国产松露乙醚提取物的GC-MS分析

蔡佳仲，黄珍珍，周 娟，李兆生，胡英杰*

1广州中医药大学热带医学研究所药学研究室，广州510405;2云南恒大药业有限公司，玉溪652605

松露又名块菌，是一种子囊菌类食用大型真菌，主产于欧洲，我国西南也有分布。块菌具有奇特的香味和丰富的营养价值，是世界上最珍贵的可食用菌根菌之一，其中又以法国黑松露(Tuber melanosporum)和意大利白松露(Tuber magnatum)最为珍贵［1］。国外已对欧洲多种松露品种的化学组成和芳香气味开展了分析研究，报道了众多挥发性成分［2-4］。鉴于对国产松露香味物质的分析报道较少［2，5］，本文对云南产黑块菌(Tuber indicum)香味物质进行了化学成分分析，以作为研究开发国产松露资源的化学成分基础。

1 仪器与材料

1.1 仪器

BS224S型电子分析天平(德国Sartorius公司);气相色谱-质谱联用仪(QP-2010，日本SHIMADZU公司)。

1.2 材料

黑块菌采自云南;样品经广东省微生物分析检测中心鉴定为黑块菌Tuber indicum(鉴定报告编号: 2011ZD0307)。试剂均为分析纯。

2 方法

2.1 松露乙醚提取物

称取100 g新鲜块菌，洗净、切成碎片，加2倍量水，匀浆，加乙醚在室温下振摇提取3次，每次加乙醚500 mL。合并乙醚提取液，加无水硫酸钠脱水，滤过，取滤液室温下挥去乙醚，得具有黑块菌浓烈芳香气味的黄棕色油状液体，得率为0.19%(w/ w)。

2.2 测定条件

2.2.1 气相色谱条件

DB-5MS毛细管色谱柱(30 m ×0.25 mm × 0.25 μm)，程序升温:50～280℃，程序升温10℃/min;柱流量1.0 mL/min;进样口温度250℃;柱前压54 kPa;进样量0.5 μL;分流比2∶1;载气为高纯氦气。

2.2.2 质谱条件

电离方式EI:电子能量70 eV;离子源温度200℃，接口温度230℃;倍增器电压0.9 kV;溶剂延时4 min;质量扫描范围20～500 amu。

3 结果与分析

按照上述条件对块菌乙醚提取样品进行分析，获得其乙醚提取物成分的总离子流图(图1)。色谱峰相应质谱图经人工解析及NIST147谱库检索定性鉴定化学成分;采用面积归一法计算出各成分的相对百分含量(图1)。从块菌乙醚提取物中共检测到74个化学成分，鉴定了其中56个化合物，占化合物总数的75.68%，所鉴定的化合物含量占提取物总含量的87.37%。块菌乙醚提取物的化学成分涵盖了酸、醇、酯、醛、烃和苯衍生物等化合物。其中，脂肪酸类物质13种(占总峰面积的59.98%，下同)，醇类物质5种(占7.96%)，酯类物质5种(占2.79%)，醛类物质5种(占2.44%)，烷烃类物质25种(占13.12%)，苯衍生物3种(占1.08%)。相对含量在2%以上的化合物依次为亚油酸(26.51%)、棕榈酸(13.00%)、油酸(9.09% )、硬脂酸(6.94%)、菜子甾醇(4.93%)、环己醇(3.17%)、异丙基-8-(3-辛基-2-环氧乙烷)-辛酸酯(2.18%)、2-辛基环丙烯-1-庚醇(2.02%)等。

图1 松露乙醚提取物的总离子流图Fig.1 Total ion chromatogram of the ethyl ether extract from T.indicum

表1 松露乙醚提取物的化学成分分析Table 1 Components analysis of the ethyl ether extract from T.indicum

