18β-甘草次酸长期灌胃对大鼠血细胞的影响*

2015-05-04席克虎张小兵王有虎陈小婉张福宏马春霞刘翔毅杨贵军

中医研究 2015年9期

关键词：灌胃甘草低剂量

席克虎,张小兵,王有虎,董明,陈小婉,桂岩,张福宏,马春霞,洪浩,刘翔毅,江英,马毅,杨贵军

(兰州大学第一医院耳鼻咽喉头颈外科,甘肃兰州 730000)

·实验研究·

18β-甘草次酸长期灌胃对大鼠血细胞的影响*

席克虎,张小兵,王有虎,董明,陈小婉,桂岩,张福宏,马春霞,洪浩,刘翔毅,江英,马毅,杨贵军

(兰州大学第一医院耳鼻咽喉头颈外科,甘肃兰州 730000)

目的：研究18β-甘草次酸长期灌胃对正常大鼠血细胞的影响。方法：将96只Wistar大鼠随机分成正常对照组、低剂量组(25 μg/g)、中剂量组(50 μg/g )和高剂量组(100 μg/g)4组。药物组分别给予对应剂量的甘草次酸灌胃，正常对照组给予等体积生理盐水，1 d 1次。于给药14周、22周、30周及停药4周时，检测大鼠红细胞计数(RBC)、血红蛋白含量(HGB)、红细胞压积(HCT)、平均红细胞体积(MCV)、平均红细胞血红蛋白浓度(MCHC)、平均红细胞血红蛋白含量(MCH)、白细胞数计数(WBC)、中性粒细胞比例(N%)、淋巴细胞比值(L%)、血小板计数(PLT)。结果：14周、22周及30周时甘草次酸组(低、中、高剂量)RBC、HGB、MCHC、N%、PLT较正常对照组升高，MCV、L%较正常对照组降低，但3个剂量组之间差别无统计学意义，且上述指标于停药4周时接近正常对照组(差别无统计学意义)。同一指标于14周、22周及30周各时间点之间对比，差别无统计学意义，但与停药4周时相比差别有统计学意义。14周、22周、30周及停药4周时HCT、MCH、WBC与正常对照组对比，差别无统计学意义；同一时间点各组之间对比、同一组不同时间点之间对比，差别均无统计学意义。结论：18β-甘草次酸长期灌胃可引起一过性的RBC、HGB、MCHC、N%、PLT的升高和MCV、L%的降低，这种影响在停药一定时间后消除；对HCT、MCH、WBC无明显影响。

18β-甘草次酸/药效学；长期灌胃；动物;大鼠；动物;血细胞/分析

18β-甘草次酸是甘草的主要活性成分之一[1]，具有较好的抗炎、抗变态反应、抗溃疡、抗病毒、降血脂、镇咳、平喘、祛痰、抗心律失常、抑制肿瘤细胞增殖的作用[2-4]，因其有较好的生理活性和较低的毒副反应而被广泛运用。关于甘草次酸毒副反应的报道主要是包括长期或大量服用甘草酸制剂产生的肾上腺皮质激素样作用[5-7]，而大剂量甘草次酸长期灌胃对正常大鼠血细胞的影响未见报道。

1 材料与方法

1.1 动物

无特定病原体(specific pathogen free，SPF)级Wistar大鼠96只，雌雄各半，4～6周龄，体质量180～220 g，由甘肃中医学院SPF动物实验室提供，注册许可证号：SCXK(甘)2011-0001。

1.2 试剂与仪器

18β-甘草次酸，500 g/袋，AR级，甘肃泛植生物科技有限公司生产，批号12081603。SF-3000型血细胞分析仪，日本SYSMEX株式会社产品。

1.3 动物分组与给药

将96只大鼠随机分为正常对照组、低剂量组、中剂量组、高剂量组，每组24只。将甘草次酸25，50，100 μg/g溶于2 mL生理盐水中，分别灌胃给予低、中、高剂量组大鼠，正常对照组以等量生理盐水替代，1d 1次。

