藤茶双氢杨梅素对动脉粥样硬化大鼠血脂代谢及抗氧化作用的影响*

梁柱第，曾宪彪，韦桂宁，何飞，吕纪华，苏华，韦宝伟

(1.广西壮族自治区药品不良反应监测中心，南宁 530021；2.广西中医药研究院，南宁 530022)

藤茶双氢杨梅素对动脉粥样硬化大鼠血脂代谢及抗氧化作用的影响*

梁柱第1，曾宪彪2，韦桂宁2，何飞2，吕纪华2，苏华2，韦宝伟2

(1.广西壮族自治区药品不良反应监测中心，南宁 530021；2.广西中医药研究院，南宁 530022)

目的 探讨藤茶双氢杨梅素对动脉粥样硬化(AS)大鼠血脂、抗氧化作用的影响。方法 健康SPF级雄性 Wistar 大鼠60 只，随机分正常对照组、模型对照组、阳性对照组及双氢杨梅素小剂量组和大剂量组，每组12只。除正常对照组外，其他组大鼠饲养高脂饲料+腹腔注射维生素D3，复制动脉粥样硬化模型。阳性对照组灌胃辛伐他汀5 mg·kg-1，双氢杨梅素大剂量组、小剂量组分别灌胃广西藤茶双氢杨梅素40，10 mg·kg-1，正常对照组和模型对照组灌胃等体积纯化水，每天1次，连续24 周。检测大鼠血清血脂、抗氧化作用指标。结果 与模型对照组比较，双氢杨梅素大剂量组、小剂量组的三酰甘油由(191.65±101.10)mg·L-1减少至(111.10±29.29)，(120.55±38.12)mg·L-1；总胆固醇由(151.64±33.62)mg·L-1减少至(148.49±30.14)，(118.90±27.38)mg·L-1；高密度脂蛋白胆固醇由(1.29±0.68)mmol·L-1提高到(2.10±0.70)，(1.62±0.61)mmol·L-1；低密度脂蛋白胆固醇由(5.01±1.33)mmol·L-1下降至(3.97±0.78)，(4.28±0.79)mmol·L-1；超氧化物歧化酶活性由(141.03±42.52)U·mL-1提高到(187.97±42.08)，(150.99±46.17)U·mL-1；丙二醛由(20.51±3.81)nmol·mL-1下降至(17.64±1.54)，(18.52±3.42)nmol·mL-1，差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。结论 藤茶双氢杨梅素可改善AS大鼠血脂水平和提高抗氧化作用，对AS具有一定的防治作用。

藤茶双氢杨梅素；动脉粥样硬化；血脂；抗氧化

广西藤茶系葡萄科蛇葡萄植物显齿蛇葡萄[Ampelopsisgrossedntata(Hand - Mazz)W.T.Wang]的茎叶，其味甘淡，具清热利湿、平肝降压、活血通络之功效。主治痢疾、泄泻、小便淋痛、高血压、头昏目胀、跌打损伤等症。藤茶总黄酮及其主要成分双氢杨梅素在心血管疾病的防治方面具有显著的药理活性，对氧自由基有清除作用，并能预防性对抗超氧阴离子自由基引起的氧化性损伤，具有抗氧化活性[1-3]。本课题组研究表明，广西藤茶总黄酮可显著改善动脉粥样硬化大鼠血脂水平，对动脉粥样硬化具有防治作用[4]。双氢杨梅素是藤茶总黄酮的主要活性成分，但目前有关其抗动脉粥样硬化的文献报道不多。笔者在本研究中观察藤茶双氢杨梅素对模型大鼠血清血脂、抗氧化各指标的影响。

1 材料与方法

1.1 动物 雄性Wistar大鼠，体质量150～180 g，无特定病原体(specific pathogen free,SPF)级，由广西医科大学实验动物中心提供，实验动物生产许可证号：SCXK(桂)2003-0003。动物观察室：温度(25±1)℃，相对湿度(60±10)%。实验动物使用许可证号：SYXK(桂)2013-0005。

