高效液相色谱法鉴别史国公药酒中羌活和红曲的研究

姚亮元黄 云戴 波*

（1 湖南千金湘江药业股份有限公司，湖南 株洲 412011；2 湖南省食品药品职业学院，湖南 长沙 410128）

高效液相色谱法鉴别史国公药酒中羌活和红曲的研究

姚亮元1黄 云2戴 波2*

（1 湖南千金湘江药业股份有限公司，湖南 株洲 412011；2 湖南省食品药品职业学院，湖南 长沙 410128）

目的建立高效液相色谱法鉴别史国公酒中的羌活和红曲的分析方法。方法采用高效液相色谱法进行检测。结果高效液相色谱法分别成功鉴别史国公酒中的羌活和红曲中成分，阴性无干扰。结论本法简便、准确、精确，适用于史国公酒中的羌活和红曲的鉴别。

史国公药酒；羌活；红曲；阿魏酸；洛伐他汀；高效液相色谱法

史国公药酒又名国公酒，为骨伤科用药。由川芎、当归、羌活、红曲等30味中药材组成的复方酒剂，具有祛风除湿，活血通络的功效。常用于风寒湿痹，骨节疼痛，四肢麻木[1]。阿魏酸是川芎、当归和羌活中的主要成分[2-4]，洛伐他汀是红曲中的主要成分[5]。现有标准采用理化鉴别，难以控制产品质量。由于处方药味多，有多组不同药材含有相同成分化合物，实验研究，薄层鉴别相互干扰，无法将薄层鉴别用于本品中川芎、当归、羌活等药材的鉴别。为了更好地控制该制剂的质量，确保用药安全、有效，提高现有的质量标准。本实验采用了高效液相色谱法分别鉴别史国公药酒中的羌活和红曲，操作简便，结果可靠。

1 材 料

1.1 仪器：Agilent 1100液相色谱仪（美国安捷伦公司，紫外检测器，自动进样器，色谱数据工作站）；XP205型电子分析天平（瑞士梅特勒公司）

1.2 试药：史国公药酒样品9批，批号分别为20060908、20060907、20060906、060301、061101、061201、061202、20040408、20040910；阿魏酸（供含量测定用，批号：110773-9910）；洛伐他汀（供含量测定用，批号：100600-200502）；羌活对照药材（供鉴别用，批号：120918-200406）；红曲对照药材（供鉴别用，批号：209641-121658）均购自中国药品生物制品检定所；乙腈为色谱纯，其他试剂均为分析纯，水为纯化水。

2 方法与结果

2.1 羌活的鉴别

2.1.1 色谱条件：色谱柱：Agilent TC C18（250 mm×4.6 nm×5 μm）；流动相：乙腈-0.1%磷酸（14∶86）；检测波长：316 nm；进样量：5 μL；流速：1.0 mL/min；柱温：35 ℃。

2.1.2 溶液的配制

①供试品溶液：取本品50 mL，加乙醚50 mL，振摇提取，乙醚液加2%碳酸钠溶液50 mL振摇提取，弃去乙醚液，碱液用稀盐酸调节pH值至2～3，加乙醚50 mL振摇提取，乙醚液挥干，残渣加甲醇5 mL使溶解，即得。②缺羌活的阴性对照溶液：按处方称取缺羌活的其他药材，按制备工艺制成缺羌活的三阴性样品，同供试品溶液制备方法制备，即得。③阿魏酸对照品溶液：取阿魏酸对照品，加甲醇制成每1 mL含15 μg的溶液，即得。④羌活对照药材溶液：按处方称取羌活对照药材量，按制备工艺制成对照样品，同供试品溶液制备方法制备，即得。

2.1.3 专属性试验

精密量取供试品溶液、对照品溶液、缺羌活的阴性对照溶液、羌活对照药材溶液分别进样。结果在供试品色谱图中，检出与对照品阿魏酸色谱图相同保留时间的色谱峰2、与羌活对照药材溶液色谱图保留时间相同的色谱峰1和阿魏酸色谱峰2（图1～图3），缺当归、川芎、羌活的阴性对照不干扰羌活的鉴别（图4）。

图1 阿魏酸对照溶液色谱图

图2 供试品溶液色谱图

图3 羌活对照药材溶液色谱图

图4 缺羌活的阴性对照溶液色谱图

2.1.4 样品测定

分别取对照品溶液、供试品溶液和羌活对照药材溶液依法进样测定。结果均检出与对照品色谱图、羌活色谱图相同保留时间的色谱峰。

2.2 红曲的鉴别

2.2.1 色谱条件

色谱柱：Agilent TC C18（250 mm×4.6 nm×5 μm）；流动相：乙腈-0.1%磷酸（55∶45）；检测波长：238 nm；进样量：5 μL；流速：1.0 mL/min；柱温：35 ℃。

