基因芯片技术在阴道分泌物常规检测中的应用研究

史从宁，王雅杰，赵运转，康熙雄，胡敏华，张丽梅

妇科阴道分泌物常规检测 (阴道分泌物常规)是判断女性泌尿生殖道健康水平的一项重要医学检查项目。阴道分泌物常规中的项目主要有白细胞 (清洁度)、线索细胞、念珠菌和滴虫。显微镜镜检是开展阴道分泌物常规最常用的方法，但有经验要求高、主观性强等缺点，在敏感度和特异度方面也存在问题。一些试剂盒只能检测阴道分泌物常规中的个别项目，不能达到显微镜镜检的效果。美国BD公司生产的BD Affirm VPⅢ芯片以基因杂交为原理，可以对念珠菌、滴虫、加德纳菌进行检测，其产品在欧美上市多年，现在中国进行临床验证，本实验室作为验证中心之一参与了本次验证。共检测了400例阴道分泌物常规，报道如下。

1 资料与方法

1．1 临床资料 选取2012年1—4月首都医科大学附属北京天坛医院妇产科门诊患者 400例，年龄 20～68岁，平均(38．2±11．3)岁，主诉以阴道分泌物增多、有异味、外阴瘙痒为主，均用无菌拭子取阴道后穹窿分泌物，经期、性生活后以及行阴道灌洗后的标本除外。

1．2 主要试剂和方法 BD Affirm VPⅢ试剂盒由美国BD公司提供;细菌性阴道病(BV)甲酚蓝试剂由合肥华今生物科技公司提供;BV蓝试剂由北京明悟德生物技术有限公司提供;念珠菌显色培养基由法国科玛嘉公司提供;滴虫培养基由上海彤云公司提供，均严格按照说明书操作。每份标本同时用BD Affirm VPⅢ芯片检测、显微镜镜检、BV甲酚蓝试剂检测和BV蓝试剂检测，并接种至念珠菌显色培养基和滴虫培养基培养。

1．3 结果判定 BV以BV蓝试剂检测结果为金标准，而念珠菌和滴虫分别以念珠菌显色培养基和滴虫培养基培养结果为金标准。BD Affirm VPⅢ芯片检测结果的判断按说明书进行。BV甲酚蓝试剂检测结果以显蓝色为 (+)，以显黄色为 (-);BV蓝试剂检测结果以显蓝色为 (+)，以显黄色为 (-)。念珠菌以显微镜高倍镜下看到念珠菌孢子和菌丝为 (+)，未看到念珠菌孢子和菌丝为 (-);滴虫以看到滴虫为 (+)，未见滴虫为 (-);念珠菌显色培养基以白色念珠菌、光滑念珠菌、热带念珠菌或克柔念珠菌生长为(+)，以无白色念珠菌、光滑念珠菌、热带念珠菌或克柔念珠菌生长为 (-);滴虫培养基以滴虫生长为 (+)，以无滴虫生长为 (-)。

1．4 统计学方法 采用SPSS 16．0统计软件进行统计学处理，行Kappa检验，Kappa值≥0．75，说明已经取得较好的一致性;Kappa值＜0．40，说明一致性程度不够理想;Kappa值在 0．40～0．74说明一致性在可接受范围内。

2 结果

2．1 BV检测结果 以BV蓝试剂检测结果为金标准，BV甲酚蓝试剂检测和BD Affirm VPⅢ芯片检测BV的Kappa值分别为0．813 和0．553(见表1、2)。

表1 BV甲酚蓝试剂检测与BV蓝试剂检测BV结果 (例)Table1 The results of BV cresolblue reagentand BV blue reagent for testing bacterial vaginopathy

2．2 念珠菌检测结果 以念珠菌培养结果为金标准，显微镜镜检和BD Affirm VPⅢ芯片检测念珠菌的Kappa值分别为0．605 和0．941(见表3、4)。

表2 BD Affirm VPⅢ芯片检测与BV蓝试剂检测BV结果 (例)Table2 The results of BD Affirm VPⅢchipsand BV blue reagent for testing bacterial vaginopathy

表3 显微镜镜检与念珠菌培养念珠菌结果 (例)Table 3 The results of microscope and candida chromogenic plates for testing candida

