寒喘祖帕颗粒的质量标准研究

金晓红，桂红武，耿伟（1.诸暨市人民医院药剂科，浙江诸暨11800；.新疆维吾尔自治区人民医院北院，乌鲁木齐 80054；.新疆医科大学第一附属医院药学部，乌鲁木齐 80054）

寒喘祖帕颗粒为《中华人民共和国卫生部药品标准维吾尔药分册》[1]收载，由神香草、铁线蕨、甘草浸膏、小茴香、芹菜子、胡芦巴、芸香草、玫瑰花、荨麻子9味药材组成，具有镇咳、化痰、温肺止喘等功效，用于治疗急性感冒，寒性“乃孜来”所致的咳嗽及异常黏液质性哮喘。为了有效地控制产品质量，笔者采用薄层色谱（TLC）法对制剂中玫瑰花、小茴香进行定性鉴别；采用高效液相色谱（HPLC）法对制剂中的甘草酸铵进行含量测定，结果该方法操作简单、专属性和重复性良好，可有效控制寒喘祖帕颗粒的质量。

1 仪器与试药

SPD-10 AVP型HPLC仪（日本岛津公司）。

寒喘祖帕颗粒为市售品，批号：090310、090311、090312，由新疆某公司生产；甘草酸铵对照品（批号：11703-200615）和小茴香（批号：121198-200301）、玫瑰花（批号：121508-200702），均购于中国食品药品检定研究院；硅胶G（层析用，青岛海洋化工有限公司）；甲醇为色谱纯，水为重蒸馏水，其余试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 TLC鉴别[2～4]

2.1.1 玫瑰花的TLC鉴别 取本品6 g，研细，加乙醇30 mL，置水浴中加热回流1 h，滤过，滤液蒸干，残渣加水30 mL使溶解，加乙酸乙酯20 mL提取，分取乙酸乙酯层，蒸干，残渣加甲醇1 mL使溶解，作为供试品溶液；另取玫瑰花对照药材1 g，加水30 mL，煎煮30 min，滤过，滤液加乙酸乙酯20 mL提取，分取乙酸乙酯层，蒸干，残渣加甲醇1 mL使溶解，作为对照药材溶液；另按处方比例取除玫瑰花以外其余药材，同法制成阴性对照溶液。照TLC法[2]试验，吸取上述3种溶液各10µL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯-丙酮-醋酸乙酯-甲酸（8∶4∶3∶1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5%三氯化铝乙醇溶液，待乙醇挥干后，置紫外光灯（365 nm）下检视。结果，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；阴性对照无干扰。玫瑰花的TLC见图1。

2.1.2 小茴香的TLC鉴别 取本品15 g，研细，加乙醚50 mL，置水浴中加热回流30 min，放冷，滤过，滤液挥干，残渣加氯仿1 mL使溶解，作为供试品溶液；另取小茴香对照药材1 g，同法制成对照药材溶液；另按处方比例取除小茴香以外其余药材，同法制成阴性对照溶液。照TLC法[2]试验，吸取上述3种溶液各10µL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚（60～90℃）-乙酸乙酯-（17∶2.5）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以二硝基苯肼试液，日光下检视。结果，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；阴性对照无干扰。小茴香的TLC见图2。

2.2 含量测定

2.2.1 色谱条件与系统适用性试验[5，6]色谱柱：Hypersil ODS-2C18（250 mm×4.6 mm ，5 μm）；流动相：甲醇-1%乙酸铵溶液-冰醋酸（67∶33∶1）；检测波长：250nm；流速：1mL·min－1；柱温：30℃；进样量：10μL。在此色谱条件下，甘草酸铵与相邻峰可达到基线分离。理论板数按甘草酸铵色谱峰计应不低于3000，分离度＞1.5。色谱见图3。

2.2.2 供试品溶液的制备 取本品适量，研细，精密称取1 g，置100 mL量瓶中，加甲醇50 mL，密塞，超声处理30min，取出，放冷，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，过微孔滤膜（0.45µm），即得。