2.2.2 溶液的配制

①供试品溶液：取本品100 mL，用乙醚100 mL振摇提取，弃去乙醚液，水溶液蒸至近干，加硅藻土4 g及丙酮适量（5～10 mL）搅拌成小颗粒状，置锥形瓶中，加丙酮80 mL，超声处理30 min，放冷，滤过，滤液挥干，残渣加甲醇5 mL溶解，即得。②对照品溶液：取洛伐他汀对照品，加甲醇制成每1 mL含4 μg的溶液，即得。③红曲对照药材溶液：按处方称取红曲对照药材量，按制备工艺制成对照样品，同供试品溶液制备方法制备，即得。④缺红曲的阴性对照溶液：按处方称取缺红曲的其他药材，按制备工艺制成缺红曲的阴性样品，同供试品溶液制备方法制备，即得。

2.2.3 专属性试验

精密量取供试品溶液、对照品溶液、缺红曲的阴性对照溶液分别进样。结果在供试品色谱图中，有洛伐他汀对照品、红曲对照药材色谱峰保留时间相同的色谱峰3（图5、6、7），缺红曲的阴性对照无干扰（图8）。

2.2.4 检测限

图5 洛伐他汀对照溶液色谱图

图6 供试品溶液色谱图

图7 红曲对照药材色谱图

图8 缺红曲的阴性对照溶液色谱图

精密吸取2.2.2项下的对照品溶液0.2 μL， 注入液相色谱仪，测定，洛伐他汀的检测限（S/N≈3）为0.38ng/ mL。

2.2.5 样品测定

分别取对照品溶液和供试品溶液依法进样测定。结果均检出与对照品色谱图相同保留时间的色谱峰。

3 讨 论

3.1 检测波长的选择

采用紫外-可见分光光度法对对照品溶液在200～400 nm紫外区进行扫描，在316 nm处阿魏酸有最大吸收，238 nm处洛伐他汀有最大吸收。并参照文献[6-8]，最终选用316 nm处鉴别羌活，238 nm处鉴别红曲。

3.2 流动相的选择

实验比较了甲醇-水系统、乙腈-水系统和甲醇-乙腈-水系统，结果确定了乙腈-0.1%磷酸为流动相，色谱峰对称性好，基线平稳，加入磷酸盐缓冲液，可以有效防止拖尾。且主峰与其他成分得到良好的分离，阴性样品无干扰。

3.3 红曲鉴别供试品溶液制备方法考察

鉴别红曲时，实验采用了两种供试品溶液制备方法。结果在2.2.2项下方法制备的供试品溶液色谱图中，洛伐他汀主峰位置附近杂质峰少，分离度好。

3.4 中药复方制剂标准现仍多采用理化鉴定，这样虽简便，但终究不准确，不法商家利用同类或有相似结构或官能团也能与显色剂发生反应的特点进行复方制剂的惨假，严重扰乱的中药复方制剂市场秩序。本实验在研究中，曾采用多种薄层色谱法鉴别羌活和红曲，均未能排除阴性干扰。故采用高效液相色谱法对史国公药酒中川芎和红曲进行鉴别，阴性无干扰，操作简便，灵敏度高，重现性好，结果准确可靠。适合用于史国公药酒制剂的质量控制。

[1] 《卫生部药品标准中药成方制剂第九册》[S].1994:62.

[2] 叶璟.川芎中主要有效成分的综合提取分离工艺研究[J].中成药,2009,31(2):217-220.

[3] 古丽娜,沙比尔,郭洪祝,等.HPLC法测定羌活中阿魏酸、羌活醇、苯乙基阿魏酸酯和异欧前胡素[J].中草药,2006,37(6):937-940.

[4] 庄志宏,吴剑坤,陈志峰,等.不同产地当归中中阿魏酸的含量测定[J].北京中医药,2011,30(8):624-625.

[5] 宋洪涛,宓鹤鸣,郭涛.中药红曲的研究进展[J].药学实践杂志,1999,17(3):172-174.

[6] 杨银芝,周小江.妇良胶囊中阿魏酸的含量测定[J].亚太传统医药, 2008,4(1):35-37.

[7] 张秀丽.HPLC法测定川芎中阿魏酸的含量[J].中国药事,2009, 23(5):469-471.

[8] 宋更申,姜建国,高燕霞,等.HPLC法测定洛伐他汀含量的不确定度评估[J].中国当代医药,2010,17(13):48-49.

R282

B

1671-8194（2014）22-0087-02

*通讯作者