不同冷冻原因FET周期移植结局的分析

李 伟，施文浩，任文娟，李明昭，师娟子

(陕西省妇幼保健院，陕西 西安710003)

不同冷冻原因FET周期移植结局的分析

李 伟，施文浩，任文娟，李明昭，师娟子

(陕西省妇幼保健院，陕西 西安710003)

目的 分析辅助生殖技术中不同冷冻原因的玻璃化冻融胚胎移植结局。方法 对2009年3月至2011年5月1 186个玻璃化冻融胚胎移植周期进行回顾性统计学分析，根据不同的冷冻原因分为预防卵巢过度刺激综合征(OHSS)全胚冷冻组(A组)、新鲜周期移植后剩余胚胎冷冻组(B组)、宫腔积液原因取消移植胚胎冷冻组(C组)和其他原因胚胎冷冻组(D组)，分析各组的临床妊娠率。结果 A、B、C、D组的妊娠率分别为64.2%、45.5%、44.0%、51.5%，A组与B组、C组均有显著性差异(χ2值分别为35.080、4.119，均P<0.05)。但与D组无显著性差异(χ2=2.113，P>0.05)，B组与C组、D组间均无显著性差异(χ2值分别为0.022、0.461，均P>0.05)。结论 对于有过激风险和宫腔积液的患者，进行冻融胚胎移植是一种有效的助孕方法。

冷冻原因；冻融胚胎移植；妊娠率；辅助生殖技术

冻融胚胎移植(frozen-thawed embryo transfer，FET)是一项重要的辅助生殖技术。FET能够增加一次取卵周期妊娠的几率，防止胚胎的浪费，还可以为某些不适合移植的病人提供择期移植的机会。自Trounson等首次采用冻融胚胎移植获得成功妊娠至今，这项技术得到了不断地改进和发展，已经广泛的用于各个生殖中心。胚胎冷冻的原因有很多，本研究通过对大量临床样本的分析，探讨不同冷冻原因的玻璃化冻融胚胎移植结局。

1 资料与方法

1.1 临床资料

回顾性分析2009年3月5日至2011年5月31日在陕西省妇幼保健院生殖中心接受玻璃化冻融胚胎移植的1 186个周期。根据不同的冷冻原因分为：预防卵巢过度刺激综合征(ovarian hyperstimulation syndrome，OHSS)全胚冷冻组的372个周期(A组)；新鲜周期移植后剩余胚胎冷冻组的756个周期(B组)；宫腔积液原因取消移植胚胎冷冻组的25个周期(C组)；其他原因胚胎冷冻组的33个周期(D组)。所有周期均为受精后72小时玻璃化冷冻胚胎。本文相关数据来源及试验设计均得到医院伦理道德委员会批准。

1.2 方法

1.2.1 胚胎质量分级及冷冻胚胎选择

本中心是根据胚胎卵裂球数量、均匀性以及碎片的量综合起来对第3天的胚胎评级[1-2]。基于卵裂球的数量的评级：8～10评Ⅰ级；6～7或大于10评Ⅱ级；4～5评Ⅲ级；小于4评Ⅳ级。基于卵裂球体积均匀性的评级：均匀评Ⅰ级；不均匀评Ⅱ级；非常不均匀评Ⅲ级。基于胚胎的碎片量的评级：没有碎片评Ⅰ级；碎片量<20%评Ⅱ级；碎片量20%～30%评Ⅲ级；碎片量≥30%评Ⅳ级。联合上面3个评价标准，选择评级为Ⅰ～Ⅲ的胚胎进行玻璃化冷冻。FET移植胚胎的级别为Ⅰ～Ⅲ；优胚级别为Ⅰ～Ⅱ。

1.2.2 胚胎玻璃化冷冻方法

采用Vitrification 试剂盒(Kitazato，Japan)进行玻璃化冷冻，冷冻液分为ES液和VS液，4℃保存。使用前在室温(25℃)条件下平衡30分钟。将胚胎吸入ES液，室温下放置约5分钟。胚胎卵裂球出现皱缩再扩张，待胚胎卵裂球扩张至原体积的80%以上，将其放入VS液。然后胚胎放置于有患者信息的无菌载杆上，迅速投入液氮中。

1.2.3 胚胎解冻

胚胎解冻于移植前一天的下午进行。采用Vitrification试剂盒(Kitazato，Japan)，解冻液分为TS液、DS液，WS1液和WS2液，4℃保存。使用前，TS液在37℃平衡30分钟，其他解冻液在室温(25℃)条件下平衡30分钟。将冷冻载杆从液氮中取出，迅速将前端叶片浸入TS液中，1分钟内胚胎脱落到TS液中。将胚胎依次移入DS、WS1和WS2液中，分别放置3分钟、5分钟、5分钟。转入预平衡好的培养液中观察，有≥50%细胞数目存活的胚胎记为复苏，其余的丢弃。随后放入37℃，6%CO2培养箱中培养过夜。