1.2 试药 广西藤茶双氢杨梅素，从广西藤茶提取分离，经高效液相色谱仪测定，纯度为97.65%；辛伐他汀片(济南利民制药有限公司，批号：20110511)；胆固醇(上海源聚生物科技有限公司，批号：111025)；胆酸盐(上海源聚生物科技有限公司，批号：110728)；丙硫氧嘧啶(上海源聚生物科技有限公司，批号：110810)；维生素D3注射液(上海通用药业股份有限公司，批号：110905)；高密度脂蛋白胆固醇(high density lipoprotein cholesterol，HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(low density lipoprotein cholesterol，LDL-C)、三酰甘油(triglycerides，TG)、总胆固醇(total cholesterol，TC)试剂盒，均由北京北化康泰试剂有限公司提供，批号分别为：20120105，20110801，20110830，20111103；超氧化物歧化酶(superoxide dismutase，SOD)、丙二醛(malonaldehyde，MDA)试剂盒，均由南京建成生物工程研究提供，批号分别为：20120211，20120207。

1.3 主要仪器 722型可见分光光度计(上海精密科学仪器有限公司)；iMark酶标仪(Japan Bio-rad公司)；TDL-5000B型低速冷冻离心机(上海安亭科学仪器厂)；FA1004电子天平(上海精科天平仪器厂)。

1.4 动物造模与给药方法 取Wistar大鼠60只，体质量150～180 g，适应实验场地1周后，将大鼠随机分为5组，每组12只，即正常对照组，模型对照组，阳性对照组，双氢杨梅素大、小剂量组。按文献[4]报道方法进行动脉粥样硬化造模：腹腔注射维生素D3注射液60万U·kg-1，同时喂高脂饲料(高脂饲料：5%胆固醇，0.5%胆酸钠，10%猪油，5%蛋黄粉，0.2%丙硫氧嘧啶及79.3%基础饲料配制)，正常对照组给予等体积纯化水，同时喂正常饲料。阳性对照组灌胃辛伐他汀5 mg·kg-1，双氢杨梅素大剂量组、小剂量组分别灌胃广西藤茶双氢杨梅素40，10 mg·kg-1，正常对照组和模型对照组灌胃等体积纯化水，每天1次，连续24 周。期间，抽样检测大鼠肝脏及主动脉弓，以观察动脉粥样硬化模型是否形成。末次给药前，禁食12 h，给药1 h后以乌拉坦麻醉动物，腹主动脉采血，测定血脂水平和SOD、MDA水平。分离主动脉弓，苏木精-伊红(hematoxylin and eosin，HE)染色。

2 结果

2.1 AS模型的判定 造模24周后，与正常对照组比较，模型对照组大鼠体质量显著降低；大鼠主动脉管壁呈局灶性隆起，内膜明显增厚，斑块内可见大量泡沫细胞及多层排列，内皮细胞缺失或不连续，中膜平滑肌增生。见图1。

2.2 对血脂的影响 与正常对照组比较，模型对照组TG、TC、LDL-C显著升高，HDL-C显著降低(P<0.01)；与模型对照组比较，双氢杨梅素大剂量组TG、LDL升高，HDL-C降低(P<0.05)。见表1。

图1 正常对照组和模型对照组主动脉弓病理图(HE，×200)

A.normal control group；B.model control group

Fig.1 Pathology of aortic arch in normal control group and model control group(HE，×200)

2.3 MDA、SOD水平 与正常对照组比较，模型对照组大鼠MDA水平显著升高，SOD活性显著降低(P<0.01或P<0.05)；与模型对照组比较，双氢杨梅素大剂量组SOD活性显著提高(P<0.05)。见表2。

3 讨论

动脉粥样硬化是一组动脉硬化血管病中常见的最重要的一种，是威胁人类健康的第一杀手。目前临床上应用的抗动脉粥样硬化药物主要有调血脂药、抗氧化药、多烯脂肪酸类及保护动脉内皮药等。但是，大多是化学合成药品，其药理作用单一，服用时间长，且大多存在肝肾损伤等副作用，加之部分抗动脉粥样硬化药物价格较高，使临床应用受到很大限制。因此，研制高效低毒的抗动脉粥样硬化药物是当务之急。动脉粥样硬化病因复杂，受多种因素的影响，发病机制涉及脂质代谢及血栓形成、氧化应激、炎症、免疫、代谢等多领域的受体、生物大分子及关键酶等多个方面[6-11]。脂质代谢和动脉粥样硬化发生发展密切相关，脂质包括TG、TC、磷脂和非酯化脂肪酸，TG高是动脉粥样硬化的危险因素，LDL-C的含量与动脉粥样硬化的发生呈正相关，HDL-C可促进胆固醇代谢，有抗动脉粥样硬化作用，与动脉粥样硬化的发生呈负相关[11]。氧化应激是动脉粥样硬化的一个十分有害的致病因素，当氧化系统和抗氧化系统失衡，氧化程度超出氧化物的清除，将LDL-C成为氧化型LDL-C(ox-LDL-C)，刺激内皮细胞分泌多种炎性因子，诱导单核细胞粘附、迁移进入动脉内膜，转化成巨噬细胞，加速动脉粥样硬化的发展[12-14]。

