雅解沙把对小鼠同种被动皮肤过敏的影响*

王维丽，段小花，张 超，陈 普，陈清华，郑 进

(云南中医学院，云南 昆明 650000)



雅解沙把对小鼠同种被动皮肤过敏的影响*

王维丽，段小花，张 超，陈 普，陈清华，郑 进△

(云南中医学院，云南 昆明 650000)

目的 观察雅解沙把对卵蛋白(OVA)诱导的小鼠同种被动皮肤过敏反应(PCA)及血液免疫球蛋白E(IgE)的影响。方法 Balb/c小鼠随机分为正常组、模型组、扑尔敏组、雅解沙把低剂量组和雅解沙把高剂量组。给予相应药物灌胃，采用OVA皮下注射方式致敏，制备大鼠OVA 抗体血清，并分别注射各对应组的抗体血清，进行被动致敏48 h后，各组小鼠尾静脉注射对应组的0.5%伊文思兰溶液，观察各组小鼠耳廓蓝染情况，并测定吸光度(OD值)。末次致敏后第分离血清，采用武汉华美IgE酶联免疫试剂盒进行检测。结果 与正常组比较，模型组的OD值明显升高(P<0.05)；与模型组比较，雅解沙把高剂量组的OD值明显降低(P<0.05)。与模型组比较，扑尔敏组、雅解沙把高剂量组小鼠血清的IgE含量显著性的降低，且差异具有统计学意义(P<0.05)，雅解沙把低剂量组有降低小鼠血清IgE含量的作用趋势，但差异无统计学意义(P>0.05)。结论 雅解沙把具有抗过敏作用，机制可能与抑制Ⅰ型变态反应有关。

雅解沙把；被动皮肤过敏；IgE

傣医学历史悠久，有自己的医学理论体系，是我国传统医学的重要组成部分。傣族人民在长期的实践中，形成了“四塔”(地、水、火、风)“五蕴”(色、识、受、想、行)为核心的医学理论。四塔构成世界万物和人体最基本的物质元素，五蕴是人体各种物质和精神要素的总和，只有四塔五蕴平衡才能保持健康。而“雅解”也是傣医中重要、特色的理论，主张未病先治，先解后治。傣药“雅解沙把”(百解胶囊)在临床有良好治疗效果，在傣族地区广泛使用，主要有清热解毒，保肝护肾，解酒，延年益寿等作用。雅解沙把在治疗食物，药物引起的不适及湿疹等现象提示其可能有抗过敏的作用[1-3]。

PCA是一种常用的测试药物过敏的经典方法，具有方法简单、操作简便、高灵敏的特点[4]。在本试验中将用PCA建立Ⅰ型变态反应模型，并测定IgE的含量，进一步明确雅解沙把的作用机制，为傣医理论更好地指导临床用药打下基础。

1 实验材料

1.1 动物 Balb/c小鼠，雌雄各半，体重18～22 g，(昆明医学院实验动物科，批准文号：SCXK 滇P0005-0008)

1.2 药品与试剂 药物：卵蛋白(Sigm，批号：9006-s-9-1)，扑尔敏(昆明振华制药厂，批号：20130507)，雅解沙把(百解胶囊)，滇药制字(Z)20122252，云南省西双版纳州傣医院院内制剂，按人和动物的体表面积计算法，计算得出“雅解沙把”小鼠口服给药的等效量为0.39 g生药/kg，再参考前期完成的“雅解沙把”抗炎、解酒等实验的有效(P<0.05)剂量为9倍临床等效剂量，故本实验选择3.51 g生药/kg，0.39 g生药/kg为高、低剂量。

试剂：伊文思蓝(中国医药集团上海试剂公司，批号：20120714)、磷酸(重庆川东有限公司试剂厂，批号：20051017)、丙酮(上海申博化工有限公司，批号：0607101)、氢氧化钾(天津市化学试剂三厂，批号：20120925)、氢氧化钠(成都化学试剂厂，批号：050918)、氯化铝(广东台山化工厂生产，批号：100604)。

1.3 药物制备 雅解沙把实验用药的制备 雅解沙把生药粉末250 g，用无纺布袋分装后分3次包煎，将3次滤液合并，浓缩成稠浸膏，置冰箱中冷藏保存备用，临用前按需要现配至所需浓度。

氢氧化铝凝胶的制备 氢氧化铝凝胶的配制：称取无水Al(Cl)31.7 g缓慢加入25 mL蒸馏水中，不断搅拌使其溶解，在不断搅拌下缓慢滴加10 mol/L NaOH至PH8-9，终浓度约4%。

致敏液的制备 取OVA(用生理盐水配成20 mg/mL)，再与氢氧化铝凝胶以1：1混合成相应组别的致敏乳液。

激发液的制备 取20 mg/mL OVA与1%伊文思兰溶液以1：1混合成激发溶液。

2 实验方法

2.1 抗体的制备 致敏：取Balb/c小鼠100只，分为5组，分别为正常组、模型组、扑尔敏组、雅解沙把低剂量组和雅解沙把高剂量组。除正常组外每组小鼠皮下注射OVA致敏乳液，0.3 mL/只，隔天1次，共注射3次，同时连续以0.1 mL/10 g灌胃给以蒸馏水、扑尔敏、雅解沙把低剂量和雅解沙把高剂量7天。末次致敏后第14天小鼠摘眼球取血，3000转/分离心10 min，分离血清，同组小鼠血清混合，分装于EP管中-20℃保存备用。

