顶空气相色谱测定柴胡口服液中正己醛含量*

2015-05-04樊磊磊刘乃强张培毅

中医研究 2015年9期

关键词：柴胡皂苷顶空口服液

樊磊磊，刘乃强，张培毅

(1.河南省食品药品检验所，河南郑州 450000； 2.河南天方药业中药有限公司，河南郑州 450003)

·药学研究·

顶空气相色谱测定柴胡口服液中正己醛含量*

樊磊磊1，刘乃强1，张培毅2

(1.河南省食品药品检验所，河南郑州 450000； 2.河南天方药业中药有限公司，河南郑州 450003)

目的∶建立柴胡口服液中正己醛的顶空气相含量测定方法。方法∶ 采用DB-5MS毛细管柱(30 m×0.25 mm×0.25 μm)。程序升温：初始温度为45℃，保持2 min；以每分钟3 ℃升温至70 ℃，保持4 min；以每分钟10 ℃升温至210 ℃，保持3 min；以每分钟20 ℃升温至260 ℃，保持3 min。载气为氦气，流速1.2 mL/min；顶空进样，顶空瓶平衡温度85 ℃，平衡时间12 min，进样体积1 mL；FID检测器温度260 ℃。结果∶正己醛在0.52～33.35 mg/L呈良好的线性关系(r=0.999 0)，平均加样回收率为98.65%(n=6)，RSD值为3.87%。结论∶本方法可用于柴胡口服液中正己醛的含量测定。

柴胡口服液/药效学；正己醛；顶空气相色谱；含量测定;药学研究

柴胡口服液为柴胡药材经提取浓缩制成的制剂, 收载于《中国药典》2010版一部，具有解表退热的作用，临床用于外感发热，症见身热面赤、头痛身楚、口干而渴[1]。文献中关于柴胡口服液分析检测的报道多为采用HPLC分析测定柴胡口服液中皂苷类成分如柴胡皂苷a、d[2]和柴胡皂苷b2[3]的含量、柴胡口服液工艺药渣中5种柴胡皂苷的含量测定[4]，以及采用大孔吸附树脂-比色法[5]和分光光度法[6]测定柴胡口服液中总皂苷的含量, 尚未见对其挥发性化学成分进行定量分析检测的报道。近年来, 快速便捷的顶空分析方法逐渐成为分析化学工作者研究挥发性物质的重要手段[7-11]。研究表明：顶空分析法样品消耗量少, 无需溶剂提取，对色谱柱伤害少，是一种便捷的挥发性成分分析方法，其中静态顶空方法最为常用[12]。本实验尝试采用顶空气相色谱方法测定柴胡口服液中挥发性成分正已醛的含量，为加强本品质量控制及质量标准提高提供一定依据。

1 药品、试剂与仪器

柴胡口服液(批号131101，131102，131103，131201，140201，140202，140203) ，由河南天方药业中药有限公司提供。正己醛(批号S88145，CAS:66-25-1)，SIGMA公司提供；水为超纯水；氯化钠(分析纯)，天津市风船化学试剂科技有限公司产品。Thermo Trace GC气相色谱仪，Thermo Electron Corporation公司产品；HS 2000顶空进样器，Thermo Electron Corporation公司产品；Xcalibur工作站，Thermo Electron Corporation公司产品；DB-5MS毛细管柱(30 m×0.25 mm×0.25μm，)，安捷伦科技股份有限公司产品。

2 方法与结果

2.1 仪器条件

采用DB-5MS毛细管柱(30 m×0.25 mm×0.25 μm)。程序升温：初始温度为45℃，保持2 min；以每分钟3 ℃升温至70 ℃，保持4 min；以每分钟10 ℃升温至210 ℃，保持3 min；以每分钟20 ℃升温至260 ℃，保持3 min。载气为氦气，流速1.2 mL/min；顶空进样，顶空瓶平衡温度85 ℃，平衡时间12 min，进样体积1 mL；FID检测器温度260 ℃。

2.2 溶液的制备

2.2.1 对照品溶液的制备

取正己醛适量，精密称定，置10 mL容量瓶中，加水溶解，制得667 mg/L的储备液，2～4 ℃冷藏备用。取该储备液，用水依次稀释得质量分数分别为33.35，16.68，8.34，4.17，2.09，1.04，0.52 mg/L的对照品系列溶液。

2.2.2 供试品溶液的制备

取同一批柴胡口服液5瓶，将内容物混匀后，精密量取2 mL，置20 mL顶空进样瓶中，加0.4 g NaCl，压盖，密封，即得供试品溶液。

2.2.3 阴性对照溶液的制备

按柴胡口服液的制备工艺，取蒸馏水100 mL，加入丙二醇3 mL、蔗糖3 g、香精0.5 g，加热溶解，混匀，滤过，既得阴性对照样品。取阴性对照样品按2.2.2项下方法制备阴性对照品溶液。

