夏桑菊颗粒快速检验方法探讨

汪文峰(天门市黄潭镇卫生院药剂科，湖北 天门 431700)

周 芳(十堰市中医医院药剂科，湖北 十堰 442011)

陈银华(十堰市食品药品监督检验所，湖北 十堰 442000)

夏桑菊颗粒快速检验方法探讨

汪文峰(天门市黄潭镇卫生院药剂科，湖北 天门 431700)

周 芳(十堰市中医医院药剂科，湖北 十堰 442011)

陈银华(十堰市食品药品监督检验所，湖北 十堰 442000)

目的：建立夏桑菊颗粒的快速检验方法。方法：对4批不同厂家、批号的夏桑菊颗粒进行实验，在卫生部中药成方制剂收载的检验标准的基础上对鉴别项化学反应及薄层色谱提取方法、溶剂和展开系统进行了改进。结果：改进后的检验方法简便、快速，经济、环保，结果更加明显。结论：该方法适合于夏桑菊颗粒的快速筛查。

夏桑菊颗粒；快速检验；熊果酸

夏桑菊颗粒收载于《卫生部药品标准》中药成方制剂第15册，具有清肝明目、疏风散热、除湿痹、解疮毒的功能。用于风热感冒、目赤头痛、高血压、头-晕耳鸣、咽喉肿痛、疔疮肿毒等症状，并可作清凉饮料[1]。处方为夏枯草500g、桑叶175g、野菊花80g，经加工制成1000g颗粒，夏枯草为主药。笔者在原检验标准的基础上，对夏桑菊颗粒的快速检验方法进行了探讨。

1 材料与试剂

共收集4个厂家的4批样品：四川金药师制药有限公司，批号：090501；四川菲德力制药有限公司，批号：100308；太极集团四川绵阳制药有限公司，批号：55100019；四川蜀中制药有限公司，批号：090104。

阴性对照用野菊花药材：亳州宏宇饮片厂，产地湖北，批号100813；桑叶：亳州市永刚饮片厂，产地湖北，批号091227。

熊果酸对照品：中国药品生物制品检定所，批号742-8701，鉴别用。硅胶G薄层预制板购自青岛海洋化工厂分厂。试验所用试剂均为分析纯。

2 方 法

2.1鉴别一的改进

原标准收载方法：取本品5g，置乳钵中研细，移至锥形瓶中，加乙醇25ml，置水浴上微热半小时，滤过，滤液置蒸发皿中，置水浴上蒸干，滴加三氯化锑饱和的氯仿溶液，再蒸干，即显紫褐色。

改进后的方法：取本品20g，研细，加乙醇约15～20ml(以控制滤液约2ml为度)，研磨5min，滤过，取滤液1～2滴，点于滤纸上，吹干，加三氯化铝试液1～2滴，吹干，置紫外光灯(365nm)下观察，显黄绿色荧光。

2.2鉴别二的改进

原标准收载方法：取样品20g置于磨口三角烧瓶中，加水100ml，盐酸15ml，置水浴中加热回流2h，取出，滤过，弃去滤液，残渣挥干，用乙醚振摇提取3次，每次25ml，合并乙醚提取液，回收尽乙醚，残渣用乙醚2ml溶解，作为供试品溶液。另取熊果酸对照品,加乙醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液15μl、对照品溶液2μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以环己烷-氯仿-醋酸乙酯-冰醋酸(20∶5∶8∶0.5)为展开剂，展开，取出，凉干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在100℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。

改进后方法的不同处如下：取本品20g，研细，加乙醇约15～20ml(以控制滤液约2ml为度)，研磨5min，滤过，滤液作为供试品溶液。展开剂改为环己烷-醋酸乙酯-冰醋酸(20∶10∶0.5)。喷显色剂后，热风吹至斑点显色清晰。其它同原标准。

