免疫组化染色的操作技巧和注意事项

鞠学萍

免疫组化染色的操作技巧和注意事项

鞠学萍

【摘要】目的 对免疫组化染色的操作以及注意事项进行探讨，分析存在的问题，提供解决对策。 方法 2010~2011年我院共有200例患者接受免疫组化染色，共有60例问题标本，我们对这些问题标本进行了研究分析，采取科学的处理方式应对。结果 通过对这些问题样本进行了研究分析，针对操作过程中的组织准备、蜡块选择与切片质量、抗原修复以及染色等提出了应对措施和科学建议。结论 免疫组化染色的每一个步骤和细节都会对染色的结果产生影响，所以应该要对染色的问题引起重视，提升染色的质量。

【关键词】免疫组化；技术方法；质量控制；抗原修复

作者单位：163316 黑龙江省大庆市第四医院

Operating Skills and Precautions of Immunohistochemical Staining

JU Xueping, Fourth Hospital of Daqing City, Daqing 163316, China

[Abstract]Objective To investigate the operations and precautions of immunohistochemical staining. Analysis of existing problems and provide Solutions. Methods 200 patients underwent immunohistochemical staining from 2010 to 2011 in our hospital, a total of 60 cases of the problem specimens,We have studied these issues specimens, taking a scientific approach to deal with. Results The analysis of these issues in our hospital samples. During the operation of the organization for the preparation, selection and slice quality wax block, antigen retrieval and staining proposed countermeasures and scientific advice. Conclusion Every step and detail of Immunohistochemical staining will have an impact on the results of staining, So the stained problem should be attention, improve the quality of staining.

[Key words]Immunohistochemistry, Technical methods, Quality control, Antigen retrieval

免疫组化（IHC）技术是上世纪80年代开始在我国使用，目前也有几十年的发展历史，是病理科室非常重要的一项应用技术。综合性操作会让反应步骤增加，受到的影响因素也会增加，同时要求技术员能够有比较扎实的操作技术，在临床个体化治疗应用中非常重要。免疫组化技术的问题也是比较突出，本文就200例免疫组化染色标本进行了探讨，对其中的60例问题标本进行了分析，给出了应对策略。

1　免疫组化染色不理想的原因分析及改进措施

1.1 大分子化学结构非常稳定，水肿以胶状存在，不容易被破坏，所以体内可以存在很长的时间，对淋巴细胞可以产生持续的刺激。抗体是人体重要防御机制，在受到抗原的刺激就会由浆细胞分泌一种蛋白质，通过稀释抗体可以实现该蛋白质疏水性的变化，如果PH和抗体等电点接近，疏水性会非常大[1]。

1.2 抗原和抗体的反应会引起免疫系统的免疫应答反应，产生特异性物质，抗体是在刺激源的影响下，浆细胞产生的特异性蛋白质，如果组织内有其他的相同抗原就会和抗体产生反应，多克隆抗体具有很强适应性，在使用的时候应该比较注意，避免其发生交叉反应。

1.3 抗原决定簇被封闭后会引起抗原间的相交，需要有效的进行抗原修复。酶消化以及热修复是使用比较多的方式，除此外，微波和高压高温也是经常用到的方式。

1.4 实验结果会因为组织固定不恰当而受到影响，结果的好坏和抗原保持之间的联系非常紧密[2]；固定不当的话，组织会出现自溶、变干硬、形变，如果自溶，抗原必然会丢失，干硬则是变性的表现，都会造成抗原功能的改变，导致染色后脱色以及颜色不正确，因此体积要求非常严格。

2　IHC过程及注意事项

2.1 组织准备免疫组化要求

先将组织处理妥当，组织保存良好，组织和细胞的形态结构，抗原免疫活性值都能够确保正常，那么组织和固定进行处理的时候就要求比较严格，能够即时、必要处理。

2.2 蜡块选择与切片质量

对于脱水和包埋质量好的蜡块在选择上，能够充分的保证蜡膜的完整、均匀程度。通常切片的厚度要确保在3 μm之内，对于出现过厚的切片会导致与载玻片的粘附性不牢固，对于乳腺组织是人体中脂肪含量最多的部位之一，在高温和高压的修复处理作用时，容易产生脱片现象[3]。

2.3 进行抗原修复的时候，因为多聚赖氨酸分子以及组织切片的结合力存在，会给修复带来障碍，所以需要对其结合力进行减弱，才能够避免脱片。对修复液的选择也是非常重要的，温和的药物可以作为首选，常用的有枸橼酸修复液等。

2.4 染色中应注意的一些细节，把孵育盒放置在一个比较平稳的地方，不要使抗体液流到组织的另一侧，这会使结果呈现假阴性反应；另外抗体孵育盒里面要留有适量的蒸馏水，但水不宜过多，防止因水蒸汽在盒盖聚成水滴，掉落在切片上，造成抗体稀释；再有就是保持切片在整个染色过程中，一定要保持湿润，不要出现干片的现象。最后在加入抗体的时候，要把组织上的水弄干，避免抗体稀释影响检测结果。对于免

疫组化染色过程, 提出了主要的应对措施以及科学合理的建议。

3　讨论

免疫组化技术目前已成为病理科工作的重要组成部分，免疫组化对于疑难病例的诊断起到了决定性作用，尤其是对肿瘤的治疗方法以及药物的选择具有指导意义。大型医院均已采用自动化免疫组化染色仪，而大部分中小型医院仍然依靠人工操作。

人体抗体和抗原的结合存在非常高的特异性，免疫组织化学也是使用这样的原理，将组织以及细胞的化学物质提取后，当成抗原来进行动物抗体刺激，用刺激后组织和细胞产生的抗体来进行检测组织以及细胞同类抗原。免疫组化技术的过程和环节比较多，内容也比较复杂，在关键的地方符合标准后获得的检验结果才能够有效可靠，因此看似单一的技术，其实不是非常容易掌握的。现在的科学技术发展快速，临床中对于医护人员的能力要求也是越来越高，对各项标准和规范认真的执行，才可以促进免疫组化的发展，让患者的临床治疗获得可靠的帮助。本文对免疫组化染色的操作技巧和注意事项进行了简单的探讨分析，根据笔者的经验进行了一些阐述，给出了一些建议，希望能够给免疫组化的应用提供一些参考信息。

参考文献

[1]李德本，王涛，姜骏. 免疫组化染色的操作技巧和注意事项[J].临床与实验病理学杂志，2011，27(11)：1260-1261.

[2]周会芹，杨江辉，余摇琦，等. 不同组织固定液对免疫组化结果的影响[J]. 诊断病理学杂志，2009，16（6）：478.

[3]许摇力，吴摇珊，杨清海，等. 免疫组化技术（七）[J]. 诊断病理学杂志，2010，17（2）：160.

doi：10.3969/j.issn.1674-9308.2015.18.030

【文章编号】1674-9308（2015）18-0048-02

【文献标识码】B

【中图分类号】R446.6