HPLC法测定香桂化浊胶囊中大黄素的含量Δ

刘红淼，杨继章，李艳玲（1.河北医科大学第一医院，石家庄050031；.石药集团中奇制药技术（石家庄）有限公司，石家庄 050051）

香桂化浊方为河北医科大学第一医院临床应用多年的经验方，由广藿香、土大黄、肉桂等药材组成。其疗效确切、可靠，具有芳香醒脾、清化湿浊之功，主治因各种疾病后邪留未尽、脾胃内伤所致长期大便溏泄或有黏液、腹胀肠鸣、纳呆，低热，舌苔白腻或白滑或见微黄，脉濡缓；主要用于慢性肠炎、真菌感染致肠炎证属脾虚湿困的治疗。关于本方制剂工艺及质量控制方法的研究已有报道[1～4]。为了更加全面、有效地控制其质量，笔者采用高效液相色谱（HPLC）法对香桂化浊胶囊中土大黄中大黄素的含量进行了测定。

1 仪器与试药

LC-10 A系列HPLC仪，包括LC-10 Avp高压泵、SPD-10 Avp紫外检测器、SCL-10 Avp系统控制器及Class-vp 6.10色谱工作站（日本岛津公司）；电子天平（德国Sartorius公司）。

香桂化浊胶囊（批号：20100601、20100602、20100603）和阴性样品均为河北医科大学第一医院制剂室制备；大黄素对照品（中国食品药品检定研究院，批号：110756-200110，供含量测定用）；甲醇、乙腈为色谱纯，其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果[5，6]

2.1 色谱条件

色谱柱：Hypersil C18（150 mm×4.6 mm，5 μm）；流动相：0.1 mol·L－1磷酸二氢钠溶液（用磷酸调pH值至3.0）-甲醇-乙腈（30∶35∶35）；流速：1.2 mL·min－1；进样量：20 μL；检测波长：289 nm。

2.2 对照品溶液的制备

精密称取大黄素对照品10.04 mg，置200 mL量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。

2.3 供试品溶液的制备

取胶囊内容物，精密称取约0.6 g，置100 mL圆底烧瓶中，加0.5mol·L－1盐酸30mL，（80±5）℃水浴2h，放至室温，过滤，滤液用氯仿（20、20、20、10、10 mL）萃取5次，合并萃取液，备用。滤渣晾干，置索氏提取器中，用氯仿提至无色（提取约4.5 h）。与上述萃取液合并，蒸除氯仿，挥干，残渣加甲醇溶解并转移至25 mL量瓶中，定容，摇匀，用0.45 μm微孔滤膜滤过，即得。

2.4 专属性试验

取不含土大黄的阴性样品，按“2.3”项下方法制备阴性对照溶液。取对照品溶液、供试品溶液、阴性对照溶液各适量，按上述色谱条件进样测定。结果表明，阴性对照在大黄素保留时间处无干扰峰出现。色谱见图1。

2.5 线性关系考察

图1 高效液相色谱图Fig 1 HPLC chromatograms

精密量取大黄素对照品溶液0.5、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0 mL，分别置于10 mL量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，得系列标准溶液，分别精密量取20 μL，注入HPLC仪，记录色谱图，测定峰面积。以峰面积积分值（Y）对对照品浓度（X）进行线性回归，得回归方程为Y＝6.813×104X－1.456×103（r＝0.9999，n＝6）。结果表明，大黄素的检测浓度在2.51～25.10 μg·mL－1范围内与峰面积积分值呈良好线性关系。

2.6 精密度试验

精密量取同一份对照品溶液（15.6 μg·mL－1）20 μL，连续进样5次，记录峰面积。结果，RSD＝0.65%（n＝5），表明仪器精密度良好。

2.7 稳定性试验

取同一份供试品溶液，分别于0、2、4、8、12 h进样测定，每次20 μL。结果，RSD＝0.73%（n＝5），表明供试品溶液在12 h内稳定性良好。

2.8 重复性试验

取同一批（批号：20100602）样品适量，按“2.3”项下方法平行制备6份供试品溶液，用甲醇转移至25mL量瓶中，经0.45 μm微孔滤膜滤过，取续滤液20 μL，注入HPLC仪，测定大黄素含量。结果，样品平均含量为 0.3973mg·g－1，RSD＝1.41%（n＝6），表明该方法重复性良好。