藤茶双氢杨梅素是广西藤茶的主要活性成分之一，具有丰富的药理活性。近年来，双氢杨梅素在抗心血管病等方面表现有良好的药理活性，但其抗动脉粥样硬化方面的活性更加引起人们重视。通过观察藤茶双氢杨梅素对大鼠动脉粥样硬化模型的影响，结果显示，藤茶双氢杨梅素可显著降低动脉粥样硬化大鼠的TG、LDL-C，提高HDL-C水平，可显著提高SOD活性。提示，藤茶双氢杨梅素可影响动脉粥样硬化大鼠脂质的代谢，降低TG水平，可减少“血稠”的机会及其由此引起的血管壁上小斑块的形成。降低LDL-C水平，可减少ox-LDL-C对血管上皮细胞、平滑肌细胞的细胞毒作用，减少内源性一氧化氮的产生。增高HDL-C水平，可对抗低密度脂蛋白氧化修饰的作用，减少脂质的摄取沉积，促使胆固醇从血管壁排出，减少斑块破裂。增高SOD活性，可降低脂质过氧化物的含量，清除人体内过多的有害的氧自由基。诸多因素都对动脉粥样硬化具有显著的对抗作用，显示出多靶点性作用。其药理作用的分子机制及物质基础还有待进一步研究。

表1 5组大鼠血清TG、TC、LDL-C、HDL-C的检测值

与正常对照组比较，*1P<0.05，*2P<0.01；与模型对照组比较，*3P<0.05；

Compared with normal control group*1P<0.05，*2P<0.01；compared with model control group，*3P<0.05

表2 5组大鼠血清MDA和SOD水平的测定值

与正常对照组比较，*1P<0.05，*2P<0.01；与模型对照组比较，*3P<0.05

Compared with normal control group*1P<0.05，*2P<0.01；compared with model control group，*3P<0.05

[1] 黄秋洁，叶勇，欧贤红，等.两种药用植物总黄酮体外抗氧化活性比较[J].医药导报，2013，32(5)：576-578.

[2] 唐瑛，罗祖友，严奉伟，等.藤茶总黄酮对小鼠的体内外抗氧化作用研究[J].中国医院药学杂志，2006，26(12)：1449-1452.

[3] 何桂霞，杜方麓，杨伟丽，等.藤茶总黄酮清除氧自由基与抗脂质过氧化作用[J].中药材，2003，26(5)：338-340.

[4] 曾宪彪，韦桂宁，何飞，等.藤茶总黄酮对动脉粥样硬化大鼠血脂及血液流变学的影响[J].重庆医学，2014，43(5)：518-521.

[5] 赵娟，李相军，孙波.维生素D3联合高脂饲料建立大鼠动脉粥样硬化模型[J].实用医学杂志，2009，25(21)：3569-3571.

[6] 文可明.高三酰甘油血症在动脉粥样硬化发生中的作用及致冠心病的危险性[J].临床中老年保健，2002，5(2)：155-156.

[7] 霍记平，汤强，胡本容，等.长期摄入乙醇对大鼠心血管系统与肝脏的影响[J].医药导报，2009，28(11)：1420-1423.

[8] YOSHIDA H.Front line of oxidized lipoproteins：role of oxi-dized lipoproteins in atherogenesis and cardiovascular disease risk[J].Rinsho Byori，2010，58(6)：622-630.

[9] MEYERS C D，KASHYAP M L.Pharmacologic elevation of high-density lipoproteins：recent insights on mechanism of action and atherosclerosis protection[J].Curr Opin Cardiol，2004，19(4)：366-373.

