金银花中绿原酸和木犀草苷的薄层色谱鉴别方法分析

金兰兰

金银花中绿原酸和木犀草苷的薄层色谱鉴别方法分析

金兰兰

目的探讨金银花中绿原酸和木犀草苷的薄层色谱（TLC）鉴别方法。方法根据《中国药典》TLC法，配置供试品样品，选择合适展开剂，并分析其显色方法。结果用水作溶剂经热回流提取后配置试验样品，乙酸乙酯-丙酮-甲酸-水（7.0:3.0:1.0:1.2）作展开剂，分别喷上5%三氯化铝乙醇溶液，经紫外光灯（365nm）照射鉴别木犀草苷。喷1%三氯化铁试液与1%铁氰化钾试液（1:1）混合溶液的上清液，使其显色观察绿原酸。结论应用可行性薄层色谱鉴别法，具有较高重现性好，对金银花中绿原酸和木犀草苷予以有效鉴定。

金银花；木犀草苷；绿原酸；薄层色谱法

金银花属于忍冬科植物忍冬的干燥花蕾或带初开的花，也被称为银花、金花、忍冬花、金藤花等。味甘，性寒，能清热解毒、疏散风热，临床常在肺炎、急性痢疾、宫颈糜烂等疾病治疗中得到应用。金银花含有挥发油、黄酮类、有机酸等物质，主要活性成分有绿原酸、木犀草苷。临床中对绿原酸和木犀草苷进行鉴定时所采用的方法主要为高效液相色谱（HPLC），此方法工作量加大，色谱峰分开不明显，分离度差。本文应用薄层色谱法同时鉴定绿原酸和木犀草苷，效果明显，现报告如下。

1 仪器与方法

1.1 仪器与药物 应用瑞士 Precisa电子天平、超声波清洗器、ZF-Ⅰ型三用紫外分析仪；金银花规格1kg/包，选取合适绿原酸和木犀草苷对照品；三氯化铁、铁氰化钾、甲苯、乙酸乙酯、甲酸、甲醇、乙醇、丙酮、氯仿属于分析纯。

1.2 方法 依据《中国药典》2010年版一部附录ⅥB试验TLC法，对供试品样品的制备、展开剂选择、显色方法进行观察。

1.2.1 制备对照品溶液 精密称取绿原酸对照品以甲醇制备1mg/mL对照品备用溶液。称取木犀草苷对照品以70%乙醇制备含木犀草苷40µg/mL的对照品备用溶液。

1.2.2 供试品配置 应用回流法和超声提取法分别进行对比。

1.2.3 回流法 合理应用金银花药材，放置于30℃烘箱进行2h干燥，经粉碎后过2号筛。称量取2.0g粉末分别放入 50mL水、70%乙醇、50%甲醇、乙酸乙酯溶剂进行1h加热回流后提取、过滤。水提取液需加入盐酸配置为酸性，滤过，应用乙酸乙酯在振摇后进行3次萃取，每次应用25mL，混合乙酸乙酯溶液，蒸干，将2mL甲醇加入到残渣内，溶解，配置成供试品溶液。其它类型溶剂提取液可将其蒸干，残渣加入甲醇2mL后溶解，成为供试品溶液。依据《中国药典》2010年版一部附录Ⅵ B试验TLC法，取出绿原酸对照品、木犀草苷对照品和供试品溶液2、4、1μL，分别放置于硅胶G薄层板面上。

1.2.4 超声法[1]选用合适金银花药材，将其放置于30℃烘箱内持续干燥2h，将其粉碎通过2号筛。称出2.0g粉末分别置入50mL水、70%乙醇、50%甲醇、乙酸乙酯溶剂超声提取 40min，其余步骤与回流法相同。

1.2.5 展开剂的选择 根据临床应用，分别选取乙酸乙酯-丁酮-甲酸（10:7:1）、甲苯（水饱和）-乙酸乙酯-甲酸（5.0:4.5:0.5）、甲苯-乙酸乙酯-甲酸-水（6:3:1:3）上层溶液、乙酸乙酯-丙酮-甲酸-水（7.0:3.0:1.0:1.2）、氯仿-甲醇-甲酸（4.0:1.0:0.5）。

1.2.6 显色方法选择 喷上5%三氯化铝乙醇溶液，经紫外光灯（365nm）照射，分析所呈现荧光斑点，喷上l%三氯化铁试液与1%铁氰化钾试液（1:1）混合液上清液，显色，应用数码相机进行拍照。

2 结果

应用薄层色谱法对鉴定金银花中所含绿原酸和木犀草苷进行鉴定，在配置供试品溶液时将水作溶剂，加热回流持续1h、加入盐酸使之呈现酸性，应用乙酸乙酯进行萃取，效果明显；展开剂应用乙酸乙酯-丙酮-甲酸-水（7.0:3.0:1.0:1.2）具有较好效果；显色剂应用 5%的三氯化铝乙醇溶液，在紫外光灯（365nm）下对木犀草苷予以鉴定。将硅胶板喷以1%三氯化铁试液和1%铁氰化钾试液（1:1）混合溶液上清液，使其显色，对绿原酸予以鉴定。供试品溶液色谱中，与对照品溶液色谱对应处显现同种颜色斑点。

3 讨论

分析忍冬的化学成分可知，其有效成分主要是木犀草苷，其它种类含此成分的很少，而且大部分主要含有绿原酸，成分具有明显差异。金银花与山银花均有绿原酸成分，但金银花含有木犀草苷相对要高，而山银花较少含有。目前，忍冬基本是金银花的唯一植物来源，其余种类通常均被并入山银花中。《中国药典》记载，绿原酸和木犀草苷是金银花的重要标志性成分，是否存在木犀草苷成分是正品金银花和其它山银花进行有效区分的重要化学指标，而且是否存在木犀草苷成分一般也决定了正品金银花在治疗效果上与山银花等同科植物具有较大的差异性。所以，寻求一种有效方法能同时鉴定金银花中含有绿原酸和木犀草苷成分显得尤为重要[2]。

经本文研究发现，乙酸乙酯萃取后点样的提取方法效果最为明显，超声法和回流法均可将金银花中的绿原酸和木犀草苷快速提取，但应用70%乙醇、50%甲醇、乙酸乙酯进行提取后所配置的样品具有较多杂质，无法得到准确的样品成点性，而经乙酸乙酯萃取可明显排除大量杂质，降低杂质影响率。

以不同展开剂将木犀草苷和绿原酸进行分离过程中，并无法使分离效果达到良好状态，究其原因一般认为是木犀草苷和绿原酸并无较大极性区别。所以本文选取两种专属性较强的显色法对木犀草苷和绿原酸进行鉴定，金银花中绿原酸与木犀草苷含量具有较为明显的差异性，点样量大时，木犀草苷斑点易被绿原酸斑点所掩盖；点样量小时，木犀草苷无法得到足够含量，导致斑点不明显[3]。

总之，应用合适的薄层色谱方法能有效鉴别金银花中绿原酸和木犀草苷，应用价值高。

[1] 陈秋竹,林瑞超,王钢力,等.金银花提取物化学成分研究[J].中药材,2010,33(6):920-922.

[2] 中华人民共和国国家药典委员会.中国药典(一部)[S].北京:化学工业出版社,2005:21,152.

[3] 王永慧,孙荣进,叶方,等.金银花中绿原酸和木犀草苷的薄层色谱鉴别方法研究[J].中国医药导报,2012,9(11):136-137.

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1673-5846(2014)02-0022-02

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