2.9 加样回收率试验

取已知大黄素含量的香桂化浊胶囊样品（批号：20100602）约0.39 g，精密称定9份，分别精密加入不同量的大黄素对照品溶液，照“2.3”项下方法制备供试品溶液并测定含量，计算加样回收率，结果见表1。

表1 加样回收率试验结果（n＝9）Tab 1 Results of recovery test（n＝9）

2.10 样品含量测定

取3批样品（批号：20100601、20100602、20100603）各适量，分别按“2.3”项下方法制备供试品溶液，照上述方法测定大黄素的含量。结果，3批样品中大黄素含量分别为0.3941、0.4351、0.3997 mg·g－1。根据此结果，同时考虑药材来源及制剂生产、贮藏等因素，暂定大黄素含量限度为不得少于0.30 mg·g－1。

3 讨论

根据大黄素的理化性质，笔者分别采用3种方法提取同一批样品中的大黄素：（1）超声提取法：样品加50 mL甲醇超声30 min，放冷，过滤，滤液加30 mL 0.5 mol·L－1的盐酸，（80±5）℃水浴水解2 h，放至室温，用氯仿（20、20、20、10、10 mL）萃取至无色，合并萃取液，挥干氯仿，残渣加甲醇溶解并转移至25 mL量瓶中，定容，摇匀，用0.45 μm微孔滤膜滤过，即得。（2）水解、提取同时进行法：样品加0.5 mol·L－1的盐酸30 mL、氯仿30 mL，置（80±5）℃水浴上回流2 h，放至室温，分取氯仿层，水层分别用氯仿（20、20、20、10、10 mL）萃取至无色，合并氯仿层，蒸除氯仿，残渣加甲醇溶解并转移至25 mL量瓶中，定容，摇匀，用0.45 μm微孔滤膜滤过，即得。（3）索氏提取法：将胶囊内容物置100 mL圆底烧瓶中，加入0.5 mol·L－1的盐酸30 mL，置（80±5）℃水浴上水解2h，放至室温，过滤，滤液用氯仿（20、20、20、10、10 mL）萃取5次，合并萃取液，备用；滤渣阴干，置索氏提取器中用氯仿提至无色（约4.5 h），再与上述萃取液合并，蒸除氯仿，挥干，残渣加甲醇溶解并转移至25 mL量瓶中，定容，摇匀，用0.45 μm滤膜滤过，即得。通过测定3种方法所提样品中的大黄素含量，结果表明，方法（2）的色谱图上，杂质峰与大黄素峰难以分离，不能定量；方法（1）的色谱图上供试品杂质峰多，且在过滤过程中易造成不平行操作；而采用方法（3），大黄素提取较完全且杂质峰少、分离效果好、稳定，故采用方法（3）——索氏提取法提取大黄素。

综上，本方法操作简便，灵敏性、准确性、重复性好，可用于香桂化浊胶囊的质量控制。

[1]刘红淼，姜少灏，张振杰，等.正交试验优选香桂化浊胶囊中挥发油的包合工艺 [J].中国药房，2010，21（47）：4449.

[2]刘红淼，房桂珍，李艳玲，等.香桂化浊胶囊成型工艺研究[J].中国药房，2011，22（11）：990.

[3]刘红淼，杨继章，王云志，等.香桂化浊胶囊质量标准研究[J].中国药房，2011，22（27）：2553.

[4]刘红淼，杨继章，李艳玲.肉桂油的研究进展[J].中国药房，2011，22（27）：2579.

[5]王 丽，张山川，徐 珽，等.高效液相色谱法测定咽炎颗粒中大黄素的含量[J].中国药房，2007，18（9）：684.

[6]宁 洁.HPLC法测定抗眩晕颗粒中大黄素和大黄酚[J].中草药，2010，41（5）：749.