螺内酯对心梗后心衰大鼠血流动力学及甲状腺素水平的影响

魏 群，何 峰，李焕明

（天津医科大学第四中心临床学院，天津300140）

螺内酯对心梗后心衰大鼠血流动力学及甲状腺素水平的影响

魏 群，何 峰，李焕明＊

（天津医科大学第四中心临床学院，天津300140）

心衰终末阶段常伴低T3综合征，血清T3低下程度与心衰的严重性相关［1］，T3成为预示心衰病人死亡的风险及判断预后的又一新指标［2］。甲状腺激素受体（thyroid hormone receptors，TRs）属于类固醇类核受体超家族，主要与T3结合，称核T3受体。核T3受体分为：TRα及TRβ，心脏以表达TRα1为主［3，4］，TRα2是无配体结合的负性调控受体。心衰后肾素－血管紧张素－醛固酮系统（renin－angiotensinaldosterone system，RASS）激活，醛固酮（Ald）分泌明显增多，螺内酯是Ald受体拮抗剂，本研究通过建立急性心肌梗死（AMI）后心衰大鼠模型，观察螺内酯对血流动力学、甲状腺素水平、非梗死区心肌TRα1及TRα2表达影响。

1 材料与方法

1.1 动物 Wistar大鼠，65只，体重180－200g，雌性，由吉林大学实验动物中心提供。

1.2 药品和试剂 螺内酯由杭州民生药业提供，批号：T14H12，溶于0.5%羧甲基纤维素钠（CMC）中；甲状腺素水平测定试剂盒均由南京建成提供。

1.3 动物模型 大鼠心梗后心衰模型制备方法参照文献［5］，整个过程无菌操作，模型组（51只）于左冠状动脉前降支，假手术组（14只）仅穿线不结扎。术后常规给予腹腔注射青霉素20万U／kg抗炎7天。冠脉结扎术后48小时死亡12只大鼠，一周内死亡3只大鼠。从术后第二周至实验结束无大鼠死亡。假手术组2只大鼠死于麻醉意外。

1.4 分组及给药 将4周后存活的48只Wistar大鼠随机分为假手术组、模型组、螺内酯小剂量组（4 mg／kg group）、螺内酯大剂量组（12mg／kg group），每组12只。假手术组及模型组均灌胃给予0.5%CMC。各组分别于术后第7周开始给药，连续给药4周，每日一次，灌胃容积均为10ml／kg。

1.5 指标测定 血流动力学参数测定方法参照文献［6］：各组分别于术后4周末、6周末、8周末及10周末，测量LVSP、LVEDP、±dp／dtmax指标；血流动力学参数测定后，腹主动脉取血2ml，离心10 min，取血清，置于－70℃，ELISA法检测血清FT3、FT4、TSH水平；取非梗死区心肌组织置于－70℃，待提取RNA，RT－PCR法检测非梗死区心肌组织TRα1及TRα2mRNA的表达。

1.6 mRNA表达水平的测定 提取总RNA及逆转录反应：取50mg心肌标本，加入0.5ml Trizol，经氯仿，异丙醇提取总RNA。紫外分光光度计分析RNA的量和纯度。取2μg总RNA逆转录合成cDNA，－20℃保存。所有引物均由上海生物工程技术有限公司合成，引物具体序列及PCR扩增反应条件参考文献［7］。取5μl PCR反应产物进行1.5%琼脂糖电泳，光密度扫描后图片经Image J软件分析。

1.7 统计学方法 实验数据以x—±s表示，采用SPSS11.0软件进行t检验。应用one－way ANO－VA方差分析，多组间的相关性比较采用t检验，多组间的两两比较采用费希尔LSD法。

