血时间、免疫抑制方案等方面均无统计学差异。

1.2 试剂与仪器

EXL800酶标仪（美国Bil－Tek公司生产），人IL－6ELISA试剂盒（深圳欣博盛生物科技有限公司），全自动免疫化学分析仪（美国雅培ARCHITECTi1600SR）。

1.3 方法

分别收集患者术前及术后第1、3、7、14、30天EDTA抗凝血2ml和无抗凝剂血3ml，分离后放置于－80℃冻结保存。采用酶联免疫法（ELISA）测定IL－6，按试剂盒说明书进行操作。采用高相液相色谱－质谱法监测血清Fk506浓度。

1.4 统计方法

实验数据用SPSS 18.0软件进行分析，结果采用均数±标准差（x—±s）表示，组间整体分布比较采用秩和非参数检验，两变量间相关性分析采用Spearman秩相关检验，以双侧检验P＜0.05为有统计学意义。

2 结果

2.1 心脏移植受者手术前后血清IL－6水平的变化

心脏移植患者术前与健康对照组血清中IL－6水平无显著性差异（P＞0.05）；与术前比较，心脏移植术后第1天患者血清中IL－6水平显著升高（z＝－4.16，P＜0.05），术后第3天患者血清中IL－6低于术前水平（z＝2.816，P＜0.05），术后第7天基本回复至术前水平。见表1。

表1 心脏移植患者手术前后IL－6的动态变化

表1 心脏移植患者手术前后IL－6的动态变化

与术前比较＊P＞0.05，＊＊P＜0.05

（健康对照组）术前术后1天术后3天术后7天术后14天术后30天IL－6（pg／ml）9.22±1.79 8.91±1.44 25.95±20.97＊＊6.08±2.72＊＊8.24±4.29＊8.87±4.15＊8.55±3.34＊

2.2 移植急性排斥组发生排斥反应时IL－6水平比较

移植排斥组患者发生排斥反应时，血清中IL－6水平明显高于移植稳定组（z＝－3.084，P＜0.05）及术前（z＝－3.0，P＜0.05）。见表2。

2.3 心脏移植患者术后FK506药物水平与IL－6相关性分析

我们检测术后患者血清中药物浓度，并将FK506水平与血清中IL－6水平进行相关性分析，发现患者血清中FK506浓度与IL－6水平呈明显的负相关（r＝－0.66，P＜0.05），见图1。

表2 移植排斥组IL－6的变化

图1 FK506与IL－6的相关性分析

3 讨论

IL－6作为一种多功能的前炎症细胞因子，具有广泛的生物学功能，在机体的免疫调节、炎症反应、造血调控等过程中均发挥重要作用，能刺激多种细胞生长、促进细胞分化和Ig分泌、加速干细胞急性期蛋白合成等［1］。其过度表达与心脏移植急性排斥反应的发生和发展密切相关［2－5］，进一步研究IL－6的生物学效应，可能对心脏移植急性排斥反应的早期诊治提供更广阔的空间。

本研究结果显示：心脏移植患者血清IL－6水平在术后第1天显著升高，随后由于免疫抑制剂的大剂量使用，受者的免疫系统被抑制，术后第3天血清中IL－6水平明显低于术前水平（P＜0.05），之后IL－6逐渐回复术前水平并基本稳定。而急性移植排斥反应组患者血清中IL－6水平明显高于术前及移植稳定组，这与文献报道相符合［2，6，7］，提示IL－6在心脏移植急性排斥反应的发生和发展中发挥重要的作用。

实验中我们还发现：当心脏移植患者血清中FK506血药浓度降低时，药物对机体免疫功能的抑制强度减弱，血清中IL－6水平会逐步升高，患者发生排斥反应的风险会增大；随着血清药物浓度的提高，IL－6水平会相应降低，病人急性排斥反应的临床症状也会缓解。已有动物实验证实通过给心脏移植后的小鼠输注IL－6mAb中和体内IL－6，结果显示可显著抑制小鼠急性排斥反应的发生，移植物存活时间明显延长；组织病理学结果显示抗IL－6mAb输注可减轻抑制物结构的破坏，移植物中浸润的淋巴细胞明显减少［8，9］。因此，监测同种异体心脏移植受者血清中IL－6水平可预测急性排斥反应发生的风险，抑制受者体内的IL－6的表达可能是一种有效的治疗移植排斥反应的措施。

虽然大量动物研究表明IL－6在心脏移植排斥反应的诊治中发挥重要作用，但在临床研究中却很少见，接下来，我们将收集大量的临床病例，进一步研究IL－6在心脏移植排斥中的作用机理，为临床上预防心脏移植急性排斥反应的发生和治疗提供有效的依据。

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Significance and serum levels of Interleukin－6in patients with acute rejection of heart transplantation

WANG Ping，TU Tong－tao，ZANG Si－si，et al.
（Department of Clinical Laboratory，Union Hospital，Tongji Medical college，Huazhong University of Science and Technology，Wuhan 430022，China）

ObjectiveTo study the change and clinical significance of serum IL－6in patients with heart transplantation.Methods Serum IL－6was detected before and post transplantation on day 1，3，7，14，30with ELISA.The level of Serum FK506was measured on and off.Results There were no significant difference existed in the levels of serum IL－6in pre－transplantation patients compared to those of control group respectively（p＞0.05）.After operation，the levels of serum IL－6on day 1in patients were significantly higher，and dropper to the nadir on day 3，then rose to pre－operative values on day 7.These results indicated that the level of FK506was negatively correlated with the level of serum IL－6.Conclusion IL－6may play an important role in the development of post－transplanted rejection of patients，and could be an useful markers to monitor the level of immunosuppressant after cardiac transplantation.

heart transplantation；IL－6；FK506

R654.2

A

2014－09－22）

1007－4287（2015）10－1673－03

湖北省卫生厅采供血管理资助项目（CGX2012－3）

＊通讯作者