TSHR和MMP-9在甲状腺乳头状癌组织中的表达及其临床意义

王朝晖，李玉中，宋丽媛，王乃玉

(大连医科大学 附属第二医院1.实验中心，2.检验科，3.病理科，辽宁 大连 116027)

TSHR和MMP-9在甲状腺乳头状癌组织中的表达及其临床意义

王朝晖1，李玉中2，宋丽媛3，王乃玉3

(大连医科大学 附属第二医院1.实验中心，2.检验科，3.病理科，辽宁 大连 116027)

［目的］探讨甲状腺乳头状癌(PTC)组织中促甲状腺激素受体(TSHR)与基质金属蛋白酶(MMP-9)的表达及其与病理参数之间的关系。［方法］应用免疫组织化学(SP)法检测56例PTC，30例结节性甲状腺肿及11例正常甲状腺组织标本的TSHR和MMP-9蛋白表达。［结果］TSHR蛋白在PTC、结节性甲状腺肿和正常甲状腺组织的表达率分别为91.07%、70.00%和27.27%，三组间比较差异有显著性意义(P＜0.05);TSHR在有淋巴结转移PTC组与无淋巴结转移组的表达率分别为76.92%与95.35%(P＞0.05);在Ⅲ～Ⅳ期与Ⅰ～Ⅱ期的表达率分别为89.66%与92.60%(P＞0.05)。MMP-9蛋白在PTC、结甲和正常甲状腺组织中表达率分别为88.37%、36.67%和0%，三组间比较差异有显著性意义(P＜0.05);在有淋巴结转移PTC组与无淋巴结转移PTC组的表达率分别为92.31%与79.07%(P＞0.05)，在Ⅲ～Ⅳ期与Ⅰ～Ⅱ期的表达率分别为89.66%与74.07%(P＞0.05)。TSHR、MMP -9的表达与患者的性别、年龄及肿瘤大小均无相关性(P＞0.05)。［结论］TSHR蛋白高表达与甲状腺乳头状癌的发生有关，可能是甲状腺癌发生的一个早期标志;MMP-9高表达可能与甲状腺癌细胞侵袭和转移密切相关。

甲状腺乳头状癌;TSHR;MMP-9;免疫组织化学法

甲状腺癌的发生发展是一个受多因素影响，表现为多步骤的复杂过程，涉及大量的相关基因结构和表达调控的改变。促甲状腺激素受体(TSHR)是调控甲状腺细胞生长、分化的主要受体，其异常表达是获得性、遗传性或先天性甲状腺疾病的重要原因之一［1］。MMP-9是基质金属蛋白酶(MMPs)家族成员之一，是降解细胞外基质(ECM)的主要酶类，其主要作用是降解ECM，分解基底膜中的纤维连接蛋白和层粘连蛋白［2］。肿瘤细胞通过分泌基质金属蛋白酶来水解基底膜和基质中的Ⅳ型胶原等成分，破坏基底膜，侵入小血管和淋巴管而造成肿瘤扩散［3］。本实验通过检测甲状腺乳头状癌组织TSHR、MMP-9蛋白表达，旨在探讨TSHR、MMP-9与肿瘤发生发展之间的关系。

1 材料和方法

1.1 临床资料

收集2010年1月—12月大连医科大学附属第二医院手术切除的甲状腺乳头状癌(PTC)、结节性甲状腺肿(简称结甲)和正常甲状腺组织(PTC根治术取出的患者另一侧正常甲状腺)蜡块各56、30和11例，56例癌症患者中男性18例，女性38例，年龄20～74岁，中位年龄53岁。有淋巴结转移13例，无淋巴结转移43例。Ⅰ～Ⅱ期27例，Ⅲ～Ⅳ期29例。患者术前均未进行放化疗和生物治疗。

1.2 方 法

用免疫组织化学法检测97例标本TSHR和MMP-9蛋白的表达，TSHR抗体购自武汉博士德公司，使用浓度1∶100;MMP-9抗体购自Neomarkers公司，工作浓度1∶100，操作步骤按免疫组化试剂盒要求进行，组织切片在柠檬酸盐缓冲液中用微波进行抗原热修复100℃ 10 min。用磷酸盐缓冲液(PBS)代替一抗做空白对照。免疫组化(Streptavidin Peroxidase，SP)试剂盒和DAB显色剂均购自北京中山试剂有限公司。

