3种方法制备的胃肠复原汤中黄芪甲苷含量的比较

许保海，臧琛，张宏伟，潘旭，魏娜，聂其霞#（.北京积水潭医院，北京00035；.中国中医科学院中药研究所，北京 00700）

煎剂是中药应用最广泛、最能体现中医辨证论治的剂型，传统制备方法多为患者自己煎煮，但因程序复杂、费时费力、携带不便等缺点，临床应用受到限制。使用煎药机煎药，其封闭式煎煮有效地减少了挥发性成分的损失[1]；容量大，可节时、节能，特别适合药量多的处方；采取真空包装，方便患者携带与贮藏。煎药机的出现，由此而产生了煎剂的“传统单剂煎煮法”和“煎药机多剂煎煮法”2种不同制备方法。此外，中药配方颗粒经过多年的发展，在全国部分地区和医院逐渐应用起来。

煎剂质量的好坏直接影响到临床疗效，而煎剂发挥疗效的物质基础主要是煎剂中煎出有效成分的多少[2]。上述3种方法制备出来的中药制剂在有效成分的含量、药理、药效方面是否相同，孰优孰劣还缺乏系统研究。

胃肠复原汤由黄芪、太子参、枳壳等9味中药组成，具有补益肠胃、行气导滞的功效，临床常用于肠胃功能紊乱的治疗和腹腔手术后的排气。在我院应用多年，因疗效显著，深受患者欢迎。本试验即以有效处方胃肠复原汤作为研究对象，以其君药黄芪中黄芪甲苷的含量为指标，考察上述3种制备方法制备出来的样品中有效成分含量的变化。

1 仪器与试药

CK-38陶瓷煎药壶（佛山市捷达家用电器厂）；TKD 2000 W-3 D自动煎药包装机（天津市康德新技术发展有限公司）；1200 series高效液相色谱（HPLC）仪（美国安捷伦公司）；Alltech 2000 ES蒸发光散射检测器（美国奥泰公司）；KQ-250超声清洗器（功率：250 W，工作频率：40 kHz，昆山市超声仪器有限公司）。

黄芪甲苷对照品（中国食品药品检定研究院，批号：110781-200512）；乙腈为色谱纯，水为重蒸水，其余试剂均为分析纯。制备胃肠复原汤2种煎剂所使用的饮片均来源于安国市一方中药材有限公司：黄芪（批号：11040077）、太子参（批号：11040078）、枳壳（批号：11040083）、大黄（批号：11040079）、桃仁（批号：11040080）、赤芍（批号：11040081）、木香（批号：1104082）、莱菔子（批号：11040084）、蒲公英（批号：11040085）；配方颗粒由广东一方制药有限公司提供：黄芪配方颗粒（批号：J1103010）、太子参配方颗粒（批号：J1103011）、枳壳配方颗粒（批号：J1103018）、大黄配方颗粒（批号：J1103013）、桃仁配方颗粒（批号：J1103014）、赤芍配方颗粒（批号：J1103015）、木香配方颗粒（批号：J1103016）、莱菔子配方颗粒（批号：1103112）、蒲公英配方颗粒（批号：1102017）。

2 方法与结果

2.1 供试品的制备

2.1.1 传统单剂煎煮法（批号：110704、110718、110719） 取胃肠复原汤1剂所需各饮片，冷水浸泡30 min，常规煎煮，水沸后20min滤出药液；残渣加热水煎煮，水沸后15min滤出药液；合并药液量共计400 mL，减压干燥成干膏。本文中将此方法所制煎剂简称“传统煎剂”。

2.1.2 煎药机多剂煎煮法（批号：110704、110711、110718）取胃肠复原汤10剂所需各饮片，冷水浸泡30 min，放入煎药机内自动煎煮，待煎药机提示完成，滤出药液；得药液量4000 mL，减压干燥成干膏。本文中将此方法所制煎剂简称“机制煎剂”。

2.1.3 配方颗粒溶解法（批号：1101003、1103065、1104145）取各单味药配方颗粒，直接按比例混合溶解，即得。本文中将此方法所制样品简称“配方颗粒”。

2.2 色谱条件与系统适用性试验

色谱柱：Kromasil C18（150 mm×4.6 mm，5 μm）；流动相：乙腈-水（31∶69）；流速：1.0mL·min－1；柱温：30℃；检测器：Alltech 2000 ES蒸发光散射检测器；漂移管温度：105℃；气体流速：2.0 mL·min－1。理论板数按黄芪甲苷峰计算应不低于4000；在此条件下，黄芪甲苷达到基线分离，分离度为1.5。

