论少见念珠菌在口腔念珠菌感染病例中的分布及其致病性

常欣魁,贺静,宋扬△,郑光辉,见硕（.北京大学口腔医院,北京 0008;.首都医科大学附属北京天坛医院,北京 00070;.北京市海淀区妇幼保健院,北京 00080）

念珠菌作为一类寄生在人体各个部位的真菌，口腔是其常见寄生部位，对维持口腔中的菌群平衡起到重要的作用，属于正常菌群[1]。口腔念珠菌感染属于一种真菌感染，主要表现为口干、发黏、口腔黏膜疼痛、有烧灼感、味觉减退等症状，如果不能及时采取有效的治疗，不仅会加重症状，还会有诱发癌变的风险，为患者的身体、心理上带来巨大的影响[2]。随着广谱抗菌素、糖皮质激素等免疫抑制剂的应用，器官移植及化学治疗的广泛开展以及HIV的流行，口腔念珠菌病的患病率呈现不断攀升的趋势[3]。虽然白色念珠菌仍然是口腔念珠菌病最常见的致病菌，但非白色念珠菌种，尤其是少见念珠菌近年来存在上升的趋势[4]。本研究旨在探究目前归类为少见念珠菌分布情况，为口腔念珠菌病的临床治疗提供更多证据和帮助。

1 对象与方法

1.1 研究对象 选取2021年7-10月北京大学口腔医院黏膜科就诊且开具唾液真菌培养鉴定检查项目的患者共1376人。对他们的培养结果进行筛选，选取分离培养结果中含有少见念珠菌的样本作为本实验研究对象。

1.2 样本采集菌种 患者留取足量唾液样本至带盖无菌容器中，用一次性吸管转种0.5ml患者样本至沙保罗培养基中，在30℃恒温孵箱中培养48小时。有念珠菌生长的培养基的样本作为阳性样本，然后把该平皿上的念珠菌转种至科玛嘉念珠菌显色培养基中，于35℃恒温孵箱中培养48小时后根据颜色筛选出除白色念珠菌、热带念珠菌、克柔念珠菌和光滑念珠菌以外的其他少见念珠菌。

1.3 鉴定 将分离所得的全部少见念珠菌分纯，使用法国生物梅里埃公司的API 20C进行生化反应鉴定，对于鉴定率不高的个别真菌选择用全自动快速微生物质谱检测系统VITEK MS进行补充鉴定，所得鉴定结果概率为99.9%认为可以接受。

1.4 统计学分析 将所得全部少见念珠菌的鉴定及药敏结果录入Excel表格中进行汇总。分别计算每种念珠菌占少见念珠菌整体的百分比。

2 结果

在2021年7-10月内从1376位患者体内分离出的117株少见念珠菌中，近平滑念珠菌60株，占51.28%；季也蒙念珠菌25株，占21.37%；葡萄牙念珠菌8株，占6.84%；平常念珠菌2株，占1.71%；海洋酵母菌4株，占3.42%；无名念珠菌1株，占0.85%；变隐念珠菌5株，占4.27%；挪威念珠菌1株，占0.85%；粗状念珠菌2株，占1.71%；朗比可念珠菌1株，占0.85%；蜜蜂克勒克酵母菌1株，占0.85%；木兰念珠菌1株，占0.85%；柠檬克勒克酵母菌3株，占2.56%；拟平滑念珠菌1株，占0.85%；劳伦氏念珠菌1株，占0.85%；霍氏念珠菌1株，占0.85%。统计结果见表1。

表1 少见念珠菌结果分布

3 结论

通过结果可以看到，在2021年7-10月内1376位患者体内分离出的117株少见念珠菌中，分离比例最高的前三位依次是近平滑念珠菌、季也蒙念珠菌和葡萄牙念珠菌。其中近平滑念珠菌最多，占全部少见念珠菌的51.28%，季也蒙念珠菌其次，占21.37%，葡萄牙念珠菌第三，占6.84%。此外包括平常念珠菌在内的其他13种少见念珠菌虽也有检出，但它们分布比例较为平均且显著低于前三位少见念珠菌，因此不作为分析讨论的重点。

4 讨论

念珠菌属广泛存在于自然环境、体表、消化道及口腔黏膜上，是重要的条件致病菌[5]。口腔念珠菌病包括鹅口疮、念珠菌口角炎、急慢性萎缩性口炎、慢性增生性念珠菌病等临床类型，以鹅口疮最为多见，易感者包含艾滋病（AIDS）、恶性肿瘤、长期广谱抗细菌药物或糖皮质激素应用等免疫功能低下的群体，同时经常伴有消化道念珠菌病和播散性念珠菌病[6]。口腔念珠菌感染不仅会造成黏膜病变和口腔癌前病变，还会造成消化道感染，进而有引发胃癌的风险[7]。根据既往研究，自2015年-2019年，在我院分离口腔念珠菌中，虽然分离率最高的种类依然是白色念珠菌和热带念珠菌，但是其他少见念珠菌比例呈现逐年上升的趋势，且目前国内外对于这些少见念珠菌对人体尤其是口腔部位的影响研究较少，所以对于少见念珠菌的分离鉴定探究就显得越来越具有临床意义[4]。此外在先前的研究中，通过对2015年-2019年来我院黏膜科就诊的全部共27162例口腔念珠菌病患者唾液中的真菌种类和菌量的分离统计发现，白色念珠菌、热带念珠菌、光滑念珠菌感染的样本中均以菌落数≥200CFU/mL的菌株为主，而克柔念珠菌、其他念珠菌菌落数≥200CFU/mL的菌株比例低于白念珠菌、热带念珠菌和光滑念珠菌，而菌落数≤30CFU/mL的菌株比例明显高于白念珠菌、热带念珠菌和光滑念珠菌[4]。在对所有口腔念珠菌病患者的观察中发现，被少见念珠菌感染的患者往往只需要更少的菌量，就可出现与大量非少见念珠菌感染相近似的临床症状，而对于非少见念珠菌感染的患者，往往只有当菌量达到很大的时候才会出现临床表现，还有部分患者会处于白色念珠菌的无症状携带状态，这些都侧面反映了少见念珠菌在致病性方面要显著高于其他种类的念珠菌。

在临床上，白色念珠菌是口腔念珠菌病的主要致病菌。但是有文献报道，以近平滑念珠菌和季也蒙念珠菌等少见念珠菌的分离率也在升高[8-9]。由于对于念珠菌所需的鉴定和药敏结果时间普遍较长，所以临床通常会在得到分离鉴定结果前先进行经验用药治疗。对于最常见的白色念珠菌的常规治疗一般首选氟康唑或伏立康唑，既往报道表明白色念珠菌对这两种药的敏感率分别为99%和98.8%[10,12]。根据其他学者的研究，笔者此次重点研究的少见念珠菌的耐药率要明显高于最常见的白色念珠菌。在本次研究中分离率最高的近平滑念珠菌，对于氟康唑和伏立康唑的耐药率分别为6.4%和2.7%，其中氟康唑耐药菌株中41.6%对伏立康唑交叉耐药，这可能由于唑类药物作用靶酶编码基因ERG11发生突变导致[11]。分离率第二的季也蒙念珠菌对于氟康唑和伏立康唑的耐药率分别为24.3%和8.1%，交叉耐药率为8.1%[12]。鉴于少见念珠菌的耐药率均高于白色念珠菌，因此分离并鉴定少见念珠菌对于临床抗菌药物的选择具有积极指导意义。今后下一步研究方向将进一步扩大样本数量进行分析，并对于分离菌种进行药敏分析，进而丰富研究结果。