高效液相色谱法测定香卿止痛喷雾剂中槲皮苷和丹皮酚含量*

2014-07-14王曙东刘文雅

中国药业 2014年2期

王曙东，王争，刘文雅，李克

（中国人民解放军南京军区南京总医院，江苏南京 210002）

香卿止痛喷雾剂是医院研制的以红茴香和徐长卿为主要成分的透皮给药喷雾制剂。红茴香Illicium henryiDiels．为木兰科植物，常以根或根皮入药，槲皮苷是其主要活性组分，具有散瘀止痛、祛风除湿等功效，常用于治疗风寒湿痹、关节痛、腰腿痛、跌打伤痛等，对急慢性腰腿痛[1]、腰肌劳损[2]、软组织损伤[3]、梨状肌损伤综合征[4]等均有较好疗效。徐长卿为萝摩科植物徐长卿Cyuanchum panicalatum（Bge．）Kitag．的干燥根及根茎，具有祛风化湿、止痛止痒等功能，常用于治疗风湿痹痛、胃痛胀满、牙痛、腰痛、跌打损伤、荨麻疹、湿疹等。徐长卿所含主要活性成分为丹皮酚，具有镇痛、镇静作用，可使动物自发性活动减少，还具有抗菌消炎作用[5]。本试验中建立了用高效液相色谱法同时测定香卿止痛喷雾剂中槲皮苷和丹皮酚的分析方法。现报道如下。

1 仪器与试药

Waters高效液相色谱仪（1525双泵，2487紫外检测器，717自动进样器，Empower 2色谱软件）；KQ2200DB型数控超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）。香卿止痛喷雾剂（南京军区南京总医院制剂科自制，批号分别为 111220，111222，111224）；槲皮苷对照品（批号为111538－200403），丹皮酚对照品（批号为110708－200506），均来自中国药品生物制品检定所；甲醇为色谱纯级，水为双蒸水，其他试剂均为分析纯级。

2 方法与结果

2．1 色谱条件[6－9]

色谱柱：Hedera－ODS－2 C18柱（250 mm ×4．6 mm，5 μm）；流动相：甲醇－水－冰醋酸（45∶54∶1）；检测波长：274 nm；流速：1．0 mL ／min；柱温：25 ℃；进样量：20 μL；理论板数按槲皮苷和丹皮酚峰计算不低于2 000。

2．2 溶液制备

精密称取槲皮苷、丹皮酚对照品适量，置25 mL容量瓶中，加无水乙醇定容至刻度，制成槲皮苷、丹皮酚质量浓度分别为354．0，45．12 μg ／mL 的溶液，作为对照品贮备液。取复方喷雾剂0．7 mL，置25 mL容量瓶中，加无水乙醇适量，超声处理30 min，放冷至室温，加无水乙醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液。按处方比例及制备方法，制备缺槲皮苷和丹皮酚的阴性对照品溶液。

2．3 方法学考察

干扰试验：取对照品溶液、供试品溶液及阴性对照品溶液进样测定，色谱图见图1。可见在此色谱条件下，槲皮苷和丹皮酚分离度好，且阴性对照对测定无干扰。

图1 高效液相色谱图

线性关系考察：分别精密吸取槲皮苷、丹皮酚对照品溶液（354．0，45．12 μg ／mL）1，2，4，6，8，10 mL，置 25 mL 容量瓶中，以无水乙醇稀释至刻度，摇匀，精密吸取20 μL，注入液相色谱仪，按2．1项下色谱条件测定峰面积，以峰面积积分值（A）与对照品溶液质量浓度（C）进行线性回归，得回归方程，槲皮苷A＝2．32×107C－14 686，r＝0．999 8；丹皮酚A＝8．96×107C－42 269，r＝0．999 8。结果表明，槲皮苷与丹皮酚质量浓度分别在35．40 ～354．00 μg／mL 和 4．51 ～45．12 μg／mL 范围内与其峰面积呈良好线性关系。

精密度试验：取对照品溶液重复进样6次，分别测定两组分的峰面积。结果槲皮苷和丹皮酚的RSD分别为0．86%和1．37%。

重复性试验：精密吸取同一批香卿止痛喷雾剂6份，按供试品溶液制备及测定方法平行测定两组分的含量。结果槲皮苷和丹皮酚的RSD分别为0．53%和0．58%。

稳定性试验：取同一供试品溶液，分别于 0，2，4，6，8，10 h 时进样，测定两组分含量。结果槲皮苷和丹皮酚的RSD分别为0．91%和0．44%，表明供试品溶液在10 h内稳定。

加样回收试验：按高、中、低3个质量浓度分别精密吸取供试品溶液 3．0，2．5，2．0 mL，共 6 份，置 5 mL 容量瓶中，分别加入对照品贮备液 1．2，1．5，1．8 mL，再加无水乙醇适量，超声处理 30 min，放冷至室温，加无水乙醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液进样测定。结果见表1。