1.3 结果判断

TSHR以胞膜或胞浆出现棕黄色为阳性细胞。随机计数10个高倍视野(400×)下的肿瘤细胞数，阳性细胞＞20%为阳性表达;MMP-9以胞浆出现棕黄色为阳性细胞。随机计数10个高倍视野(400×)下的肿瘤细胞数，阳性细胞＞10%为阳性表达。

1.4 统计学方法

应用SPSS13.0统计软件包，两组或多组计数资料比较采用χ2检验进行统计学分析，检验水准α=0.05。用Spearmen相关性分析。

2 结 果

2.1 TSHR与MMP-9蛋白在PTC、结甲和正常甲状腺组织的表达

TSHR蛋白在PTC、结甲和正常甲状腺组织的表达率分别为 91.07%、70.97% 和 27.27%，三组间比较差异有显著性意义(P＜0.05);MMP-9蛋白在PTC、结甲和正常甲状腺组织的表达率分别为88.37%、36.67%和0%。三组间比较差异有显著性意义(P＜0.05)。TSHR和MMP-9免疫组化染色图片如图1。

2.2 TSHR、MMP-9蛋白表达与PTC患者病理参数的关系

TSHR、MMP-9蛋白表达与PTC患者的性别、年龄、肿瘤大小、淋巴结转移及分期差异均无显著性意义。见表1。

2.3 TSHR与MMP-9蛋白表达的相关性

TSHR与MMP-9的相关性分析显示，二者表达相关性无显著性意义。Spearmen相关系数r=0.031，P=0.822 ＞0.05，见表 2。

3 讨 论

甲状腺癌是内分泌系统最常见的恶性肿瘤之一，不同的组织类型其恶性程度虽不相同，但都具有侵袭性强和易转移的特点，尤其PTC多伴有淋巴结转移。转移和复发是导致治疗失败和患者死亡的主要原因。TSHR为甲状腺滤泡上皮细胞膜受体，促甲状腺激素通过与TSHR结合调控甲状腺的功能和促进甲状腺滤泡细胞的生长，TSHR在甲状腺的调控中起主导作用。研究发现，PTC组织中TSHR的表达明显高于结甲和正常甲状腺组织，在淋巴结转移组的表达与无淋巴结转移组差异无显著性意义。与王志峰［4］报道蛋白的表达相一致。而与戴亚丽［5］报道的蛋白表达结果相反。另外本研究发现，Ⅲ～Ⅳ期的表达低于Ⅰ～Ⅱ期，这说明TSHR的高表达可能与甲状腺乳头状癌的发生有关，而与肿瘤恶性发展程度无关。如果能抑制甲状腺滤泡上皮细胞膜促甲状腺激素受体的过度表达将有可能阻滞甲状腺乳头状癌的发生。

图1 TSHR和MMP-9蛋白在PTC、结甲和正常甲状腺组织的表达(免疫组化 ×200)Fig 1 Expressions of TSHR and MMP-9 in PTC，nodular goiter and normal thyroid tissues(SP ×200)

表1 TSHR、MMP-9蛋白表达与PTC患者病理参数的关系Tab 1 The expressions of TSHR and MMP-9 in PTC tissues and their relation with clinicopathologic

表2 TSHR与MMP-9蛋白表达的相关性Tab 2 The relation of TSHR with MMP-9

MMP-9是肿瘤细胞分泌或诱导宿主细胞产生的能降解几乎所有基底膜Ⅳ型胶原的蛋白酶。其通过降解肿瘤细胞基膜和包绕肿瘤的基质，突破基质屏障［6］。肿瘤细胞浸润是通过血管内皮下基底膜及包膜的胶原降解而完成的，是肿瘤细胞血行转移的形成途径［7］。本研究发现MMP-9蛋白在PTC的表达明显高于结甲和正常甲状腺组织，且在有淋巴结转移组的表达92.31%高于无淋巴结转移组79.07%，在Ⅲ～Ⅳ期的表达89.66%高于Ⅰ～Ⅱ期表达74.07%，虽然结果差异不明显，这可能与病例数较少有关，但至少说明乳头状甲状腺癌的浸润和转移可能与MMP-9大量产生有关。如果能抑制MMP-9的产生，将会减少乳头状甲状腺癌细胞的转移。如果能寻找干扰二者蛋白表达的药物，将有可能抑制甲状腺癌细胞的生长、浸润和转移。

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［1］程维刚，殷德涛，卢秀波，等.THSR、ER与 CyclinD1在分化型甲状腺癌中的表达及其意义［J］.郑州大学学报，2005，5(4):353 -376.

