脑源性神经营养因子基因多态性与散发性多发性硬化的关联研究

季晓飞，董惠洁

(1.大连医科大学附属第一医院神经内科，辽宁大连 116011;2.大连医科大学附属第二医院心内科，辽宁大连 116027)

脑源性神经营养因子基因多态性与散发性多发性硬化的关联研究

季晓飞1，董惠洁2

(1.大连医科大学附属第一医院神经内科，辽宁大连 116011;2.大连医科大学附属第二医院心内科，辽宁大连 116027)

［目的］探讨脑源性神经营养因子(BDNF)基因多态性与中国北方汉族人群中的散发性多发性硬化症的关联。［方法］经过HapMap和Haploview分析，选取tagSNP并通过PCR-RFLP方法，对50例非家族遗传性多发性硬化患者和50例健康对照者的BDNF基因多态性分型进行病例对照研究。［结果］中国北方汉族人群BDNF基因存在一个基因连锁区域，选取rs6265、rs2049046和rs962369三个SNP作为tagSNP。在病例对照研究中，tagSNP分析及rs6265与rs2049046间的Haploview分析，P均＞0.05。［结论］脑源性神经营养因子基因多态性与散发性多发性硬化无明显关联。

BDNF;多发性硬化;基因多态性

多发性硬化(MS)为遗传相关的神经系统炎症性自身免疫性脱髓鞘疾病，中国北方人群发病率为5/10万。家系研究及双生子研究表明其同卵双生子发病一致率为15.9% ～31%［1］。目前有研究表明作为中枢神经系统髓鞘组成细胞的少突胶质细胞和起中枢神经营养支持的小胶质细胞在多发性硬化的发病机制中起到关键作用［2-3］。小胶质细胞在少突神经胶质细胞受到自身免疫性攻击后明显增加BDNF的释放，促进少突胶质细胞的保护及修复［4］。因此，BDNF的表达和功能异常有可能导致神经髓鞘保护及修复降低，造成中枢神经系统的炎症性自身免疫损害，增加散发性多发性硬化症的发病率。本研究通过对散发性多发性硬化患者和健康对照者的病例对照研究，探讨BDNF基因多态性在散发性多发性硬化中的神经保护及修复作用。

1 资料与方法

1.1 临床资料

病例组的散发性多发性硬化50例，均为2007年7月—2010年12月大连医科大学附属第一医院神经内科住院患者，无家族性多发性硬化症遗传病史，祖籍均为山东省或辽宁省汉族人群。多发性硬化符合2005年修正的McDonald诊断标准，对照组50例来自大连医科大学附属第一医院健康职工及家属，为性别、年龄、教育水平与病例组相匹配的与多发性硬化无关的健康人群(表1)。

表1 病例组与健康对照组的年龄及性别匹配Tab 1The age and sex between the MS and controls

1.2 标本采集

采取受试者静脉血2 mL，并通过基因组DNA试剂盒提取基因组DNA备用。

1.3 tagSNP 选择

通过 HapMap数据库(Http://www.hapmap.org)并通过Haploview ver.3.2软件定义LD连锁为D’＞0.80 和 r2＞0.80，通过 LD 分析汉族人群所有BDNF的SNP选取tagSNP。Haplotype tagSNPs被定义为组合分型占到90%以上的Haplotype类型，其中单个SNP的最小点突变百分比＞5%。

1.4 基因多态性分析

通过PCR-RFLP分析BDNF的tagSNP，相关引物及限制性内切酶见表2。

表2 tagSNP的引物及内切酶Tab 2 the primers and enzymes of the tagSNPs

1.5 统计学方法

基因多态性分型后各 SNP均经过 Hardy-Weinberg equilibrium(HWE)检验。单个SNP关联分析，检验校正分析和关联分析分别通过SPSS 11.0版本和 COCAPHASE 2.403 版本(http://portal.litbio.org/Registered/Option/unphased)进行分析。通过 SNPSpD 软件(http://genepi.qimr.edu.au/general/daleN/SNPSpD/)进行校正分析。显著性差异统计标准被定位0.05。