2.2 模型组的制备 取Balb/c小鼠40只，分为4组，分别为正常组、10 μL组、20 μL组和30 μL组。以0.3%戊巴比妥钠麻醉，两只耳廓皮下分别注射对应组所需的抗体血清，进行被动致敏。被动致敏48 h后，各组小鼠尾静脉注射对应组的0.5%伊文思兰溶液：注射量均为0.3 mL/只进行激发。激发后30 min脱颈处死小鼠，剪下双耳，每对耳朵用0.75 mL 1mol/L KOH溶液浸泡，在37℃恒温过夜消化，次日加3.5 mL 0.6 mol/L 磷酸丙酮(5：13)混合液，振摇，3500 r/min，离心15 min，上清液在630 nm波长处测定其吸光度(OD值)。

2.3 被动致敏与激发[5]另取Balb/c小鼠50只，雌雄各半，如上分为5组，以0.3%戊巴比妥钠麻醉，两只耳廓皮下分别注射各对应组的抗血清20 μL，进行被动致敏。被动致敏48小时后，各组小鼠尾静脉注射对应组的0.5%伊文思兰溶液：注射量均为0.3 mL/只进行激发。激发后30 min脱颈处死小鼠，剪下双耳，每对耳朵用0.75 mL 1mol/L KOH溶液浸泡，在37℃恒温过夜消化，次日加3.5 mL0.6 mol/L 磷酸丙酮(5：13)混合液，振摇，3500 r/min，离心15 min，上清液在630 nm波长处测定其吸光度(OD值)。

2.4 小鼠血清IgE检测 取Balb/c小鼠100只，如上分为5组。除正常组外每组小鼠皮下注射OVA致敏乳液，0.3 mL/只，隔天一次，共注射3次，同时连续以0.1 mL/10 g灌胃给以蒸馏水、扑尔敏、雅解沙把低剂量和雅解沙把高剂量7天。末次致敏后第14天小鼠摘眼球取血，3000 r/min分离心10 min，分离血清，采用武汉华美IgE酶联免疫试剂盒进行检测。

3 结果

3.1 模型的制备 20 μL和30 μL抗体血清耳廓皮下注射均可制备小鼠同种被动皮肤过敏模型(P<0.05，0.01)，结果见表1。

表1 小鼠同种被动皮肤过敏模型的制备

注：与正常组比较：△P<0.05，△△P<0.01

与正常组相比，模型2、3均具有显著性意义，考虑到30μl抗体血清耳廓皮下注射制备的小鼠同种被动皮肤过敏模型太严重，药物难以纠正，所以之后实验均选用20μl抗体血清耳廓皮下注射制备的小鼠同种被动皮肤过敏模型。

3.2 雅解沙把对小鼠同种被动皮肤过敏的影响 见表2。

表2 雅解沙把对小鼠同种被动皮肤过敏的影响

注：与正常组比较：△P<0.05；与模型组比较：*P<0.05；与正常组比较，模型组的OD值明显升高(P<0.05)；与模型组比较，雅解沙把高剂量组的OD值明显降低(P<0.05)。

表3 雅解沙把对卵蛋白(OVA)诱导的小鼠同种被动皮肤过敏IgE含量的影响

注：与正常组比较：△P<0.05，与模型组比较：*P<0.05

由表3可见与正常组比较，卵蛋白诱导的小鼠同种被动皮肤过敏模型的血清的IgE含量明显升高，差异有统计学意义(P<0.05)，提示模型组造模成功。与模型组比较，扑尔敏组、雅解沙把高剂量组小鼠血清的IgE含量显著性的降低，且差异具有统计学意义(P<0.05)，雅解沙把低剂量组有降低小鼠血清IgE含量的作用趋势，但差异无统计学意义(P>0.05)。

由上述可以得出：与模型组比较，雅解沙把高剂量组能显著性降低小鼠血清IgE的含量，提示其具有一定的抗过敏的作用，尤其对于以IgE为主的Ⅰ型变态反应具有较好的治疗作用。

图1 A为正常组小鼠，B为模型组小鼠，C为扑尔敏组小鼠，D为雅解沙把低剂量组，E为雅解沙把高剂量组

4 讨论

傣医药是我国传统医药重要的组成之一，聚集了历代傣族人民智慧的结晶，形成了独特的理论体系。傣药“雅解沙把”(百解胶囊)以“先解后治”理论为指导，在临床治疗上有良好效果，其中包含治疗过敏反应的作用，但是作用机制不明确，缺乏理论依据，本实验以I型变态反应证实其作用机制。