2.3 对照品溶液的制备

精密称取黄芪甲苷对照品适量，加甲醇制成浓度为120.8 μg·mL－1的溶液，即得。

2.4 供试品溶液的制备

取供试品约0.5 g，精密称定，精密加甲醇40 mL，密塞，称重，超声处理30 min，放至室温，再称重，补加甲醇至原重，摇匀，滤过。准确吸取续滤液20 mL，蒸干，残渣加水30 mL使溶解，以水饱和的正丁醇振摇提取4次，每次30 mL。合并正丁醇液，以氨试液洗涤2次，每次20 mL，弃去氨试液，正丁醇液浓缩至干，残渣加适量甲醇溶解，转移至10 mL容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，0.22 μm微孔滤膜滤过，即得。

2.5 专属性试验

分别取对照品溶液、供试品溶液与空白对照溶液（溶剂）各10 μL，注入HPLC仪，按上述色谱条件测定。结果，在上述色谱条件下，杂质对黄芪甲苷的测定无干扰。色谱见图1。

2.6 线性关系考察

图1 高效液相色谱图Fig 1 HPLC chromatograms

分别吸取对照品溶液4、6、8、10、12 μL，注入HPLC仪，按上述色谱条件测定，记录峰面积。以峰面积积分值（Y）的自然对数为纵坐标，黄芪甲苷进样量（X）的自然对数值为横坐标，进行线性回归，得回归方程为lnY＝1.5939×lnX+6.7595（r＝0.9993，n＝5）。结果表明，黄芪甲苷进样量在0.4832～1.4496 μg范围内与峰面积积分值呈良好线性关系。

2.7 精密度试验

精密吸取对照品溶液10 μL，注入HPLC仪，按上述色谱条件连续进样6次，测定峰面积。结果，RSD＝1.46%（n＝6），表明仪器精密度良好。

2.8 重复性试验

取同一批样品适量，共6份，精密称定，分别按“2.4”项下方法制备供试品溶液，照上述色谱条件进样20μL，测定含量。结果，RSD＝1.86%（n＝6），表明本方法重复性良好。

2.9 稳定性试验

取同一供试品溶液，分别于0、2、4、6、8、12、24 h进样20 μL，测定峰面积。结果，RSD＝0.88%（n＝7），表明供试品溶液中黄芪甲苷在24 h内稳定。

2.10 加样回收率试验

取同一批样品6份，每份约0.25 g，精密称定，分别精密加入黄芪甲苷对照品0.27mg，按“2.4”项下方法制备供试品溶液，照上述色谱条件进样20 μL，测定样品含量，计算加样回收率，结果见表1。

表1 加样回收率试验结果（n＝6）Tab 1 Results of recovery test（n＝6）

2.11 样品含量测定

分别取传统煎剂、机制煎剂和配方颗粒各3个批号样品，分别按“2.4”项下方法制备供试品溶液，照上述色谱条件进样20 μL，测定黄芪甲苷含量，结果见表2。

由表2可见，黄芪甲苷含量配方颗粒稍高于传统煎剂，二者均远远高于机制煎剂。批间差异配方颗粒与传统煎剂接近，而机制煎剂批间差异较大。因此，以黄芪甲苷含量论，配方颗粒和传统煎剂为好；机制煎剂含量较低，且批间差异大，质量不稳定。

表2 传统煎剂、机制煎剂和配方颗粒中黄芪甲苷含量测定结果（n＝3）Tab 2 Results of content determination of astragalosideⅣin traditional decoction，decoction prepared by machine and magistral granule（n＝3）

3 讨论

煎药机多剂煎煮法，煎煮、分装一次完成，不能完全按照传统的煎药方法进行二次煎煮，对于先煎、后下等特殊要求也无法满足；且由于机器管道内和药材残渣中会存留药液，不可避免地使药液受到一定损失；另外，受操作人员的技术影响，导致不同批次含量差异较大。因此，煎药机生产厂家应完善煎药机的功能，使其更加符合传统煎药的程序。有研究表明，中药煎药机在115℃、0.7 kg·cm－2压力下煎煮效果好、煎出率高[3]，但又不符合“煎剂应常温常压煎煮”的要求。故煎药机多剂煎煮法还有待于进一步研究改进。

虽然配方颗粒中黄芪甲苷含量较高，但配方颗粒没有了合煎的程序，而中药的药效是一个复杂的过程，某种化学成分在合煎时可能会出现或消失，所以不能简单地以某一种或几种成分的含量高低作为判断依据。关于传统煎剂与机制煎剂、配方颗粒的比较，应继续进行药效、药理及临床方面的研究，以全面评估其优劣。

[1]唐进法，李学林.煎药器具对肉桂中桂皮醛煎出量的影响研究[J].中国药房，2010，21（31）：2900.

[2]杨璐璐，秦兴卫，田梅兰，等.3种方法制备中药煎剂的对比研究[J].中国药房，2000，11（1）：47.

[3]宋小勇，应裕国，张树尧，等.中药煎药机的煎煮条件研究[J].时珍国医国药，2000，11（9）：782.