2 结 果

2.1 TagSNP 确定

经过Haploview分析中国北方汉民族人群BDNF基因存在一个连锁区域，rs6265和rs2049046作为连锁中的tagSNPs，rs962369作为非连锁中的tag-SNP被进行基因多态性分析(图1)。

图1 BDNF基因连锁区域及tagSNP选择Fig 1 The tagSNPs and the block in BDNF gene polymorphism

2.2 相关性分析

基因多态性在多发性硬化和健康对照组人群中的分型结果列于表3中。分型结果均通过Hardy-Weinberg equilibrium检验为 P＞0.05，在单一 SNP分析及Haplotype分析中，多发性硬化病例组与对照组等位基因的分布无差别(P＞0.05)。

表3 多发性硬化与健康对照组基因多态性分型结果Tab 3 the genotype results between MS and controls

3 讨 论

通过单SNP及Haplotype分析，在本研究中BDNF基因多态性与散发性多发性硬化无明显相关。

脑源性神经生长因子在中枢神经系统损伤后经激活后释放，促进神经元及其轴突的修复及再生，在离体实验中少突胶质细胞损伤后小胶质细胞释放BDNF明显增加［5］，同时在多发性硬化患者的脑脊液及血清生化分析中BDNF的含量与患者的肢体功能恢复程度呈正相关［6］，这些研究结果都提示了BDNF在神经元损失后修复过程中的重要性。但是在本研究中健康对照组与多发性硬化组在BDNF基因多态性并无明显差异，提示BDNF在多发性硬化神经元损害之前并无强化性的神经元保护作用。在欧洲白种人群的研究中也提示了BDNF的Val66Met与多发性硬化的发生无明显相关性［7-8］。

另外，本研究收集到多发性硬化病例均为散发性病例，无多发性硬化家族史，结合国内关于多发性硬化的研究，均提示多发性硬化可能为多基因及环境因素所致疾病，因此，在今后的研究中有必要从更多候补基因及环境等外部因素对该疾病进行进一步研究。

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［1］Montomoli C，Prokopenko I，Caria A，et al.Multiple sclerosis recurrence risk for siblings in an isolated popilation of central Sandinia，Italy ［J］.Genet Epidemiol，2002，22(3):265-271.

［2］Yong VW.Prospects of repair in multiple sclerosis［J］.J Neurol Sci，2009，277(Suppl 1):S16 -S18.

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［7］Lindquist S，Schott BH，Ban M，et al.The BDNF -Val66Met polymorphism:implications for susceptibility to multiple sclerosis and severity of disease［J］.J Neuroimmunol，2005，167(1-2):183-185.

［8］Blanco Y，Gomez-Choco M，Arostegui JL，et al.No association of the Val66Met polymorphism of brain-derived neurotrophic factor(BDNF)to multiple sclerosis［J］.Neurosci Lett，2006，396(3):217 -219.

Relationship between brain-deried neurotrophic factor gene polymorphism and sporadic multiple sclerosis

JI Xiao-fei1，DONG Hui-jie2
(1.Department of Neurology，the First Affiliated Hospital of Dalian Medical University，Dalian116011，China;2.Department of Cardiology，the Second Affiliated Hospital of Dalian Medical University，Dalian116027，China)

Abstract:［Objective］To explore the relationship between brain-deried neurotrophic factor(BDNF)gene polymorphism in the Han population in north of China and sporadic multiple sclerosis.［Methods］The tagSNPs were selected by Hap-Map and Haploview.Fifty sporadic multiple sclerosis and 50 controls were analysis by PCR-RFLP.［Results］There was one block in BDNF gene polymorphism of Han population in north China.The rs6265，rs2049046 and rs962369 were selected as tagSNP.The tagSNP and Haploview analysis showed there is no significant association between the multiple sclerosis and controls(P＞0.05).［Conclusion］There is no relationship between BDNF gene polymorphism and sporadic multiple sclerosis.

Key words:BDNF;multiple sclerosis;gene polymorphism

R741.02

A

1671-7295(2012)05-0481-03

2012-04-12;

2012-08-31

季晓飞(1979-)，男，辽宁庄河人，主治医师，博士。E-mail:jixiaofei11@hotmail.com

董惠洁，主治医师。E-mail:donghuijie4@hotmail.com