2.3 实验结果

2.3.1 专属性考察

取对照品溶液、供试品溶液、阴性对照样品溶液进样，记录色谱图，结果：供试品色谱中，可检出正己醛色谱峰，阴性对照样品溶液在正己醛色谱峰位置处无干扰，专属性强，见图1 A、B、C。

1.正已醛；A.对照品溶液；B.供试品溶液；C.阴性对照溶液图1 正己醛含量测定色谱图

2.3.2 重复性试验

取同一批样品，制备6份供试品溶液(因顶空气相每一样品瓶只能进样一次，不能重复多次取样，因此重复进样的精密度考察与此相同)，依次进样，测得供试品溶液中正己醛含量的平均值为2.24 mg/L。结果RSD值为3.50%。结果表明：正己醛含量测定重复性试验可满足分析测试要求。

2.3.3 稳定性考察

取同时制备的同一批次供试品溶液7份，分别于0，2，4，6，8，12，24 h依次进样测定，其峰面积RSD值为4.87%(n=6)。结果表明：供试品溶液在24 h内基本稳定。

2.3.4 线性关系考察及检测限

取线性实验用对照品系列溶液，各精密量取 2 mL，置20 mL顶空进样瓶中，各加0.4 g NaCl，压盖，密封，进样测定。以浓度为横坐标，峰面积为纵坐标绘制标准曲线，得正己醛回归方程为：Y=1 195 699.552X-202 630.307(r=0.999 0)。结果表明：正己醛在0.52～33.35 mg/L线性关系良好。检测限为0.52 mg/L。

2.3.5 加样回收率考察

精密吸取6份同一批已知含量的样品(含正已醛2.24 mg/L)各1 mL，分置20 mL顶空进样瓶中，分别精密加入2.09 mg/L的正己醛对照品溶液各1 mL，再各加0.4 g NaCl，压盖，密封，进样测定分析，计算正己醛加样回收率，结果见表1。

表1 加样回收率试验结果 n=6

2.3.6 样品含量测定

取7批不同批次柴胡口服液样品，按供试品溶液制备项下所述方法，制得供试品溶液，分别进样测定，测定结果见表2。

表2 含量测定结果

3 讨论

正己醛属于挥发性物质，沸点为130 ℃，实验采用静态顶空的气体萃取技术具有设施简单、操作简便、专属性强、对仪器系统的污染小等优点。笔者发现:在供试品溶液制备实验中，在顶空进样瓶中添加氯化钠的供试品溶液比不添加氯化钠的供试品溶液所测得的正己醛峰面积大，这可能是添加氯化钠后，发生盐析作用，利于正己醛挥发出来的缘故。顶空分析的色谱响应受平衡温度、平衡时间，以及气液相比例的影响，温度升高时，顶空区域的目标化合物浓度增大，有利于提高检测灵敏度，但温度过高，杂质的挥发量会增加。另外，在静态条件下，组分在两相中分配通常在5～15 min可达到平衡，实验中通过比较，选用平衡温度为85 ℃，平衡时间为12 min。

运用顶空气相色谱法测定柴胡口服液中正己醛的含量，前处理简单易行，其方法的精密度和准确度好，能达到所需要的检测目的，可为更好地控制柴胡口服液的质量提供参考依据。

[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典:一部[M].北京：中国医药科技出版社,2010:992.

[2]洪卫兵,徐庆辉.HPLC法测定柴胡口服液中柴胡皂苷a、d的含量[J].安徽医药,2011,15(7):846-847.

[3]李军,姜华,石任兵.HPLC法测定柴胡口服液中柴胡皂苷b2 的含量[J].药物分析杂志,2009,29(5):743-745.

[4]李军,姜华,张延萍,等.柴胡口服液工艺药渣中5种柴胡皂苷的含量测定[J].中国药学杂志,2012,47(16):1337-1340.

[5]李军,姜华.大孔吸附树脂-比色法测定柴胡口服液中总皂苷的含量[J].时珍国医国药,2009,20(5):1110.

[6]闫建伟,倪天军,董丽,等.柴胡口服液中总黄酮含量测定[J].新乡医学院学报, 2007, 24(1):36-38.

[7]朱晓兰,刘百战,宗若雯,等.辣椒油化学成分的气相色谱-质谱分析[J].分析测试学报，2003,22(1):67-70.

[8]程誌青,吴惠勤,何守明,等.酱香型酒香气成分研究3.珍酒、茅台酒前香成分的分离及气相色谱/质谱分析[J].分析测试学报,1996,15(5):8-11.

[9]葛兴.顶空分析法用于天然香料油气味分析[J].北京农学院学报,1994,9(1): 96-98.

[10]李红军,蒋琴,张文彬,等.中药微量挥发成分的联机分析——藿香头香成分分析[J].分析化学,1993,21(1):117-120.

[11]张青龄,陈宜,黄建立.顶空气相色谱/质谱法分析大豆油中正己醛含量[J].福建分析测试，2013,22(6):14-16.