1.4 检测指标

各组分别于给药14周、22周、30周及30周后停药4周，随机挑选6只大鼠，用100 g/L 的水合氯醛(3μL/g)腹腔注射麻醉，开胸后心脏采血。检测不同时间点各组大鼠的红细胞计数(RBC)、血红蛋白含量(HGB)、红细胞压积(HCT)、平均红细胞体积(MCV)、平均红细胞血红蛋白浓度(MCHC)、平均红细胞血红蛋白含量(MCH)、白细胞数计数(WBC)、中性粒细胞比例(N%)、淋巴细胞比值(L%)和血小板计数(PLT)。

1.5 统计学方法

2 结果

2.1 对红细胞的影响

2.1.1 各组红细胞计数对比

与正常对照组对比，给药14周、22周及30周3个药物组RBC升高，差别有统计学意义(P<0.05),停药4周时差别无统计学意义(P>0.05)。同一时间点各组之间对比，差别无统计学意义(P>0.05)。同一组在给药14周、22周、30周这3个时间点的RBC计数对比，差别无统计学意义(P>0.05)，但与停药4周时对比，差别均有统计学意义(P<0.05)。见表1。

表1 各组红细胞计数对比

组别14周22周30周停药4周正常对照组7.01±0.617.07±0.497.08±0.337.10±0.55低剂量组7.88±0.66*#8.14±0.42*#8.28±0.31*#7.18±0.34中剂量组7.92±0.46*#8.32±0.52*#8.45±0.15*#7.14±0.41高剂量组7.94±0.41*#8.23±0.43*#8.51±0.58*#7.16±0.47

注：与同一时间点正常对照组对比，*P<0.05；与同组停药4周对比，#P<0.05。

2.1.2 各组血红蛋白含量对比

与正常对照组对比，给药14周、22周及30周3个药物组HGB升高，差别有统计学意义(P<0.05),停药4周时差别无统计学意义(P>0.05)。同一时间点各组之间对比，差别无统计学意义(P>0.05)。同一组在给药14周、22周、30周这3个时间点的HGB对比，差别无统计学意义(P>0.05)，但与停药4周时对比，差别均有统计学意义(P<0.05)。见表2。

表2 各组血红蛋白含量对比

组别14周22周30周停药4周正常对照组146.67±9.26148.43±8.84149.11±9.34149.98±8.86低剂量组165.75±8.84*#164.21±7.91*#165.83±9.68*#149.42±7.02中剂量组170.75±8.34*#166.65±8.53*#164.61±8.04*#149.83±9.24高剂量组166.56±7.92*#168.83±7.41*#167.42±9.38*#150.67±6.53

注：与同一时间点正常对照组对比，*P<0.05；与同组停药4周对比，#P<0.05。

2.1.3 各组红细胞压积对比

与正常对照组对比，给药14周、22周、30周及停药4周时3个药物组的HCT均升高，但差别无统计学意义(P>0.05)。同一时间点各组之间对比，同一组不同时间点之间对比，差别均无统计学意义(P>0.05)。见表3。

表3 各组红细胞压积对比

组别14周22周30周停药4周正常对照组46.77±3.1946.89±3.2147.64±3.0247.07±2.84低剂量组47.79±1.2848.34±1.9049.72±1.7847.74±1.23中剂量组47.77±2.0448.22±2.0349.55±1.6447.32±1.21高剂量组47.45±1.8348.13±1.4149.84±1.5447.61±1.32

2.1.4 各组平均红细胞体积对比

与正常对照组对比，给药14周、22周及30周3个药物组的MCV均降低，差别有统计学意义(P<0.05),停药4周时差别无统计学意义(P>0.05)。同一时间点各组之间对比，差别无统计学意义(P>0.05)。同一组在给药14周、22周、30周这3个时间点的对比，差别无统计学意义(P>0.05)，但与停药4周时对比，差别均有统计学意义(P<0.05)。见表4。

组别14周22周30周停药4周正常对照组66.27±1.5166.94±1.1866.72±1.4567.14±1.62低剂量组58.71±1.82*#58.14±1.53*#58.67±2.33*#65.83±2.12中剂量组58.73±1.65*#58.36±2.14*#58.56±2.54*#66.06±1.33高剂量组58.81±2.24*#58.27±1.66*#58.45±2.24*#65.92±3.02