1.2.4 胚胎移植

采用B超引导下移植。

1.3 统计学方法

采用SPSS 16.0统计软件分析，计量资料以均数±标准差表示，组间均数的比较方法采用t检验，计数资料的比较方法采用χ2检验，以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 不同冷冻原因冻融胚胎移植周期的基本情况

本研究的1 186个FET周期中，预防OHSS组占372周期，剩余胚胎冷冻组占756周期，宫腔积液组占25周期，其他原因组占33周期。在促排卵年龄方面，宫腔积液组患者最高，与另3组相比均有显著性差异(t值分别为3.775、2.554、2.361，均P<0.05)；剩余胚胎组与预防OHSS组相比有显著性差异(t=5.715，P<0.05)剩余胚胎组的胚胎冷冻时间最长，与预防OHSS组和其他组(D组)相比均有显著性差异(t值分别为8.212、4.681，均P<0.05)。对移植时内膜厚度而言，其他组(D组)均显著性高于预防OHSS组和宫腔积液组(t值分别为2.445、2.651，均P<0.05)；剩余胚胎组显著高于预防OHSS组(t=2.322，P<0.05)。剩余胚胎组的移植胚胎数最多，与预防OHSS组和其他组(D组)相比均有显著性差异(t值分别为8.207、3.255，均P<0.05)。对于移植优胚数而言，剩余胚胎组最少，与预防OHSS组和宫腔积液组相比均有显著性差异(t值分别为4.417、3.116，均P<0.05)，见表1。

2.2 不同冷冻原因冻融胚胎移植周期的妊娠结局

在种植率上，预防OHSS组最高，剩余胚胎组最低，两组间差异显著(χ2=43.364，P<0.05)。在妊娠率上，也是预防OHSS组最高，与剩余胚胎组和宫腔积液组相比均有显著性差异(χ2值分别为35.080、4.119，均P<0.05)，见表2。

注：a表示与预防OHSS组比差异显著(P<0.05)；b表示与剩余胚胎冷冻组比差异显著(P<0.05)；c表示与宫腔积液组比差异显著(P<0.05)。

表2 不同冷冻原因冻融胚胎移植周期的移植结局(%)

Table 2 The outcomes of FET with different frozen reasons(%)

注：a表示与预防OHSS组比差异显著(P<0.05)。

3 讨论

3.1 胚胎冷冻原因及其妊娠结局

OHSS是辅助生殖过程中非常严重的并发症，发生于因排卵障碍而进行诱发排卵时或控制性超排卵后[3]。因其发病机制还没有完全阐明，目前为止还没有明确的治疗方法，主要以预防为主。为了预防严重的OHSS而进行全胚胎冷冻的方法被越来越多的应用在辅助生殖领域。近期研究显示，预防OHSS全胚冷冻后行FET与新鲜周期移植相比临床结局没有明显差异，不过全胚冷冻可以预防中重度OHSS的发生，降低患者的治疗风险[4-5]。研究发现，全胚冷冻后首次移植组与新鲜移植组的临床妊娠率差异不显著(63.89% vs 58.48%)，但能够避免迟发型OHSS[6]。而Absalan等[7]发现对于OHSS的患者，冻融胚胎移植的临床妊娠率显著高于新鲜胚胎移植(63.1% vs 55.1%)。另有研究表明，全胚胎冷冻可以预防中、重度OHSS 的发生，并且其后行FET比同期新鲜周期有更高的妊娠率[8]。

本研究的1 186个FET周期中，主要的冷冻原因是预防OHSS和剩余胚胎冷冻。预防OHSS组的种植率和妊娠率要明显高于剩余胚胎组，这可能是由于预防OHSS组冻存的胚胎质量比剩余胚胎组高，由表1可见，预防OHSS组移植的优胚数明显高于剩余胚胎冷冻组，而且前者的促排卵年龄低于后者组，胚胎的冻存时间也较短，这些可能是预防OHSS组比剩余胚胎冷冻组移植结局好的原因。宫腔积液组与预防OHSS组相比，其妊娠率明显低于后者，可能是由于促排卵年龄高的原因。对于其他原因冷冻组，新鲜周期取消移植的原因主要包括内膜因素、发热、出水痘、意外等，该组基本情况与预防OHSS组一致，种植率和妊娠率也没有明显差异。

3.2 移植后剩余胚胎的冷冻

将新鲜周期移植后剩余的可用胚胎冷冻，若新鲜周期未能成功，则行FET治疗，这种方法可以最大限度的提高一个促排周期的效率，避免胚胎的浪费，也可以减少患者的治疗费用。苏燕等[9]的研究显示，剩余胚胎冷冻后行FET治疗有44.4%的临床妊娠率。在本研究中，B组有26%的种植率和45.5%的临床妊娠率。这就表明剩余胚胎冷冻后FET是一种可以选择的有效方法。