2.2.3 对照品溶液的制备 取甘草酸铵对照品适量，加甲醇制成每1 mL含甘草酸铵0.05 mg的溶液，即得。

2.2.4 线性关系考察 精密称取甘草酸胺对照品适量，加甲醇制成每1 mL含甘草酸胺1.031mg的溶液，作为贮备液。精密吸取此贮备液0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、2.0mL，置10mL量瓶中，用甲醇稀释至刻度。分别吸取上述对照品溶液10µL，注入液相色谱仪，记录色谱图。以检测浓度（X）为横坐标，峰面积积分值（Y）为纵坐标，进行线性回归，得回归方程为Y＝6895.3 X+1526.8（r＝0.9998）。结果表明，甘草酸铵检测浓度在20.62～206.2 μg·mL－1范围内与峰面积积分值呈良好线性关系。

2.2.5 精密度试验 精密吸取同一供试品溶液10µL，按上述色谱条件连续进样6次，测定。结果，RSD＝0.59%（n＝6），表明方法精密度良好。

2.2.6 重复性试验 取同一批样品适量，共6份，按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液，分别精密吸取10µL，注入液相色谱仪，记录甘草酸铵峰面积。结果，甘草酸铵的平均含量为3.96 mg·g－1，RSD＝1.71%（n＝6），表明本方法重复性良好。

2.2.7 稳定性试验 取同一批供试品溶液适量，室温放置，分别于 0、2、4、6、8、12、24、36h依法测定。结果，RSD＝0.95%（n＝8），表明供试品溶液在36 h内稳定性良好。

图1 玫瑰花的TLCFig 1 TLC of Rose.rugosa

图2 小茴香的TLCFig 2 TLC of Fructus foeniculi

图3 高效液相色谱图Fig 3 HPLC chromatograms

2.2.8 加样回收率试验 精密称取已知含量的样品0.5 g，共9份，分别精密加入1.031 mg·mL－1的甘草酸铵对照品溶液1.5、2.0、2.5 mL，按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液，分别精密吸取10µL，依次注入液相色谱仪，记录峰面积，计算加样回收率，结果见表1。

表1 加样回收率试验结果（n＝9）Tab 1 Results of recovery test（n＝9）

2.2.9 样品含量测定 取适量样品3批，按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液，分别精密吸取10µL，依次注入液相色谱仪，记录峰面积，计算甘草酸铵的含量。结果，3批样品（批号：090310、090311和090312）中甘草酸铵的含量分别为4.01、3.98、3.93 mg·g－1。

3 讨论

寒喘祖帕颗粒收载于《中华人民共和国卫生部药品标准维吾尔药分册》[1]，标准号为WS3-BW-0195-98，原标准中鉴别项下有2项，第一项为挥发油理化鉴别，第二项为甘草酸的TLC鉴别，无含量测定项。笔者对原标准进行提高，删除了原标准中的鉴别项，增加了玫瑰花和小茴香的TLC鉴别项，增加了甘草酸铵的含量测定项，使寒喘祖帕颗粒质量标准的可控性增强。笔者还对处方中神香草、铁线蕨、芹菜子、胡芦巴、芸香草和荨麻子分别进行了定性鉴别，由于无对照药材，TLC展开后斑点不清晰，故不能作为制剂定性鉴别的依据。

本品共由9味药材组成，工艺是除甘草浸膏粉碎成细粉外，其余8味用水提取后，浓缩至浸膏，加辅料制粒而成，所以在工艺过程中挥发性成分损失较大，不宜作为含量测定指标。其他药材中，预试胡芦巴中的成分发现总碱含量较高，其中胆碱含量最高，但胆碱无紫外吸收。胡芦巴碱在本品中含量低，且常以内盐形式存在，结构特殊，在普通的以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱上保留时间过短。综合考虑，选择甘草酸铵为本制剂含量测定的指标。

[1]中华人民共和国卫生部药典委员会.中华人民共和国卫生部药品标准维吾尔药分册[S].1998：198.

[2]国家药典委员会.中华人民共和国药典（一部）[S].2010年版.北京：中国医药科技出版社，2010：附录34.

[3]古丽巴哈尔·阿巴拜克力.小茴香果实中总黄酮含量测定方法研究[J].生物技术通讯，2009，20（6）：830.

[4]阴 健.中药现代研究与临床应用[M].北京：中医古籍出版社，1997：14.

[5]李 莉，师永清.HPLC法测定加味藿香正气丸中甘草酸的含量[J].中国药房，2007，18（33）：2605.

[6]于立军.HPLC法测定双香排石颗粒中甘草酸的含量[J].中国药房，2007，18（18）：1404.