顶空毛细管气相色谱法测定碘佛醇原料药中的残留溶剂

李 超，张 勉，唐 华

（重庆市食品药品检验所，重庆 401121）

碘佛醇最早由美国万灵科公司研制开发，现国内仅有一个生产厂家，现行质量标准为国家食品药品监督管理局标准（试行）YBH19702004[1]，USP[2]也有收载，属非离子型 X-线造影剂。原料制备工艺中使用了甲醇和正丁醇，现行质量标准[1]中使用的气相色谱直接进样外标法测定甲醇和正丁醇含量，溶剂为N，N-二甲基甲酰胺。为减小毒害和对仪器的污染，提高测定准确度，更好地控制产品质量，以水为溶剂，三类溶剂正丙醇为内标，对本品的残留溶剂进行了顶空毛细管气相色谱测定。现报道如下。

1 仪器与试药

Agilent 6890N型气相色谱仪，AgilentG1888型顶空进样器。所用试剂均为分析纯；碘佛醇原料为江苏恒瑞医药股份有限公司提供的3批样品（批号分别为635101133，635101136，635101206，纯度大于 99%）。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱：ZB-Wax 毛细管柱（30 m×0.32 mm，0.25 μm）；进样口温度：200℃；分流比：5∶1；检测器为 FID，温度为 250℃；柱温采用程序升温：50℃保持3 min，然后以35℃ ／min升至200℃，保持 2 min；载气为氮气；流速：2 mL／min。顶空条件：顶空瓶加热平衡时间为30 min；加热温度为80℃；进样环温度为110℃；传输线温度为120℃；进样体积为1 mL。

2.2 溶液配制

取正丙醇适量，精密称定，加水制成0.1 mg／mL的溶液，摇匀，即得内标溶液。分别取甲醇和正丁醇适量，精密称定，加上述内标溶液制成含甲醇和正丁醇均为0.6 g／L的溶液，摇匀，即得对照品溶液。取本品约0.5 g，精密称定，置20 mL顶空瓶中，加上述内标溶液5.0 mL，加盖密封，即得供试品溶液。

2.3 方法学考察

系统适用性试验：取对照品溶液 2.5 mL，置 20 mL顶空瓶中，加内标溶液 2.5 mL，加盖密封，摇匀，照拟订的方法进行分析，记录色谱图，见图1 A。取供试品溶液，照拟订的方法进行分析，记录色谱图，见图1 B。可见，甲醇、正丙醇、正丁醇均能得到良好的分离（分离度＞1.5），说明上述色谱条件可用于测定碘佛醇原料中甲醇和正丁醇的残留量。

图1 气相色谱图

线性关系考察：精密量取对照品溶液 1.0，1.5，2.0，2.5，3.0 mL，分别置 20 mL顶空瓶中，加内标溶液稀释至 5.0 mL，加盖密封，摇匀。照拟订的方法进行分析，记录色谱图；以对照品峰面积与内标峰面积的比值为横坐标（X），对照品溶液质量浓度与内标溶液质量浓度（以1计算）的比值为纵坐标（Y），进行线性回归。甲醇的回归方程为Y=377.8 X+11.813，线性范围为122.2 ～ 366.6 μg／mL， r=0.998 3；正丁醇的回归方程为 Y=68.962X+1.617 4，线性范围为 128.4 ～385.2 μg／mL，r=0.999 3。结果表明，甲醇、正丁醇在相应的检测浓度范围内线性关系良好。

检测限考察：将对照品溶液逐步稀释进样，以 S／N=3计算，测得甲醇、正丁醇的最低检测质量浓度分别为 0.66，0.04 μg／mL。

精密度试验：取对照品溶液 2.5 mL，共 6份，置 20 mL顶空瓶中，分别用内标溶液稀释至5.0 mL，加盖密封，摇匀，照拟订的方法进行分析。以对照峰面积与内标峰面积的比值计算，结果甲醇、正丁醇的 RSD 分别为 1.9%，0.7% （n=6），符合要求。

回收率试验：取甲醇0.065 1 g和正丁醇0.070 0 g，置100 mL量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品贮备液。取已测定结果的样品约0.5 g，精密称定，共9份，置20 mL顶空瓶中，分别加入对照品贮备液 1.5，2.0，2.5 mL，各 3 份，加入内标溶液稀释至5.0 mL，加盖密封，摇匀，照拟订的方法进行分析，按内标法计算回收率。结果见表1。

表1 甲醇和正丁醇回收率试验结果

2.4 样品测定

分别取3个批号的样品，按拟订的方法制备供试品溶液，照拟订的方法进行分析，记录色谱图，以峰面积按内标法计算样品中甲醇、正丁醇的残留量。并与厂家提供的按原标准检验的测定结果比较，结果见表2。按国家食品药品监督管理局标准（试行）YBH19702004[1]的规定，甲醇、正丙醇的限度均为0.3%，结果均符合规定。

表2 样品检测结果与厂家标准检测结果比较（%）

3 讨论

原标准方法中采用的溶解后直接进样测定，会对色谱柱产生较大的污染，缩短色谱柱的使用寿命。顶空进样避免了难挥发物质的污染及不必要的干扰，并且使残留溶剂气化后进样，浓度增大，灵敏度高，非常适用于挥发性残留溶剂的分析。由于本方法使用水作溶剂，且甲醇、正丙醇、正丁醇挥发性都比较强，根据《中国药典(二部)》[3]附录62-63对顶空温度和平衡时间的指导原则，选择了顶空瓶加热平衡时间30 min，加热温度80℃的条件进行，压力适中，灵敏度亦满足要求。

原标准方法中溶剂使用的是N，N-二甲基甲酰胺，有毒性。选择水为溶剂，各组分包括碘佛醇均有较好的溶解性，既环保又降低了成本，操作简便。

有机残留溶剂在样品中为微量存在的物质，原标准方法采用外标法，精密度和准确度都较差；本法中采用内标法定量可以减少由于仪器系统或操作过程中带来的误差。试验中对多种溶剂进行筛查，正丙醇是三类溶剂，毒性小，且与溶剂水混溶，保留时间也介于甲醇和正丁醇之间，且分离度良好。因此最终选择正丙醇为内标物质。

原标准方法中甲醇、正丁醇的限度均为0.3%，甲醇的限度与ICH中关于有机溶剂残留量的指导原则[4]和《中国药典》[3]附录62-63的规定一致，正丁醇的限度比上述两个文献规定的0.5%限度更严格。测定结果均低于规定限度。

该厂家在原料生产工艺中使用了氯乙醇，原标准方法中未作控制，ICH中关于有机溶剂残留量的指导原则[4]和《中国药典(二部)》[3]附录62-63也未有相应的规定。因此，参照《中国药典(二部)》[3]1025明胶空心胶囊中氯乙醇的测定方法，采用直接进样考察了碘佛醇中氯乙醇的残留，结果3批样品均未检出氯乙醇，故未在本方法中测定氯乙醇。

[1]YBH19702004.国家食品药品监督管理局标准（试行）[S].

[2]United States Pharmacopeial Convention.United States Pharmacopeia[S].Thirty － second Revision[M].Rockville：United States Pharmacopeia Convention，2009：2677.

[3]国家药典委员会.中华人民共和国药典（二部）[M].北京：中国医药科技出版社，2010.

[4]周海钧.药品注册的国际技术要求质量部分[M].北京：人民卫生出版社，2000：87.