HPLC法测定星宿菜中山柰酚的含量

付远清，莫逢伟，廖厚知（.北海市卫生学校附属医院药剂科，广西北海53600；.广西汇科药物研究所，南宁 530007）

星宿菜（Lysimachia fortunei Maxim.）为报春花科珍珠菜属植物，又名红根草、红丝毛根、假辣蓼、红气根、黄鳅草、红灯芯、红筋仔、麻雀利、珍珠菜、定经草、矮桃草、红杆草等，以全株入药，具有清热利湿、凉血活血、解毒消肿之功，主治黄疸、泻痢、目赤、吐血、血淋、白带、崩漏、痛经、闭经、咽喉肿痛、痈疮肿毒、流火、瘰疬、跌打、毒蛇咬伤等证[1]。星宿菜的主要化学成分为三萜、苯醌类色素和黄酮类等化合物[2～4]，山柰酚为其有效成分之一。因此，本试验建立了以高效液相色谱（HPLC）法测定星宿菜中山柰酚含量的方法，旨在为其质量标准的制定提供试验依据。

1 仪器与试药

LC-2010 A HPLC仪、SPD-M10 Avp紫外检测器、UV-2450分光光度计（日本岛津制作所）；AB265-S分析天平（瑞士梅特勒-托利多公司）。

山柰酚对照品（中国食品药品检定研究院，批号：11086-200805）；乙腈为色谱纯，盐酸、磷酸均为分析纯。星宿菜药材由广西汇科药物研究所廖厚知工程师采集并鉴定为星宿菜L.fortunei Maxim.，以采集地点编号分别为广西防城港（X1）、桂林（X2）、百色（X3）、钦州（X4）、柳州（X5）、河池（X6）、南宁（X7），标本保存于广西汇科药物研究所样品留样室。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱：岛津VP-ODS柱（150mm×4.6mm，5µm），保护柱：YWG C18（10 mm×4.6 mm，10µm）；流动相：乙腈-0.2%磷酸溶液（42∶58）；流速：1.0 mL·min－1；柱温：室温；检测波长：370 nm。

2.2 溶液的制备

2.2.1 对照品溶液 精密称取山柰酚对照品适量，加甲醇适量制成每1 mL含30µg的对照品溶液，即得。

2.2.2 供试品溶液 取本品粉末（过三号筛）1 g，精密称定，置100mL圆底烧瓶中，加甲醇-2.5mol·L－1盐酸溶液（4∶1）40 mL，水浴加热回流60 min，放冷，滤过，滤液转移至50 mL量瓶中，残渣用少量甲醇洗涤，洗液并入量瓶中，加甲醇定容，摇匀，0.45µm微孔滤膜滤过，即得。

2.3 系统适用性试验

分别精密吸取对照品溶液、供试品溶液各20µL，注入HPLC仪，按上述色谱条件测定。结果，供试品中山柰酚的理论板数为4089，分离度为5.2，与其他成分分离良好。色谱见图1。

2.4 线性关系考察

精密称取山柰酚对照品10.31 mg，置100 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，分别精密吸取1、2、3、4、5 mL，置10 mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，按上述色谱条件分别进样20 μL，测定。以峰面积积分值（Y）对山柰酚进样量（X，μg）进行线性回归，得回归方程为Y＝975743 X－10450（r＝0.9998，n＝5）。结果表明，山柰酚进样量在0.2062～1.0310 μg范围内与峰面积积分值呈良好线性关系。

2.5 精密度试验

取山柰酚对照品溶液（30.63 μg·mL－1）适量，按上述色谱条件依法操作，重复进样6次，测定峰面积。结果，RSD＝0.42%（n＝6），表明仪器精密度良好。

2.6 稳定性试验

精密吸取同一批供试品（X1）溶液20µL，于2、4、6、8、24、48、72 h进样分析，测定峰面积。结果，RSD＝0.82%（n＝7），表明供试品溶液在制备后72 h内稳定。

2.7 重复性试验

取同一批样品（X1）适量，共6份，分别按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液，照上述色谱条件进样测定。结果，样品平均含量为1.282 mg·g－1，RSD＝1.74%（n＝6），表明本方法重复性良好。

2.8 加样回收率试验

取已知准确含量（1.282mg·g－1）的样品（X1）6份，每份0.5 g，精密称定，置100 mL圆底烧瓶中，精密加入1 mL山柰酚对照品溶液（0.632 mg·mL－1），挥去甲醇，按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液，照上述色谱条件测定样品含量，计算加样回收率，结果见表1。

2.9 样品含量测定

表1 加样回收率试验结果（n＝6）Tab 1 Results of recovery test（n＝6）

取7批星宿菜样品，分别按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液，照上述色谱条件进样测定，计算样品中山奈酚的含量。结果表明，不同产地星宿菜中山柰酚的含量在0.109%～0.207%之间，平均含量为0.141%，详见表2。

表2 样品含量测定结果Tab 2 Results of content determination of samples

3 讨论

星宿菜作为广西民间常用药材，其相关文献报道却较少，目前尚无有关其质量控制的报道。为此，笔者以星宿菜中山柰酚的含量作为测定指标，建立HPLC法，该方法准确、灵敏、重复性好，可为星宿菜的质量控制提供含测依据。

试验中，在星宿菜药材的提取上曾采用甲醇-盐酸回流提取30、60、90 min，结果发现30 min未能提取完全，60 min与90 min的提取结果基本无差异，为节省试验时间，故选择提取60 min。

在流动相的选择上，试用过乙腈-0.2%磷酸水溶液（37∶63）[5]，结果山柰酚出峰时间较久；而乙腈-0.2%磷酸水溶液（50∶50）与乙腈-0.2%磷酸水溶液（45∶55）的分离度结果不好。后将流动相改成乙腈-0.2%磷酸水溶液（42∶58），色谱图各种参数均能达到要求。

[1]国家中医药管理局《中华本草》编委会.中华本草（第6册）[M].上海：上海科学技术出版社，1999：103.

[2]黄新安，蔡佳仲，胡英杰，等.星宿菜化学成分研究[J].中国中药杂志，2007，32（7）：596.

[3]方乍浦，张亚均，孙小芳.星宿菜脂溶性部分的化学成分研究[J].中国中药杂志，1989，14（12）：35.

[4]K Yasukawa，H Sekine，M Takido.Two flavonol glycosides from Lysimachia fortunei[J].Phytochemistry，1989，28（8）：2215.

[5]李 捷，郭五保.HPLC法测定五灵脂中山柰酚的含量[J].现代中医药，2010，30（3）：86.