2 结果

2.1 螺内酯对心衰大鼠血流动力学的影响 与假手术组比较，模型组分别于4周、6周、8周及12周LVSP、±dp／dtmax均明显下降（P＜0.05～0.01），而LVEDP则明显增加（P＜0.01），表明大鼠急性心肌梗死后心衰时血流动力学明显异常。与模型组比较，螺内酯小剂量及大剂量组均能明显升高LVSP、＋dp／dtmax及－dp／dtmax，降低LVEDP（P＜0.05～0.01）。螺内酯小剂量组与大剂量组之间比较，无明显差异。结果表明螺内酯能明显改善心肌梗死后心衰大鼠血流动力学状况。见表1。

表1 螺内酯对心梗后心衰大鼠血流动力学的影响

表1 螺内酯对心梗后心衰大鼠血流动力学的影响

与假手术组比较△P＜0.05，△△P＜0.01；与模型组比较＊P＜0.05，＊＊P＜0.01；

项目组别n 4周6周8周12周LVSP假手术组3 254±9.0 247±6.9 246±7.3 251±4.3（mmHg）模型组3 189±6.3△175±4.3△167±5.2△164±3.2△△螺内酯小剂量组3 201±21.5＊211±27.9＊ 223±23.6＊＊230±25.1＊＊螺内酯大剂量组3 207±34.5＊211±24.1＊228±45.3＊245±44.1＊＊LVEDP假手术组3 34±5.7 35±2.5 33±4.1 33±5.8（mmHg）模型组3 67±7.3△△ 69±8.9△△ 72±10.1△△75±9.8△△螺内酯小剂量组3 65±5.1＊62±2.1＊60±8.1＊59±8.3＊螺内酯大剂量组3 62±9.4＊61±4.8＊57±8.3＊56±4.1＊＋dp／dtmax假手术组3 5330±667 5327±528 5311±446 5319±834（mmHg）模型组3 3448±691△△3318±446△△3078±771△△2981±852△△螺内酯小剂量组3 4001±540＊3991±720＊3906±553＊3610±512＊螺内酯大剂量组3 4569±949＊4529±424＊4623±635＊4521±402＊－dp／dtmax假手术组3 5427±627 5432±637 5421±718 5435±612（mmHg）模型组3 3103±652△△2921±367△△2867±627△△2738±789△△螺内酯小剂量组3 3419±551＊3417±478＊3438±545＊3456±668＊螺内酯大剂量组3 3549±563＊3598±739＊3610±572＊3688±663＊

2.2 螺内酯对心衰大鼠甲状腺素水平的影响 与假手术比较，模型组大鼠分别于4周、6周时FT3水平无明显降低（P＞0.05），于8周开始FT3水平明显降低，12周始FT3水平降低更加显著（P＜0.05～0.01），而FT4及TSH水平4周、6周、8周及12周时无明显变化（P＞0.05）；与模型组比较，螺内酯小剂量组及大剂量组分别于8周及12周时能够明显升高FT3水平，差异显著（P＜0.05），而对FT4、TSH水平无明显影响（P＞0.05）；与螺内酯小剂量组比较，螺内酯大剂量组分别于8周及12周时升高FT3水平更加明显，差异显著（P＜0.05）。见表2。

表2 螺内酯对心梗后心衰大鼠FT3、FT4及TSH水平的影响

表2 螺内酯对心梗后心衰大鼠FT3、FT4及TSH水平的影响

与假手术组比较△P＜0.05，△△P＜0.01；与模型组比较＊P＜0.05，＊＊P＜0.01；

项目组别n 4周6周8周12周3 76.1±1.9 75.6±3.3 74.4±2.1 74.8±3.1模型组3 74.2±3.2 73.2±4.2 60.3±2.4△54.4±61.2△△螺内酯小剂量组3 75.3±5.1 73.9±3.2 64.4±2.0＊60.5±53.1＊螺内酯大剂量组3 75.9±4.2＊74.3±4.3 67.1±2.5＊66.4±3.2＊FT4（ng／ml）假手术组3 26.1±5.2 27.3±4.2 28.0±4.2 25.1±6.8模型组3 27.4±2.2 26.5±5.6 27.6±4.1 28.4±3.9螺内酯小剂量组3 26.9±3.5 27.3±6.2 28.2±2.4 27.5±5.3螺内酯大剂量组3 25.8±6.3 28.4±5.4 27.5±5.9 28.8±6.3 TSH（mIU／L）假手术组3 2.81±0.9 2.76±0.4 2.67±0.4 2.63±0.7模型组3 2.77±0.7 2.86±0.8 2.83±0.8 2.78±0.5螺内酯小剂量组3 2.78±0.5 2.81±0.6 2.79±0.9 2.75±0.7螺内酯大剂量组FT3（pg／ml）假手术组3 2.87±0.9 2.84±0.6 2.81±0.8 2.85±0.7