注：与同一时间点正常对照组对比，*P<0.05；与同组停药4周对比，#P<0.05。

2.1.5 各组平均红细胞血红蛋白含量对比

给药14周、22周、30周及停药4周3个药物组的MCH与正常对照组对比，差别无统计学意义(P>0.05),停药4周时较之差别无统计学意义(P>0.05)。同一时间点各组之间对比，同一组不同时间点之间对比，差别均无统计学意义(P>0.05)。见表5。

组别14周22周30周停药4周正常对照组20.80±1.2820.68±1.1520.77±1.0920.83±1.21低剂量组20.91±0.8220.81±1.2420.77±1.1320.81±1.17中剂量组20.69±1.1520.76±1.1620.59±0.8420.14±1.12高剂量组20.83±1.0920.71±0.6820.58±1.2220.22±1.01

2.1.6 各组平均红细胞血红蛋白浓度对比

与正常对照组对比，给药14周、22周及30周3个药物组的MCHC均升高，差别有统计学意义(P<0.05)；停药4周时差别无统计学意义(P>0.05)。同一时间点各组之间对比，差别均无统计学意义(P>0.05)。同一组在给药14周、22周、30周这3个时间点的MCHC对比，差别无统计学意义(P>0.05)，但与停药4周时对比，差别均有统计学意义(P<0.05)。见表6。

表6 各组平均红细胞血红蛋白浓度对比

组别14周22周30周停药4周正常对照组324.07±3.03324.54±2.13325.02±3.32325.13±4.24低剂量组340.91±0.82*#341.34±0.91*#348.82±1.23*#326.14±3.32中剂量组348.69±1.15*#349.62±1.63*#347.67±1.04*#327.87±2.11高剂量组342.83±1.09*#346.76±1.16*#342.96±1.24*#329.23±2.89

注：与同一时间点正常对照组对比，*P<0.05；与同组停药4周对比，#P<0.05。

2.2 对白细胞的影响

2.2.1 各组中性粒细胞比例对比

与正常对照组对比，给药14周、22周及30周3个药物组的N%均升高，差别有统计学意义(P<0.05)；停药4周时差别无统计学意义(P>0.05)。同一时间点各组之间对比，差别无统计学意义(P>0.05)。同一组在给药14周、22周、30周这3个时间点的N%对比，差别无统计学意义(P>0.05)，但与停药4周时对比，差别均有统计学意义(P<0.05)。见表7。

组别14周22周30周停药4周正常对照组10.81±2.3610.74±2.5311.45±3.3711.48±2.63低剂量组21.12±3.35*#21.32±2.43*#22.48±5.27*#11.97±2.49中剂量组21.27±3.65*#21.45±3.21*#22.14±2.38*#12.02±2.36高剂量组21.84±4.21*#21.23±4.16*#22.13±3.39*#11.73±3.41

注：与同一时间点正常对照组对比，*P<0.05；与同组停药4周对比，#P<0.05。

2.2.2 各组淋巴细胞比值对比

与正常对照组对比，给药14周、22周及30周3个药物组的L%均降低，差别有统计学意义(P<0.05)；停药4周时差别无统计学意义(P>0.05)。同一时间点各组之间对比，差别无统计学意义(P>0.05)。同一组在给药14周、22周、30周这3个时间点的L%对比，差别无统计学意义(P>0.05)，但与停药4周时对比，差别均有统计学意义(P<0.05)。见表8。

组别14周22周30周停药4周正常对照组85.21±3.3685.17±3.6485.14±4.1285.11±3.17低剂量组66.35±6.55*#65.32±8.41*#64.91±8.50*#83.36±5.49中剂量组67.67±4.47*#65.45±5.33*#66.88±4.82*#84.45±4.36高剂量组67.86±5.08*#66.53±4.56*#68.37±8.03*#84.03±5.41

注：与同一时间点正常对照组对比，*P<0.05；与同组停药4周对比，#P<0.05。

2.2.3 各组白细胞计数对比

给药14周、22周、30周及停药4周时3个药物组的WBC与正常对照组对比，差别无统计学意义(P>0.05)。同一时间点各组WBC之间对比，同一组不同时间点之间WBC对比，差别均无统计学意义(P>0.05)。见表9。