[10] SUPERKO H R.New aspects of risk factors for the deve-lopment of atherosclerosis，including small low-density lipoprotein，homocyst(e)ine，and lipoprotein(a)[J].Curr Opin Cardiol，1995，10(4)：347-354.

[11] DAVIDENKOVA E F，SHAFRAN M G.Atherosclerosis and the process of lipid peroxidation[J].Vestn Akad Med Nauk SSSR，1989，(3)：10-18.

[12] 徐索文，刘培庆.C-反应蛋白与动脉粥样硬化炎症的关系[J].中国病理生理杂志，2009，25(12)：2487-2490.

[13] MORAWIETZ H.Acromegaly and oxidative stress：impact on endothelial dysfunction and atherosclerosis[J].Horm Metab Res，2013，45(4)：255-256.

[14] INCALCATERRA E，ACCARDI G，BALISTRERI C R，et al.Pro-inflammatory genetic markers of atherosclerosis[J].Curr Atheroscler Rep，2013，15(6)：329-330.

DOI 10.3870/yydb.2015.06.002

Effects of Dihydromyricetin on Blood Lipid Metabolism and Antioxidation in Atherosclerosis Rats

LIANG Zhudi1，ZENG Xianbiao2，WEI Guining2，HE Fei2，LYU Jihua2，SU Hua2，WEI Baowei2

(1.CenterforDrugAdverseReactionsMonitoringofGuangxiZhuangAutonomousRegion,Nanning530021,China； 2.InstituteofTraditionalMedical&PharmaceuticalSciencesofGuangxiZhuangAutonomousRegion,Nanning530022,China)

Objective To observe the effect of dihydromyricetin ofampelopsisgrossedentataon lipid metabolism and antioxidation in atherosclerosis (AS) rats. Methods Sixty Wistar rats were randomly divided into five groups (n=12 each): normal control group, model control group, positive control group, high dose dihydromyricetin group (40 mg·kg-1) and low dose dihydromyricetin group (10 mg·kg-1).Except normal control group, rats in the other groups were injected with a single dose of vitamin D3(600 000 U·kg-1) and loaded with high fat diet to establish AS model.Simvastatin (5 mg·kg-1) was intragastrically administered to positive control group.High and low dose dihydromyricetin groups

intragastric administration of 40 and 10 mg·kg-1dihydromyricetin, respectively.Equal volume of purified water was given to normal and model control group.After 24 weeks of administration, serum levels of lipids, activities of superoxide-dismutase (SOD) and malonicdialdehyde (MAD) were determined. Results As compared with model control group, triglycerides (TG) of high and low dose dihydromyricetin groups was decreased [(191.65±101.10)vs.(111.10±29.29) and (120.55±38.12) mg·L-1, respectively], total cholesterol (TC) was decreased [(151.64±33.62)vs.(148.49±30.14) and (118.90±27.38) mg·L-1], and high density lipoprotein cholesterol (HDL-C) was increased [(1.29±0.68)vs.(2.10±0.70) and (1.62±0.61) mmol·L-1], low density lipoprotein cholesterol (LDL-C) was decreased [(5.01±1.33)vs.(3.97±0.78) and (4.28±0.79) mmol·L-1], activity of SOD was increased [(141.03±42.52)vs.(187.97±42.08) and (150.99±46.17) U·mL-1], and MDA was decreased [(20.51±3.81)vs.(17.64±1.54) and (18.52±3.42) nmol·mL-1], with significant differences (P<0.05,P<0.01). Conclusion Dihydromyricetin can reduce the level of serum lipid, improve antioxidation activity, and has therapeutic effect for atherosclerosis.

Dihydromyricetin； Atherosclerosis； Blood lipid； Antioxidation

2014-04-22

2014-06-19

*国家自然科学基金资助项目(81360653)；广西自然科学基金资助项目(2011GXNSFA018258)；广西中医药管理局中医药科技专项(GZKZ09-48)

梁柱第(1975-)，男，广西桂平人，主管药师，从事药品不良反应监测和安全性评价研究。电话：0771-5884912，E-mail：liangzhudi@163.com。

韦桂宁(1973-)，男，广西都安人，副主任药师，硕士，从事中药药理与毒理学研究研究。电话：0771-5869102，E-mail：weiguining2004@163.com。

R285.5；R543.5

A

1004-0781(2015)06-0710-04