2. 3阴性对照溶液的制备

按样品的制备工艺，从中除去夏枯草药材，制得阴性样品，同供试品溶液的制备方法制得阴性对照溶液。

3 鉴别试验结果

3.1鉴别一改进试验结果

按改进后的方法，鉴别一改进试验结果见图1。

图1 鉴别一改进试验结果

3.2鉴别二改进试验结果

按改进后的方法，对收集到的4批夏桑菊颗粒和自制的阴性对照溶液进行实验，结果斑点清晰，易于辨别，阴性无干扰，能满足快速检验的要求。见图2。

图2 鉴别二改进试验结果

4 讨 论

4.1在鉴别一中改用三氯化铝反应

在原标准鉴别一中，三氯化锑反应主要是用于在无水条件下检测萜类、甾体和黄酮类化合物，属通用型显色剂，专属性相对较差。另外，三氯化锑高毒且有强腐蚀性，遇水强烈反应产生氯化氢并生成不溶于水的三氧化二锑，粘附于玻璃器皿壁，试验完成后不易清洗。夏枯草果穗中主要含熊果酸、齐墩果酸和β-香树脂醇等三萜类化合物，其中熊果酸含量较高。夏桑菊颗粒的三味药中均含有较多黄酮及其苷类成分，桑叶中含有芸香苷、槲皮素、异槲皮苷等，野菊花中含有刺槐素、木犀草素及其苷类等，夏枯草中含有芦丁、异槲皮苷、木犀草素、夏枯草苷等[2]。因此笔者将鉴别一改为三氯化铝反应，用于检测黄酮类化合物更有针对性。该方法操作简便快速，反应明显，空白无干扰，重现性好。

4.2鉴别二中薄层鉴别提取溶剂及方法的选择

按中药成方制剂中的方法制备供试品，加盐酸处理后的样品，弃去滤液，残渣含大量水，很难挥干。用乙醚振摇提取，不易提取充分，而且合并的乙醚提取液因含有水分而不易蒸干，容易导致最后制得的供试品溶液中熊果酸含量偏低，薄层层析后供试品色谱中，在与熊果酸对照品色谱相应的位置上，无斑点出现或仅限淡黄色斑点，需加大数倍的点样量才能出现与熊果酸对照品色谱相应的红色斑点。而且残渣最后用2ml乙醚溶解作为供试品溶液，乙醚沸点低，挥发快，使点样量不易控制，污染大。

为了筛选出简便快捷环保的提取方法，比较了乙醚超声提取[3]、无水乙醇超声提取[4]、乙醇超声提取和乙醇研磨提取等方法，几种方法差异不大，考虑快速、简便的原则，我们采取研磨的方法。在溶剂的选择上，综合考虑廉价、易得、环保、方便的原则，最终选择乙醇作为提取和定容溶剂。

提取溶剂加入量的选择：现行国家标准多采用充分加入溶剂提取，滤液蒸干,定量溶解的办法解决这一问题，而运用于快检中，显然过于烦琐。为此,提出了控制滤出量的思路，根据样品的实验情况，给出一定的加液范围，控制滤出量在2ml左右，从而控制供试品溶液的浓度相对稳定[5]。在实际操作过程中，研磨后静置一会儿，取上清液部分过滤，较容易滤出。

4.3展开剂的选择

实验比较了环己烷-氯仿-醋酸乙酯-冰醋酸(20∶5∶8∶0.5)[1]、甲苯-乙酸乙酯-甲酸(20∶4∶0.5)[6]、异辛烷-苯-氯仿-醋酸乙酯-甲酯(6∶3∶1.5∶3∶0.5)[3]、环己烷-醋酸乙酯-冰醋酸(20∶10∶0.5)等展开剂，展开效果均较好。研究过程充分考虑到环保要求，决定在原标准的展开系统基础上进行微调，除去氯仿，调节展开剂组分比例，最终确定展开剂为环己烷-醋酸乙酯-冰醋酸(20∶10∶0.5)，系统展开速度快，而且也符合环保要求，并且Rf值适中，斑点清晰，易于辨别，重现性好。

[1]中华人民共和国卫生部药典委员会.中华人民共和国卫生部药品标准——中药成方制剂[S]. 15册. 1997：164.

[2]肖培根. 新编中药志[M]. 北京：化学工业出版社，2008：483.

[3]赵霞，尚桂丽. 夏桑菊颗粒薄层鉴别提取方法的改进[J]. 现代医药卫生，2009，25(5)：695-696.

[4]肖东华，吕越. 夏桑菊颗粒有效成分测定中薄层色谱鉴别法的改进[J]. 河南中医学院学报，2003，18(4)：34-35.

[5]薛玉梅，黄丽丹，王鼎. 六味地黄丸系列中成药快检方法研究[J]. 药物分析杂志，2009，29(2)：282-284.

[6]刘莉，张翔. 降糖宁胶囊薄层鉴别方法的研究[J]. 黑龙江医药，2007，20(1)：18-19.

[编辑] 一 凡

R282.7

A

1673-1409(2012)04-R069-03

10.3969/j.issn.1673-1409(R).2012.04.034

2012-02-26

汪文峰(1977-)，男，湖北天门人，主管中药师，主要从事医院中药学工作。