表9 各组白细胞计数对比

组别14周22周30周停药4周正常对照组4.32±1.314.28±2.174.26±2.064.19±2.23低剂量组4.59±3.354.15±1.334.32±2.154.22±2.12中剂量组3.99±3.654.54±3.214.23±2.134.05±2.09高剂量组4.35±4.214.22±2.244.32±2.294.31±2.25

2.2.4 各组血小板计数对比

与正常对照组对比，给药14周、22周及30周3个药物组的PLT均升高，差别有统计学意义(P<0.05)；停药4周时差别无统计学意义(P>0.05)。同一时间点各组PLT之间对比，差别无统计学意义(P>0.05)。同一组在给药14周、22周、30周这3个时间点的PLT对比，差别无统计学意义(P>0.05)，但与停药4周时对比，差别均有统计学意义(P<0.05)。见表10。

表10 各组血小板计数对比

组别14周22周30周停药4周正常对照组741.33±81.59752.46±62.44748.64±53.26755.73±44.39低剂量组1022.50±49.14*#1108.46±57.93*#1117.74±56.35*#784.32±58.62中剂量组1101.33±61.12*#1113.24±72.45*#1121.64±70.84*#758.62±72.35高剂量组1116.67±89.82*#1089.82±50.24*#1125.94±65.48*#760.18±64.73

注：与同一时间点正常对照组对比，*P<0.05；与同组停药4周对比，#P<0.05。

3 讨论

18β-甘草次酸是甘草中所含三萜类化合物甘草甜素水解后脱去两分子葡糖醛酸的产物，常温下为白色针状结晶(C30H46O4),其化学结构类似于肾上腺皮质激素。甘草甜素及绝对多数甘草次酸衍生物在体内先经胃酸水解为甘草次酸[8]，然后经由小肠吸收入血液，因此最终发挥药效的是甘草次酸。甘草次酸是甾体激素代谢失活酶抑制剂，可提高内源性和外源性皮质激素的活性[9]。

血细胞是存在于血液中的细胞，其中红细胞主要的功能是运送氧，白细胞主要扮演免疫的角色，血小板在止血过程中起着重要作用。在正常生理情况下，血细胞有一定的形态结构，并有相对稳定的数量。蒋锋等[10]观察到加味炙甘草汤灌胃对放疗小鼠的造血干细胞有明显的刺激增生作用，任翠爱等[11]研究发现甘草酸口服可使再生障碍性贫血小鼠的HGB明显升高，江南等[12]发现甘草酸二胺能抑制环磷酰胺引起的大鼠白细胞、红细胞、血小板的降低，Chanho Oh等[13]报道甘草酸通过促进成熟淋巴细胞凋亡而有助于免疫诱导再生障碍性贫血小鼠骨髓造血功能的恢复，王珺等[14]观察到煎服甘草可使妊娠合并免疫性血小板减少的患者血小板数量升高。

本实验研究发现：长期灌胃18β-甘草次酸对正常Wistar大鼠血细胞的影响与之前报道的甘草及其衍生物对疾病或疾病模型的小鼠、大鼠、人的血细胞的影响基本一致。14周、22周及30周时甘草次酸组(低、中、高剂量)RBC、HGB、MCHC、N%、PLT较正常对照组升高，MCV、L%较其降低；同时我们还观察到这种影响于停药4周后消失。14周、22周、30周及停药4周时HCT、MCH、WBC与正常对照组对比，差别无统计学意义。同一时间点低、中、高剂量组各组之间对比差别无统计学意义。由此我们认为：18β-甘草次酸长期灌胃对Wistar大鼠血细胞的影响呈现出类皮质激素样作用，可引起一过性的RBC、HGB、MCHC、PLT升高和MCV、L%降低，这种影响在停药后消除；对HCT、MCH、WBC无明显影响。此为进一步探讨18-β甘草次酸的药理、毒副作用、安全使用剂量及用药周期提供了支持。

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(编辑陶珠)

1001-6910(2015)09-0066-05

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