马海治瘫胶囊提取工艺及质量标准的研究

蒙麦侠 陈瑞明 张 红 高锦成 石敏娟 陕西省中医药研究院（西安710013）

马海治瘫胶囊系陕西省中医医院脑内科数名老中医集多年临床经验，针对“脑中风”的康复治疗而研制。处方由大黄、黄芪、水蛭、当归等中药组成，具有益气通络、活血化瘀、醒脑开窍、健肢回语，用于中风恢复期、后遗症期。为了有效控制提取工艺，以干膏率为考察指标，采用正交实验设计法，对其科学性进行研究；为控制其质量，保证临床用药安全有效，建立了组方药味的薄层鉴别。

1 仪器与试药 电子分析天平（型号：BS210S Max210g，d＝0.1mg，北京赛多利斯天平有限公司）；UV－8 三用紫外仪（无锡科达仪器厂）；大黄对照药材（中国药品生物制品检定所，批号：120902－200609）；黄芪甲苷（中国药品生物制品检定所，批号：0781－200311）；马海治瘫胶囊（实验室自制，批号：120412、120418、120426）。

2 方法与结果 2.1 提取工艺研究 2.1.1 提取工艺参数：提取工艺研究中，以中药饮片粗颗粒为原料，浸泡时间确定为1.0h（无干芯），采用L9（34）正交表，以干膏率的提取量为指标，以加水量、煎煮次数、煎煮时间为因素，每个因素取三水平进行考察，通过正交试验确定最佳工艺条件。正交试验因素水平见1。

表1 正交实验因素水平表

2.1.2 干膏率测定 实验煎煮液，过滤，静置过夜，上清液浓缩，定容于100mL 容量瓶中，摇匀，精密吸取25mL，水浴蒸干，参照中国药典之浸出物测定法恒重的方式，测定，计算。

2.1.3 正交试验安排 从试验因素和水平情况看，选用L9（34）正交表即可。具体试验操作见“正交试验安排和数据分析表”。如：1＃实验… 取实验处方量药材饮片粗颗粒，加水8倍，浸泡1h，煎煮2.0h，煎煮3次，煎煮液过滤，下按“干膏率测定”方法进行，其余如此进行。

表2 正交试验安排和数据分析表

依据“正交试验安排和数据分析表”中的数据，从极差角度看，各因素对干膏率的影响依次为：D＞B＞A，即煎煮次数＞煎煮时间＞加水量，最优工艺为：煎煮次数3次，加水量8倍，煎煮时间2.0h。

2.1.4 方差分析 依据“正交试验安排和数据分析表”中的数据，进行方差分析，结果见下表，其中显示：D 和B 因素的影响有显著性意义，但表中B 因素的F 值与F0.05（2，2）临界值非常接近，A 因素的影响没有显著性。但据文献报道水蛭的生物活性与提取温度、溶媒等有关，所以综合考虑，确定最佳提取工艺为A3B3D1。

表3 方差分析表

2.1.5 验证实验 取实验处方量药材饮片粗颗粒，三份，加水浸泡1h，煎煮3次，每次加水6倍量，煎煮1.0h，煎煮液过滤，滤液静置过夜，上清液定容至100mL，下按“干膏率测定”方法进行，计算干膏率，得验证1＃、验证2＃、验证3＃干膏率分别为30.67%、29.68%、30.12%，平均干膏率为30.16%，说明优选工艺稳定，重复性好。

2.2 质量标准研究 2.2.1 大黄鉴别［1］取本品内容物0.5g，加甲醇20mL，浸泡1h，滤过，取滤液5mL，蒸干，残渣加水10mL使溶解，再加盐酸1mL，加热回流30min，立即冷却，用乙醚分2次振摇提取，每次20mL，合并乙醚液，蒸干，残渣加三氯甲烷1mL使溶解，作为供试品溶液。另取大黄对照药材0.1g，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液和对照药材溶液各10μL，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G 薄层板上，以石油醚（30～60℃）－乙酸乙酯－甲酸（15∶5∶1）的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯（365nm）下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同的五个橙黄色荧光主斑点；置氨蒸汽中熏后，斑点变为红色。

2.2.2黄芪鉴别［2］取本品内容物7.5g，用甲醇回流3次，用量依次为：50mL、40mL、40mL，每次回流1h，滤过、滤液水浴蒸干，残渣加水30mL 使溶解，用水饱和的正丁醇振摇萃取四次，每次分别为30mL，合并正丁醇萃取液，用PH＝10～11的氨水洗两次，每次分别为20mL、15mL，弃去氨水液，正丁醇液水浴蒸干，残渣加水10～20mL使溶解，加于D101大孔吸附树脂柱上，以水50mL洗脱，弃去水液，再用40%乙醇35～40mL洗脱，弃去洗脱液，继用70%乙醇80mL 洗脱，收集洗脱液，水浴蒸干，用甲醇定容于2mL，作为供试品溶液。另取黄芪甲苷对照品适量，加甲醇制成1mL 含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液依次3μL、2μL 分别点样于同一硅胶G 薄层板上，以三氯甲烷－甲醇－水（13∶7∶2）的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在于对照品色谱相应的位置上，日光下显相同的棕褐色斑点。

3 讨 论 试验结果表明，所选因素对提取工艺有不同的影响，其中提取次数影响较为显著，次之为提取时间，加水量对提取无显著影响；考虑到处方中水蛭的生物活性并兼顾节时节能的原则，故选择用6倍量水、回流提取3次，每次1h。处方中大黄及黄芪的薄层鉴别斑点清晰，重现性好，可用于其质量控制。

［1］ 国家药典委员会.中国药典［S］.北京：化学工业出版社，2005：123.

［2］ 庄 瑞.黄芪中黄芪甲苷提取条件的考察［J］.中国医药指南，2008，6（13）：115－116.