艾灸关元和足三里穴对癫痫大鼠细胞因子TNF－α的影响

张艳晓，张余山，黄静波，程为平△

(1．黑龙江中医药大学，黑龙江 哈尔滨150040;

2．黑龙江中医药大学附属第一医院，黑龙江哈尔滨150040)

癫痫(Epilepsy)是一组以脑部神经元高度同步化异常放电所引起的以反复发作性突然和短暂的中枢神经系统功能异常为特征的慢性脑部疾病。其发病机制极其复杂，神经－免疫－内分泌网络的任一环节调节失衡均可影响癫痫的发病［1］。癫痫模型及癫痫患者在给予癫痫药治疗前后存在免疫异常现象，TNF－α作为一种重要的免疫介质在癫痫发生发展过程中也有重要作用［2，3］，艾灸关元、足三里治疗癫痫在临床上取得一定疗效，本实验通过观察该法对癫痫大鼠血清中TNF－α含量的影响，探讨该法治疗癫痫的相关机制。

1 材料和方法

1．1 实验动物

雄性SD大鼠27只，清洁级，体重(220±15)g。由黑龙江中医药大学实验中心提供。

1．2 主要试剂与材料

戊四氮(由sigma公司生产)，艾灸条(南阳市卧龙汉医艾绒厂生产，自制成香烟型艾条，直径8 mm，长200 mm)，多聚甲醛(北京益利精细化学品公司生产)，IL－6酶联免疫试剂盒(上海森雄科技实业有限公司)，丙戊酸钠(江苏恒瑞医药)。

1．3 动物分组

未造模前从27只大鼠中用查随机数字表法随机选取3只作为空白对照组，同法将造模成功的其余24只大鼠随机分为3组，每组8只，分别为模型组、艾灸组、药物组。

1．4 造模方法

给大鼠腹腔注射戊四氮(PTZ)癫痫发作阈下剂量35．0 mg/kg，每天09:00～10:00注射，注射20～29天达点燃标准，注射后观察30～50 min，根据大鼠癫痫发作的行为表现，参照Racine［4］的评分标准分为6级:0级:无任何反应;Ⅰ级:面部抽搐及咀嚼;Ⅱ级:点头和(或)甩头;Ⅲ级:前肢阵挛，但无直立位;Ⅳ级:前肢阵挛伴伸直;Ⅴ级:前肢及全身阵挛，失去平衡，跌倒。Ⅲ级及以下为轻型发作，Ⅳ级及以上为重型发作。点燃标准:大鼠连续5次PTZ腹腔注射，均表现为Ⅳ级或V级的发作。造模期间空白组腹腔注射10 ml/kg生理盐水。

1．5 治疗方法

各组大鼠均于发作间歇期清醒固定于鼠板上，以安静为度，艾灸组给予艾灸治疗:①选穴及定位:足三里、关元取穴定位参照“十五”国家规划统编教材《实验针灸学》和《腧穴学》大鼠标准穴位图谱定位及拟人对照法定位，足三里穴定位:膝关节后外侧，在腓骨小头下约5 mm处;关元穴定位:脐下约25 mm处。②艾灸方法:每次取关元和双侧足三里穴，剃毛后，持自制艾条于穴位上2～3 cm处悬灸，采用温和灸补法，以大鼠皮肤微红且不出现疼痛为度，每穴每次灸15 min［5］，每日1次，每日09:00～10:00进行。艾灸结束后药物组按药物说明以15．75 mg/kg丙戊酸钠灌胃，每日1次，空白组和模型组不予任何处置，共治疗20天。治疗结束前，参照Racine的6级评分标准，每天记录各组大鼠行为学表现。

1．6 标本采集与指标测定

治疗结束后分别将空白组、模型组、药物组及艾灸组的大鼠开胸暴露心脏，从心脏中抽取5 ml血液，3000 r/min离心5 min，取上清液，－20℃保存。测定前置室温复融，用酶联免疫法按试剂盒说明书方法测定血清中TNF－a的变化。

1．7 统计学方法

实验结果以均值±标准差(¯x±s)表示，应用SPSS17．0软件处理，组间比较采用t检验。

2 结果

酶联免疫法测定标本后，各组大鼠体内所测TNF－α值如表1所示:空白组与模型组相比 P＜0.05，两者之间存在显著差异，模型组TNF－α含量明显高于空白组。与模型组比较，药物组与艾灸组均P＜0．05，治疗有意义，两治疗组含量均下降。药物组与艾灸组之间比较P＞0．05，两组之间无差别，疗效基本相同。

表1 各组大鼠血清TNF－α值

表2 各组大鼠癫痫发作等级统计结果

造模后至治疗结束前，对各组大鼠进行行为学观察，造模后各组大鼠发作等级均在Ⅳ～Ⅴ级，表现为前肢及全身阵挛，失去平衡，跌倒等。随着治疗的进行，模型组仍为Ⅳ级以上发作;艾灸组及药物组发作等级则为Ⅳ级以下，且发作次数明显减少。各组癫痫发作等级统计及分析结果如图1和表2所示:药物组与模型组相比较P＜0．01，艾灸组与模型组相比P＜0．01，两组治疗均有统计学意义，发作等级明显下降;艾灸组与药物组相比P＞0．05，无统计学意义，两组间治疗效果无明显差别。

图1 造模后至治疗结束各组癫痫发作等级

3 讨论

癫痫的发病机制十分复杂，临床观察和实验研究发现，TNF－ α 在癫痫过程中发挥重要作用［6，7］。TNF－α可以通过增加突触传递的效率［8］，控制突触的可塑性、促进脑组织中胶质细胞增殖［9］、影响兴奋性氨基酸和抑制性氨基酸比例［10］，促进细胞因子如白细胞介素1、白细胞介素6的释放等多种机制影响癫痫的发生发展。

中医学认为癫痫的形成是由脏腑失调，痰浊瘀阻，气机逆乱，风阳内动，风阳痰浊蒙蔽清窍，流窜经络所致。病理性质属本虚标实，宜固本培元、扶正调络。艾灸能温补阳气，调整诸阳，达到补益机体一身之阳、激发人体正气的目的;关元穴为任脉与足三阴的交会穴，三焦元气所发处，联系命门真阳，为阴中之阳穴，功善温阳益气、固本培元;足三里穴亦为强壮要穴，功善扶正培元、调和气血、调经活络。艾灸两穴，培元扶正，使正盛邪去，脏腑气血调和，精气四布以濡养经脉，上输清窍以充养元神，脑神得以濡养，则癫痫治之。

本实验通过腹腔注射戊四氮制造癫痫大鼠模型成功后，大鼠有分级明确的癫痫发作，经治疗后，发作等级及发作次数均明显下降，说明艾灸关元、足三里对癫痫大鼠有一定的疗效。细胞因子方面，模型组大鼠血清中TNF－α含量远高于空白组，而经治疗后艾灸组血清中TNF－α含量明显低于模型组，说明TNF－α在癫痫的发生发展过程中有重要的作用，并且艾灸关元、足三里治疗癫痫的机制与调节体内TNF－α含量有密切的关系。但TNF－α作用机制复杂，具体的作用途径还有待进一步的研究。另外除了细胞因子方面，艾灸关元、足三里在神经、内分泌、免疫等其他方面的影响也可作为下一个研究方向。

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［5］ 张英，刘又香，孙国杰．不同灸治时辰对阳虚小鼠免疫功能影响的比较［J］．湖北中医杂志，1998，20(2):53 －54

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