高效液相色谱法测定呋塞米片的含量

朱叶青

(内蒙古自治区呼和浩特食品药品检验所，内蒙古 呼和浩特 010020)

呋塞米片是常用的利尿药，收载于2010年版《中国药典》，原标准中呋塞米的含量测定采用分光光度法[1]。本试验中采用高效液相色谱(HPLC)法，结果证实，该方法准确、高效、可行。

1 仪器与试药

LC-2010A型高效液相色谱仪(日本岛津公司)。呋塞米对照品(中国药品生物制品检定所，批号为100544-200501);四氢呋喃供试品;乙腈为色谱纯，其余试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2．1 色谱条件与系统适用性试验

色谱柱:CAPCELL PAK C18MGⅡ柱(250 mm ×4．6 mm，5 μm);流动相:水-四氢呋喃-冰醋酸(60∶40∶0．8);柱温:30℃;检测波长:272 nm;进样量:20 μL。理论板数不低于4 000。在此条件下，色谱图见图1。

2．2 溶液制备

取本品20片，精密称定，研细，精密称取细粉适量(约相当于呋塞米10 mg)，置100 mL容量瓶中，加混合溶剂[冰醋酸22 mL，加乙腈-水(1∶1)至1 000 mL]适量，充分振摇使呋塞米溶解，并稀释至刻度，摇匀，用0．45 μm的滤膜滤过，取续滤液作为供试品溶液。精密称取呋塞米对照品适量，同法制备对照品溶液。

2．3 方法学考察

阴性干扰试验:按处方比例制备不含呋塞米的空白片，按供试品溶液制备方法制成阴性对照品溶液，按拟订色谱条件进样分析。结果该溶液在呋塞米峰对应位置无干扰，见图1。

线性关系考察:精密称取呋塞米对照品10．66 mg，置100 mL容量瓶中，用混合溶剂溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液，分别进样 2，10，20，30，40，50 μL，按拟订色谱条件测定。以峰面积(Y)对进样量(X)进行回归分析，得回归方程 Y=3．94×106X+8．45×104，r=0．999 9。结 果 表 明 ，呋 塞 米 进 样 量 在0．212 ～5．33 μg范围内与峰面积呈良好线性关系。

精密度试验:取同一呋塞米对照品溶液，重复进样5次。结果呋塞米平均峰面积为8 565 608，RSD为0．07%(n=5)，表明仪器精密度良好。

稳定性试验:取同一供试品溶液，每间隔1 h进样，共进样6次。结果平均峰面积为8 566 783，RSD为0．18%(n=6)，表明供试品溶液在6 h内稳定。

重复性试验:取同一批样品，精密称取5份，照样品测定项下方法测定。结果呋塞米的平均含量为97．46%，RSD为0．3%(n=5)，表明方法重复性良好。

图1 高效液相色谱图

加样回收试验:精密称取已知含量的样品9份，精密加入呋塞米对照品适量，按含量测定方法测定，计算回收率。结果见表1。

2．4 样品含量测定

取 3 批(批号分别为 1101003，1101007，100701，分别由江苏亚邦爱普森药业有限公司、天津力生制药股份有限公司、安徽云鹏制药有限公司生产)样品，按2010年版《中国药典(二部)》中方法测定其含量，3 批样品含量分别为 99．2% ，95．7% ，92．3%;而用 HPLC 法测定，其含量分别为 97．4%，92．8%，92．7% 。

表1 呋塞米加样回收试验结果(n=9)

3 讨论

取呋塞米对照品溶液，在200～300 nm波长处进行光谱扫描，结果在272 nm波长处有最大吸收，故选择272 nm为测定波长。曾采用不同比例的水-四氢呋喃-冰醋酸和甲醇-水-磷酸盐系统作为流动相进行分离[2-3]，结果表明，采用水-四氢呋喃-冰醋酸(60∶40∶0．8)作为流动相时，保留时间适宜，理论板数较高，分离效果好。

[1]国家药典委员会．中华人民共和国药典(二部)[M]．北京:中国医药科技出版社，2010:336．

[2]王 峰，陶巧凤．HPLC法测定呋塞米注射液中的有关物质及含量[J]．药物分析，2012，32(6):1 081-1 084．

[3]陈庆伟，陈华锋．高效液相色谱法测定呋塞米片的含量[J]．海峡药学，2006，18(2):54．