23 壬酸Nonanoic acid C9H18O2 94 0.15 24 3，4-二甲基癸烷3，4-Dimethylundecane C13H28 93 0.07 25 3-癸烯酸3-Decenoic acid C10H18O2 83 0.79 26 正癸酸n-Decanoic acid C10H20O2 82 0.96 27 5-甲基-2-苯基-2-己烯醛5-Methyl-2-phenyl-2-hexenal C13H16O 92 0.16 28 3，5-二叔丁基苯酚3，5-bis(1，1-Dimethylethyl)-Phenol C14H22O 83 0.16 29 月桂醛Dodecanal C12H24O 94 0.09 30 肉豆蔻酸Tetradecanoic acid C14H28O2 94 0.07 31 9-十六碳烯酸9-Hexadecenoic acid C16H30O2 94 0.29 32 棕榈酸n-Hexadecanoic acid C16H32O2 95 13.00 33 十七烷酸乙酯Heptadecanoic acid，ethyl ester C19H38O2 90 0.31 34 十七烷酸Heptadecanoic acid C17H34O2 92 0.10 35 10-甲基-十九烷10-Methylnonadecane C20H42 90 0.08 36 亚油酸(Z，Z)-9，12-Octadecadienoic acid C18H32O2 96 26.51 37 油酸(Z)-9-Octadecenoic acid C18H34O2 93 9.09 38 硬脂酸Octadecanoic acid C18H36O2 96 6.94 39 (顺，顺，顺)-7，10，13-二十碳三烯酸甲酯(E，E，E)-7，10，13-Eicosatrienoic acid，methyl ester C21H36O2 83 0.17 40 (顺，顺，顺)-8，11，14-二十碳三烯酸(Z，Z，Z)-8，11，14-Eicosatrienoic acid C20H34O2 80 0.67 41 (顺，顺)-9，12-十八碳二烯酰氯(Z，Z)-9，12-Octadecadienoyl chloride C18H31C10 79 0.34 42 1-十八炔1-Octadecyne C18H34 82 0.81 43 六氢-4，4，7a-三甲基-2(3H)-苯并呋喃酮Hexahydro-4，4，7a-trimethyl-2(3H)-benzofuranone C21H18O2 81 0.85 44 9-二十炔9-Eicosyne C20H38 85 1.39 45 2-辛基环丙烯-1-庚醇2-Octylcyclopropene-1-heptanol C18H34O 82 2.02 46 二十四烷Tetracosane C24H50 96 1.33 47 9-酮基-10，12-十八碳二烯酸9-Oxo-10，12-octadecadienoic acid C18H30O3 84 1.18 48 异丙基-8-(3-辛基-2-环氧乙烷)-辛酸酯Isopropyl-8-(3-octyl-2-oxiranyl)-octanoate C21H40O3 79 2.18 49 二十五烷Pentacosane C25H52 90 0.78 50 邻苯二甲酸二正辛酯Di-n-octyl phthalate C24H38O4 82 0.08 51 二十八烷Octacosane C28H58 96 0.24 52 1-氯代二十七烷1-Chloroheptacosane C27H55Cl 83 0.46 53 二十九烷Nonacosane C29H60 94 0.14 54 反式角鲨烯All-trans-Squalene C30H50 94 0.09 55 三十四烷Tetratriacontane C34H70 93 0.11 56 菜子甾醇Brassicasterol C28H46O 89 4.93

4 讨论

分析结果表明:含有滇产黑块菌香味物质的乙醚提取物中的主成分是脂肪酸，包括不饱和脂肪酸亚油酸(26.51%)、油酸(9.09%)和饱和脂肪酸棕榈酸(13.00%)、硬脂酸(6.94%)，主要不饱和脂肪酸(油酸和亚油酸)和饱和脂肪酸(棕榈酸和硬脂酸)总量分别为35.60% 和19.94%。不饱和脂肪酸是人类必需的脂肪酸，具有多种有利于人体健康的生理活性。其中亚油酸具有抗癌、抗氧化、抑制脂肪积累、降低血清胆固醇等作用［6］。而油酸作为一价不饱和脂肪酸，代替膳食中的饱和脂肪酸，具有降低低密度脂蛋白胆固醇的效果［7］。棕榈酸(十六烷酸、软脂酸)和硬脂酸(十八烷酸)等高级饱和脂肪酸，是自然界中分布最广的脂肪酸之一。棕榈酸除了具有抗肿瘤、抗衰老的生物活性外［8，9］，还是合成化妆品成分棕榈酸异丙酯、棕榈酸异辛酯的基本原料。

本研究同时从滇产黑块菌提取物中鉴定出了八碳化合物1-辛烯-3-醇(0.81%)。1-辛烯-3-醇俗称蘑菇醇，带有浓烈的鲜菇香味，是许多蕈菌中最典型的风味物质，也是自然界内蕈菌的主要挥发性物质之一［10］。Splivallo等［2］从中国产块菌Tuber indicum的挥发油中曾鉴定出了1-辛烯-3-醇(27.47%)、2-辛烯醛(7.85%)、3-辛酮(3.92%)、2-辛烯-1-醇(3.14%)等多种八碳化合物。鉴定出的八碳化合物在含量和种类上与文献报道的有明显区别，原因在于分析对象为乙醚可溶的脂溶性成分，含有较多的非挥发性成分，与Splivallo等所分析的挥发油不同。据报道，1-辛烯-3-醇等八碳化合物在蕈菌中是由亚油酸或亚麻酸经脂肪氧合酶等催化转变而成的［11］，滇产黑块菌乙醚提取物中油酸和亚油酸总和为35.6%，检测出的八碳化合物种类和含量状况可能与块菌所处的生长阶段有关［2，12］。

本研究对黑松露乙醚提取物进行了初步分析并发现了多种生物活性成分，说明滇产黑松露除了食用价值外，还可能有药理作用。分析结果为滇产松露资源的深入研究开发提供了一定的科学依据，有望在药物研究、食品和香精产业中得以推广应用。

致谢GC-M S由中国科学院广州化学研究所的刘倩老师和梁庆优老师测定，谨致谢忱!

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