表4 BD Affirm VPⅢ芯片检测与念珠菌培养念珠菌结果 (例)Table4 The results of BD Affirm VPⅢchipsand candida chromogenic plates for testing candida

2．3 滴虫检测结果 以滴虫培养结果为金标准，显微镜镜检和BD Affirm VPⅢ芯片检测滴虫的 Kappa值分别为0．973和0．923(见表5、6)。

3 讨论

妇科阴道炎是一种常见病、多发病，严重影响妇女的正常工作、学习和生活，影响其身体健康［1-2］。准确诊断、正确治疗阴道炎将极大提高女性的生活质量。目前，临床仍大多采用显微镜镜检的方法，此法对从业人员要求高，易漏检。也有一些替代显微镜镜检的产品如阴道炎五联检测试剂盒应用于临床，但敏感度和特异度均不高，临床应用存在一定问题［3-5］。基因芯片技术应用于阴道分泌物常规检测还未在国内广泛开展，本实验证实其在念珠菌检测和滴虫检测方面具有明显优势，但其不能检测白细胞的数量，无法提供阴道清洁度的结果，而且其BV检测结果与广泛认同的BV蓝试剂检测结果一致性不高，这都可能给其临床应用带来限制。

表5 显微镜镜检与滴虫培养滴虫结果 (例)Table5 The results ofmicroscope and trichomonad culture mediums for testing trichomonad

表6 BD Affirm VPⅢ芯片检测与滴虫培养滴虫结果 (例)Table6 The resultsof BD Affirm VPⅢchipsand trichomonad culture mediums for testing trichomonad

BV是一类厌氧菌引起的阴道病，其主要致病菌包括阴道加德纳菌、类杆菌、普氏杆菌、动弯杆菌等［6-7］。唾液酸酶为以上厌氧菌的特异性分泌物，研究表明，在阴道环境中，此酶活性与BV密切相关，与Amsel法有较高的符合率［8-10］。BV蓝是一种酶活性检测试剂，用于检测阴道标本厌氧菌所分泌的唾液酸酶活性水平，本实验中以此法为金标准。BV甲酚蓝原理也是测定唾液酸酶活性水平，BD Affirm VPⅢ芯片检测结果与BV蓝检测结果的一致性较低，这可能是由于基因芯片技术检测的为特定的基因序列，而BV蓝检测的为菌活性分泌物，二者检测原理不同。

念珠菌培养是公认的检测念珠菌的金标准，但培养耗时较长，目前临床上多依靠湿片显微镜镜检，显微镜镜检的漏检率较高，尤其是热带念珠菌、光滑念珠菌和克柔念珠菌等不生长长菌丝的念珠菌。本实验中BD Affirm VPⅢ芯片检测结果与念珠菌培养结果的一致性较高，说明BD Affirm VPⅢ芯片检测有较高的念珠菌检出率。

滴虫培养是公认的检测滴虫的金标准，但目前临床上检测滴虫基本上还是靠显微镜镜检。显微镜镜检对镜检人员经验性要求高，因气温低影响滴虫的活动性而可能漏检滴虫。在本实验中BD Affirm VPⅢ芯片检测结果与滴虫培养结果有良好的一致性，说明BD Affirm VPⅢ芯片可替代显微镜镜检用于滴虫的临床检测。

综上所述，美国BD公司生产的BD Affirm VPⅢ芯片在念珠菌和滴虫的检测方面与金标准有较好的一致性。在BV方面，BD Affirm VPⅢ芯片检测与金标准的一致性较低，这可能是由于二者原理不同造成的。BD Affirm VPⅢ芯片检测的是阴道加德纳菌、类杆菌、普氏杆菌、动弯杆菌等厌氧菌的特异基因片段，而BV蓝试剂检测的是阴道加德纳菌、类杆菌、普氏杆菌、动弯杆菌等厌氧菌分泌的唾液酸酶活性。目前临床上对BV蓝试剂的认可度较高，美国BD公司生产的BD Affirm VPⅢ芯片与BV蓝或BV甲酚蓝试剂结合用于临床进行阴道分泌物检查，可以取代显微镜镜检。

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