在辅助生殖过程中，宫腔积液会影响子宫内膜对胚胎的接受性，从而影响种植率与妊娠率。因此，对于有宫腔积液的患者可以取消新鲜周期移植，将其胚胎冷冻，择期行冻融胚胎移植，这样可以有效的防止宫腔积液的影响。在我们的研究中，宫腔积液组的临床妊娠率为44.0%，虽然低于预防OHSS组，但这可能是由于患者的促排卵年龄高所致。因此，对于有宫腔积液的患者可以选择将胚胎冷冻择期移植。

综上所述，在辅助生殖过程中，有各种原因需要进行胚胎冷冻，然后择期移植。随着胚胎冷冻和解冻方法的优化，冻融胚胎移植的结局也越来越好。尤其是对于有过激风险和宫腔积液的患者，进行冻融胚胎移植是很好的助孕方法。

[1]Hardarson T, Hanson C, Sjögren A,etal. Human embryos with unevenly sized blastomeres have lower pregnancy and implantation rates: Indications for aneuploidy and multinucleation [J].Human Reproduction,2001,16(2):313-318.

[2]Van Royen E,Mangelschots K,Vercruyssen M,etal.Multinucleation in cleavage stage embryos [J].Human Reproduction ,2003,18(5):1062-1069.

[3]Chen S U,Chen R J, Shieh J Y,etal. Human chorionic gonadotropin up-regulates expression of myeloid cell leukemia-1 protein in human granulosa-lutein cells:Implication of corpus luteum rescue and ovarian hyperstimulation syndrome[J].J Clin Endocrinol Metab,2010,95(8):3982-3992.

[4]鲁振宇, 徐凤琴, 张云山,等. OHSS高危胚胎移植与全胚胎冷冻移植不孕患者结局分析[J]. 天津医药,2010,38(3): 189-191.

[5]许伟标, 杨桂艳, 郑煜丽. 卵巢过度刺激综合征全胚胎冷冻后首次冻融移植临床分析[J].中华临床医师杂志,2011,5(1): 236-238.

[6]贺玲, 陈雷宁, 李红,等.全胚胎冷冻后首次移植对卵巢过度刺激综合征高危患者临床结局的影响[J].妇产与遗传(电子版),2012,2(1):20-23.

[7]Absalan F, Ghannadi A, Kazerooni M.Reproductive outcome following thawed embryo transfer in management of ovarian hyperstimulation syndrome[J].J Reprod Infertil，2013，14(3):133-137.

[8]赵亚琼, 金锐, 王莹, 等.全胚冷冻在预防OHSS中的价值探讨[J]. 宁夏医学杂志,2013, 35(9): 823-824.

[9]苏雁, 张军强, 李秀玲,等. Cryotop玻璃化冷冻人类卵裂期胚胎的临床应用[J].江苏医药,2012, 38(4): 409-411.

[专业责任编辑：吕淑兰]

Analysis of the outcomes of FET with different frozen reasons

LI Wei, SHI Wen-hao, REN Wen-juan, LI Ming-zhao, SHI Juan-zi

(MaternalandChildHealthCareHospitalofShaanxiProvince,ShaanxiXi’an710003,China)

Objective To analyze the outcomes of the vitrified frozen-thawed embryo transfer (FET) with different frozen reasons in assisted reproductive technology. Methods A retrospective analysis was performed in 1 186 vitrified thawing cycles from March 2009 to May 2011. The cycles were divided into four groups according to different frozen reasons: frozing the whole embryos to avoid ovarian hyperstimulation syndrome (OHSS) (group A), frozing the surplus embryos after fresh transferring (group B), frozing the whole embryos for endometrial cavity fluid (ECF) (group C) and frozing the embryos for other reasons (group D). The pregnancy rate of different groups was analyzed. Results The pregnancy rate of group A, group B, group C and group D was 64.2%, 45.5%, 44.0% and 51.5%, respectively. The pregnancy rate of group A was significantly different from group B and group C (χ2value was 35.080 and 4.119, respectively, bothP<0.05), but it was not significantly different from group D (χ2=2.113,P>0.05). Group B was not statistically different from group C and group D (χ2value was 0.022 and 0.461, respectively, bothP>0.05). Conclusion FET is an effective method for the patients with the risk of OHSS and ECF.

frozen reasons, frozen-thawed embryo transfer (FET), pregnancy rate;assisted reproductive technology

2014-07-09

李 伟(1987-)，男，初级检验技师，硕士，主要从事胚胎工程研究。

师娟子，主任医师。

10.3969/j.issn.1673-5293.2015.01.043

R711.6

A

1673-5293(2015)01-0111-02