［2］Yang J H，Briggs W H，Libby P.Small mechanical strains selectively suppress matrix metallpprotainase-1 expression by human vascular smooth muscle cells［J］.Biol Chem，2003，273(11):6550 -6555.

［3］唐华美，胡宏慧，金宇飚，等.胃癌中 MMP-2表达与TNM分期和淋巴结转移的相关性研究［J］.外科理论与实践，2003，8(3):233 -236.

［4］王志峰，刘勤江，廖世奇，等.甲状腺癌NIS和TSHR表达的矛盾性及非相关性［J］.肿瘤防治研究，2011，38(8):909-913.

［5］戴亚丽，叶静，张帆，等.乳头状甲状腺癌抑癌基因TSHR、P16和RAS启动子甲基化研究［J］.中华内分泌代谢杂志，2010，26(5):381-384.

［6］Maeta H，Ohgi S，Trada T.Protein expression of matrix matalloprotei nases 2 and 9 and tissue inhibitors of matalloproteinases 1 and 2 in papillary thyroid carcinomas［J］.Virchows Arch，2001，438(5):121 -128.

［7］李慧云，吴增常.五种基质金属蛋白酶基因在乳头状甲状腺癌中的表达［J］.中华内分泌代谢杂志，2003，19(6):449-451.

Clinical significances of the TSHR and MMP-9 expressions in papillary thyroid carcinoma

WANG Zhao-hui1，LI Yu-zhong2，SONG Li-yuan3，WANG Nai-yu3
(1.Laboratory Center，2.Department of Clinical Laboratory，3.Department of Pathology，the Second Affiliated Hospital of Dalian Medical University，Dalian116027，China)

Abstract:［Objective］To evaluate the expressions of thyroid stimulating hormone receptor(TSHR)and matrix metalloproteinase-9(MMP-9)in papillary thyroid carcinoma(PTC)and their clinical significances.［Method］The SP immunohistochemistry was used to detect the expressions of TSHR and MMP-9 protein in 56 cases of PTC，30 cases of nodular goiter and 11 cases of normal thyroid tissue.［Results］The positive expression rate of TSHR in PTC was significantly higher than those of nodular goiter and normal thyroid tissue(P＜0.05).and the rates in PTC with lymph node metastasis and without were 76.92%and 95.35%respectively(P＞0.05)，The rates in stageⅢ-Ⅳand stageⅠ-Ⅱwere 89.66%and 92.60%respectively(P＞0.05);The positive expression rate of MMP -9 protein in PTC was significantly higher than those of nodular goiter and normal thyroid tissue(P＜0.05).and the rates in PTC with lymph node metastasis and without were 92.31%and 79.07%respectively(P＞0.05)，and the rates in stage Ⅲ-Ⅳand stageⅠ-Ⅱwere 89.66%and 74.07%respectively(P＞0.05).Their expressions of both TSHR and MMP -9 were not related to sex，age and tumor size of the patient(P＞0.05).［Conclusion］Over-expression of TSHR might be related to the development of PTC and become a early marker of the thyroid carcinoma.The over-expression of MMP -9 could be related to invasion and metastasis.

Key words:papillary thyroid carcinoma;TSHR;MMP-9;immunohistochemistry

R736.1

A

1671-7295(2012)05-0443-03

辽宁省大连市科技计划基金资助项目(2011E15SF107)

2012-04-15;

2012-09-03

王朝晖(1963-)，女，辽宁大连人，副主任技师。E-mail:dlwangzhaohui@163.com

李玉中，主任技师。E-mail:dlliyuzhong@126.com