浙江纯种犬在9个STR基因座上的遗传多态性研究*

□张幼芳

（浙江警察学院，浙江 杭州 310053）

浙江纯种犬在9个STR基因座上的遗传多态性研究*

□张幼芳

（浙江警察学院，浙江 杭州 310053）

犬与人类关系密切，涉及犯罪现场的犬的生物性物证可以作为法庭证据。为积累犬生物物证个体识别和亲子鉴定的群体遗传学数据，本文采用美国AB公司的犬基因分型试剂盒，调查浙江地区72头纯种犬的9个STR基因座（PEZ1、FHC2054、FHC2010、PEZ5、PEZ20、PEZ12、PEZ6、PEZ8、FHC2079）的遗传多态性，9个STR基因座的累积个体识别率（TDP）为0.999991823，累积非父排除率（CPE）为0.975,平均杂合度和多态信息量分别为0.515和0.563，偶合率为8.177×10-6，表明9个STR基因座可用于犬的个体识别和亲子鉴定。

犬；浙江纯种犬；STR；遗传多态性；个体识别；亲权鉴定

在案件侦办中，动物物证的价值已逐渐被人们所认识和利用，涉及犯罪现场的动物物证可以作为法庭证据。犬为国内外最常见的宠物，与人类生活密切相关，因而涉及犬生物性物证的案件时有发生，国内外均有将犬的生物性物证作为定案证据的报道[1,2,3]，对该类物证的应用需要群体遗传学基础数据。本文应用美国AB公司的犬基因分型试剂盒，对浙江地区72头纯种犬的9个STR基因座进行遗传学调查，为犬生物性物证的个体识别和亲权鉴定提供群体遗传学基础数据。

一、材料

（一）实验样本。72头纯种犬来自浙江省数个警犬基地，包括史宾格犬14头，拉布拉多犬15头，德国牧羊犬36头，昆明犬7头，取唾液样本，-20℃保存。

（二）主要仪器。ABI 9700 PCR扩增仪，ABI 3100-A遗传分析仪。

（三）主要试剂。AB公司犬基因分型试剂盒(Canine Genotyping Kit)，内含10对引物混合物，dNTP混合物，MgCl2，TaqGold DNA聚合酶，PCR缓冲液，犬DNA阳性对照。

二、方法

（一）提取DNA。用常规Chelex-100法提取犬唾液样本DNA。

（二）PCR扩增。使用Canine Genotyping Kit(美国AB公司)扩增模板DNA,采用10μl反应体系，内加 PCR缓冲液 1.4μl，MgCl2 0.36μl，dNTP 2.2μl，TaqGold DNA聚合酶0.36μl，引物混合物2.8μl，1 μl模板DNA,用蒸馏水补足到10μl。

扩增条件为预变性95℃10min，共35个热循环，前20个循环的参数为95℃30sec，58℃30sec，72℃1min，后15个循环的参数为95℃30sec，56℃sec，72℃1min，72℃30min,4℃保存。

（三）扩增产物检测。取1μlPCR扩增产物加入12μl去甲酰胺和ROX-500内标的混合物，PCR扩增产物在 3100-A型遗传分析仪上电泳检测，GeneMapper ID v3.2软件基因分型，记录样本各基因座的等位基因。

（四）统计学分析。用GENEPOP软件进行遗传学数据统计，有关数据计算参见文献［4］。

三、结果

（一）等位基因及基因频率。72头纯种犬的9个 STR基因座所检测到的等位基因和基因频率见表1，图1为一头犬的9个STR基因座检测图谱。

表1 72头纯种犬在9个STR基因座的等位基因及其频率分布

图1 一头犬的9个STR基因座检测图谱

（二）统计学分析。9个STR基因座的杂合度（H）、偶合率（Pm）、个体识别率（DP）、多态信息含量（PIC）、非父排除率（PE）见表2,9个STR基因座的累积个体识别率（TDP）为0.999991823，累积非父排除率（CPE）为0.975，偶合率为8.177×10-6。

表2 9个STR基因座的H、Pm、DP、PIC、PE、TDP、CPE

四、讨论

通过分析72头纯种犬的9个STR基因座的遗传多态性，发现FHC2054、FHC2010、PEZ6、PEZ8等4个基因座PIC＞0.5，属于高度多态性基因座，其余PEZ1、PEZ5、PEZ20、PEZ12、FHC2079等6个基因座0.25＜PIC＜0.5，为中度多态性基因座，9个STR基因座的平均杂合度和多态信息量分别为 0.515和0.563,适于犬的个体识别和亲权鉴定，研究结果与王海生等报道[5]基本一致。

研究表明，与用于人个体识别的STR商用试剂盒相比较，犬的基因分型试剂盒个体识别率相对较低，这可能与我们进行群体调查的样本有关，一是样本量过小，二是个体间可能存在亲缘关系。由于犬近亲繁殖现象明显，要准确进行犬的个体识别和亲权鉴定，应探索更多多态性高的STR基因座。

［1］Savolainen P,Lundeberg J.Forensic ev idence based on mtDNA from dog and wolf hair.J Forensic Science［J］.1999, 44(1):77-81.

［2］王海生,王祥,葛台明,等.利用犬STR基因座检验认定犬精斑1例［J］.刑事技术,2004,(1):56.

［3］Eichmann C,Berger B,Reinhold M,et al.Canine specific STR typing of saliva traces on dog bite wounds［J］.Int J legal Med，2004,118:337-342.

［4］Raymond Mamp;Rousset F.Genepop (version 1.2): population genetics software for exact tests and ecumenicism［J］.Journal of Heredity.1995,86:248-249.

［5］王海生,王祥,张文平,等.湖北地区德国牧羊犬10个微卫星DNA基因座的遗传多态性研究［J］.刑事技术,2003,(2):12-14.

Q523

A

1674-3040（2012）02-0046-03

2012-03-06

张幼芳，浙江警察学院刑事科学技术系教授。

*本文系浙江省教育厅科研项目（项目编号：Y20084732）之研究成果。

（责任编辑：王玉叶）