I型变态反应主要由IgE介导，测IgE的含量在临床诊断I型变态反应有重要意义。在正常情况下IgE在机体含量较低，当受到抗原刺激之后，IgE显著增多，与肥大细胞表面的特异性受体结合，形成复合体结构，机体处于致敏状态。当机体再次受到同种或异种抗原的刺激，IgE的构型发生改变，肥大细胞脱落，同时释放大量组胺等过敏介质，使血管通透性升高，此时在血液中的伊文思蓝即可在此部位从血浆中渗出，形成蓝斑[6-9]，由于抗原越多渗出依文思蓝越多(图1)，因此可以对过敏进行定量分析，对该反应进行评价。

实验中考虑到30 μL抗体血清耳廓皮下注射制备的小鼠同种被动皮肤过敏模型太严重，药物难以纠正，所以之后实验均选用20 μL抗体血清耳廓皮下注射制备的小鼠同种被动皮肤过敏模型。实验结果显示：雅解沙把高剂量组的OD值明显降低，并能显著的性降低小鼠血清IgE的含量，提示其具有一定的抗过敏的作用，尤其对于以IgE为主的Ⅰ型变态反应具有较好的治疗作用，但雅解沙把在抑制过敏反应中是否抑制肥大细胞的脱落还需要进一步研究。

[1]曾君，曾湘荣.傣药雅解沙把(百解胶囊)的研究概况[J].中国民族民间医药，2009，18(21)：23-24.

[2]唐琭璐.傣医“雅解”学说运用规律的初步研究[D].2012，云南中医学院.

[3]张婷.傣医解药“雅解沙把”抗过敏作用的实验研究及治疗湿疹的临床观察[D].2012，云南中医学院.

[4]张冬梅，刘廷珍，单淑香，等.豚鼠和大鼠被动皮肤过敏试验.动物医学进展[J].2013，34(12)：241-243.

[5]赵琳，谢家骏，康黎静，等.不同品系小鼠异种被动皮肤过敏试验反应耳廓蓝染与血液抗体IgE和IgG水平的研究[J].中成药，2014，36(11)：2242-2247.

[6]凌科，张建民，关晶.清紫颗粒对小鼠被动皮肤过敏反应的影响[J].北京医学，2010.32(4)：316-318.

[7]佟岩.杨梅素对小鼠被动皮肤过敏反应的影响[J].沈阳药科大学学报，2009，26(10)：822-825.

[8]高天红，朴晋华，王婷婷.鱼金注射液被动皮肤过敏试验及对血清IgE的影响[J].山西医科大学学报，2011.42(6)：477-479.

[9]张婷，叶建洲，唐浩然，等.傣药“雅解沙把”抗变态反应的实验研究[J].云南中医学院学报，2012，35(2)：5-7.

Effect ofYajianshabaon Passive Cutaneous Allergy of Mice with the Same Kind

WANG Wei-li, DUAN Xiao-hua, ZGHANG Chao, CHEN Pu, CHEN Qing-hua, ZHENG Jin

(YunnanUniversityofTraditionalChineseMedicine,Kunming650500,Yunnan)

Objective: To observe the passive cutaneous anaphylaxis (PCA) and blood immunoglobulin E (IgE) effect ofYajianshabaon ovalbumin (OVA) induced mice of the same kind. Methods: Balb/c mice were randomly divided into a normal group, a model group, a chlorpheniramine group andYajianshabalow and high dose groups. The mice were administered with corresponding drugs. OVA subcutaneous injection was given to induce to allergy. OVA antibody serum of the rats was prepared. Each corresponding group was injected with serum antibodies to cause 48 hour passive allergy. The mice tails of each group were given intravenous injection of corresponding 0.5 % Evans blue solution to observe the mouse ear Aizen situation and determine the absorbance (OD). After the last allergy, serum was separated and IgE ELISA kits made by Cusabio Biotech Co., Ltd were used for detection. Results: Compared with the normal group, OD values of the model group significantly increased (P<0.05). Compared with the model group, the OD value ofYajianshabahigh-dose group significantly reduced (P<0.05). Compared with the model group, the IgE serum contents of the chlorpheniramine group and theYajianshabahigh-dose group significantly decreased, and the difference was statistically significant (P<0.05). TheYajianshabalow-dose group showed a trend to lower mouse serum IgE levels, but the difference was not statistically significant (P>0.05). Conclusion:Yajianshabahas an anti-allergic effect and its mechanism has something to do with abnormal reaction of inhibition type I .

Key words:Yajianshaba, passive skin allergy, IgE

(1)国家自然科学基金 傣医解药“雅解沙把”解“食物毒”、“药物毒”的作用机制研究(NO：81160555)；(2)云南省卫生厅民族医药文献整理及中药民族药院内制剂研发项目“基于文献和实验的傣医雅解理论整理研究”(KY14)< class="content">作者简介：王维丽(1991-)，女，云南大理人，研究生，研究方向：中药药理与应用。

王维丽(1991-)，女，云南大理人，研究生，研究方向：中药药理与应用。

△通信作者：郑进，E-mail：zhengjinynkm@126.com

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1007-2349(2015)09-0061-03

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