2.3 螺内酯对心衰大鼠非梗死区心肌TRα1及TRα2mRNA表达水平的影响 与假手术组相比，模型组大鼠分别于4周、6周时TRα1及TRα2mRNA表达无明显变化，于8周开始TRα1mRNA表达上调，12周TRα1mRNA表达上调更加显著。而TRα2mRNA表达水平无明显变化；与模型组相比，于8周始螺内酯小剂量组及大剂量组均能明显下调TRα1mRNA表达，12周时螺内酯大剂量组下调TRα1mRNA表达更加明显，而对TRα2mRNA表达水平无明显影响，见图1。

图1 各组非梗死区心肌组织12周末TR1及TR2 mRNA的表达

3 讨论

心衰终末阶段常伴低T3综合征，特点为血清T3水平低，而血清T4和TSH水平正常，且其心衰表现与甲低的心脏病表现极为相似。血清T3低下程度与心衰的严重性相关［1］，并与判断心衰严重程度的指标脑钠肽（BNP）紧密相连［8］。T3成为预示心衰病人死亡的风险及判断预后的又一新指标［2］。T3是甲状腺激素的主要活性形式，以结合型T3及游离型T3（FT3）两种形式存在，外源性予以甲状腺激素能明显改善心功能。甲状腺激素受体（thyroid hormone receptors，TRs）属于类固醇类核受体超家族，主要定位于核染色质上，主要与T3结合，称核T3受体。核T3受体分为：TRα及TRβ，其中TRα有TRα1及TRα2两种亚型，TRα1是对TH有高度亲和力的受体，发挥主要的生理作用，而TRα2是无配体结合的负性调控受体。心脏亦表达TRα1及TRα2。醛固酮（Ald）是类固醇类激素中具有代表性的盐皮质激素，心脏能合成和分泌Ald［9］。心衰后肾素－血管紧张素－醛固酮系统（renin－angiotensin－aldosterone system，RASS）激活，Ald分泌明显增多，且ALd水平与慢性心力衰竭的严重程度成正例［10］。螺内酯是Ald受体拮抗剂，通过干预心肌细胞基质胶原沉积及凋亡等途径改善心衰。

本实验结扎大鼠左冠脉造成心梗后心衰动物模型，于不同时间点观察各项指标。结果发现模型组大鼠于8周开始FT3水平及血流动力学各项指标明显降低，同时非梗死区心肌TRα1mRNA表达上调，而TRα2mRNA表达、FT4及TSH水平始终无明显变化（P＞0.05），8周始呈现低T3综合征状态，12周始更加显著。说明心衰后FT3水平具有明显时相性，同时与血流动力学变化关系密切。分析其原因考虑心衰时甲状腺激素受体上调，故而结合了大量的T3，以维持机体的代谢水平，使游离T3水平降低。此外，本研究观察到低T3综合征状态时心肌细胞TRα1mRNA表达上调，而TRα2作为负性调控因素无明显变化，推测TRα1mRNA表达与TRα2 mRNA表达失衡。进一步研究表明螺内酯可下调心肌TRα1mRNA表达，升高FT3水平，进而改善心衰后大鼠的左心收缩和舒张功能，这可能是其改善心衰后血流动力学的原因之一。因此在心衰发展阶段，注重甲状腺素水平的检测越来越重要，改善低T3状态是改善心衰的又一新的治疗靶点。

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2014－09－25）

1007－4287（2015）10－1629－03

天津市第四中心医院博硕士基金

＊通讯作者